21，關閉夾具22，使栗12以200mL/分、栗13以450mL/分分別驅動120秒，在存積容器3內追加生理鹽水，在存積容器3內稀釋了細胞懸濁液。接著，以使栗13為450mL/分、栗14為200mL/分的方式設定各自的流速，再次進行了細胞懸濁液的過濾.濃縮。此外，在氣泡傳感器11檢測出了氣泡后，停止栗13以及栗14。
[0208]最后，打開夾具24，關閉夾具23，以成為細胞懸濁液從存積容器3的循環入口 17向細胞懸濁液處理器6的細胞懸濁液導入口 18流動的方向的方式以100mL/分的流速使栗13驅動60秒，使處于存積容器3內、細胞懸濁液處理器6內以及循環回路30內的細胞懸濁液從回收路徑31回收至回收容器5(d)工序)。
[0209]被回收的細胞懸濁液是細胞懸濁液中的不需要的成分減少至目標濃度的細胞濃縮液，在預充、濃縮(b)、以及濃縮停止(c)工序中，空氣未向上述細胞懸濁液處理器6內侵入，因此能夠不損失細胞地進行了高精度的濃縮。
[0210]將處理后的細胞生存率除以處理前的細胞生存率所得的細胞生存比率為99%以上，未見細胞的損傷。此外，細胞生存率由公知的方法測定。
[0211](比較例1以及比較例2)
[0212]圖4關于使用記載了概略情況的細胞懸濁液處理系統B而實施的細胞懸濁液的處理進行說明。圖4所示的細胞懸濁液處理系統B除了未在循環回路30的導入用連通管28設置氣泡傳感器11以外，具有與圖1所示的細胞懸濁液處理系統A相同的結構。
[0213]另外，比較例1與比較例2中，使用在與實施例1相同的條件下制成的細胞懸濁液，細胞培養袋使用了不同的袋。
[0214]將細胞懸濁液進入的袋與細胞培養袋連接部1連接，將生理鹽水袋與稀釋液袋連接部2連接。打開夾具21，關閉夾具22，使栗12設定為300mL/分的流速，并使其驅動60秒而將生理鹽水存積于存積容器3。
[0215]接下來，確認打開夾具23，關閉夾具24，將栗13設定為450mL/分，將栗14設定為150mL/分的流速，進行了循環回路30內以及細胞懸濁液處理器6內的預充。此時，栗13的驅動方向成為在細胞懸濁液處理器6內使預充液從上向下流動的方向。使栗13、14驅動100秒后，停止栗13、14。
[0216]接下來打開夾具22，關閉夾具21，從細胞培養袋連接部1將栗12設定為300mL/分的流速，并使其驅動60秒而將細胞懸濁液存積于存積容器3 (a)工序)。
[0217]接下來，以使栗12為200mL/分、栗13為450mL/分、栗14為200mL/分的方式設定流速而使它們驅動，使細胞懸濁液一邊在存積容器3與細胞懸濁液處理器6之間通過循環回路30循環一邊進行濃縮。循環回路30內的通液方向成為從存積容器3的循環入口 17向細胞懸濁液處理器6的細胞懸濁液導入口 18流動的方向(b)工序)。
[0218]氣泡傳感器10檢測出了氣泡后停止栗12。接下來，使栗13以及栗14驅動，對存積容器3內的細胞懸濁液進行濃縮，使栗14驅動70秒后，停止栗13以及栗14(c)工序)。此外，栗14的70秒這樣的驅動時間是考慮栗12、13、14的流速而預料能夠進行理想的濃縮的時間。
[0219]接下來，打開夾具21，關閉夾具22，以使栗12為200mL/分、栗13為450mL/分的方式對流速進行調整，并使它們驅動120秒，在存積容器3內追加生理鹽水，從而稀釋了存積容器3內的細胞懸濁液。接著，以使栗13為450mL/分、栗14為200mL/分的方式設定流速，進行了細胞懸濁液的過濾。使栗12驅動120秒后，停止。
[0220]最后，打開夾具24，關閉夾具23，以100mL/分使栗13向細胞懸濁液從存積容器3的循環入口 17向細胞懸濁液處理器6的細胞懸濁液導入口 18流動的方向驅動60秒，將處于細胞懸濁液處理器6內以及循環回路30內的細胞懸濁液從回收路徑31回收至回收容器5 (d)工序)。
[0221]其結果，比較例1中，在作為b)工序的濃縮工序中，在停止了人栗13以及栗14時，原因不明，但通過栗14在處理時間內過濾的量比設定的流量大，因此成為在循環回路30內未充分充滿液體的狀態，造成使回收的細胞懸濁液中的細胞損失的結果。
[0222]另外，通過相同的處理方法進行的比較例2中，原因不明，但與比較例1相反通過栗14過濾的液體量減少，因此移至通過生理鹽水稀釋的工序前的存積容器3內的液量變多，無法使細胞濃縮液內的不需要成分的量降低至目標濃度。
[0223]附圖標記的說明
[0224]1...細胞培養袋連接部；2...稀釋液袋連接部；3...存積容器；4...廢液容器；5...回收容器；6...細胞懸濁液處理器；7...腔室；8...空氣過濾器；9...氣泡傳感器；10...氣泡傳感器；11...氣泡傳感器；12?14...栗；15...溶液入口 ；16...循環出口； 17...循環入口 ；18...細胞懸濁液導入口 ；19...細胞懸濁液導出口 ；20...濾液用出口；21?25、34、36...夾具；26...預充液袋連接部；27...注入路徑；28...導入用連通管；29...導出用連通管；30...循環回路；31...回收路徑；32...回路；33...回收口 ；35...細胞濃縮液回收口 ；A、A’、A”...細胞懸濁液處理系統；B...比較例1、2所使用的細胞懸濁液處理系統。
【主權項】
1.一種細胞濃縮液的制造方法，使用細胞懸濁液處理系統，該細胞懸濁液處理系統具備: 細胞懸濁液的存積容器，其具有溶液入口、循環出口以及循環入口 ； 細胞懸濁液處理器，其在具有細胞懸濁液導入口、細胞懸濁液導出口以及濾液用出口的容器內填充有中空纖維分離膜，用于從細胞懸濁液過濾液體而進行濃縮； 循環回路，其具有將所述存積容器的循環入口與所述細胞懸濁液處理器的細胞懸濁液導入口連通的導入用連通管、以及將所述細胞懸濁液處理器的細胞懸濁液導出口與所述存積容器的循環出口連通的導出用連通管，用于使細胞懸濁液一邊在存積容器以及細胞懸濁液處理器之間循環一邊進行濃縮； 被濃縮后的細胞濃縮液的回收容器； 回收路徑，其用于將所述存積容器內、所述細胞懸濁液處理器內以及所述循環回路內的細胞濃縮液送至所述回收容器； 注入路徑，其用于向所述存積容器的溶液入口注入溶液；以及檢測單元，其用于檢測所述存積容器內或者循環回路的導入用連通管內的細胞濃縮液的液量， 所述細胞濃縮液的制造方法的特征在于， 包括: a)從所述溶液入口將細胞懸濁液供給到存積容器而進行存積的工序； b)使存積容器內的細胞懸濁液經由循環回路的導入用連通管朝細胞懸濁液處理器流通，然后經由循環回路的導出用連通管向存積容器循環而將細胞懸濁液濃縮的工序； c)通過對存積容器內或者循環回路的導入用連通管內的細胞濃縮液的液量進行檢測，使所述b)工序停止的工序；以及 d)使所述存積容器內、所述細胞懸濁液處理器內以及循環回路內的細胞濃縮液經由回收路徑送至回收容器而進行回收的工序。2.根據權利要求1所述的制造方法，其特征在于， 在c)工序后，從所述存積容器的溶液入口將稀釋液注入存積容器而將存積容器內的細胞濃縮液稀釋之后，進一步反復b)工序以及c)工序。3.根據權利要求1或2所述的制造方法，其特征在于， 在a)工序前，從溶液入口注入預充液，進行預充。4.根據權利要求1?3中任一項所述的制造方法，其特征在于， 并行實施a)工序和b)工序。5.根據權利要求1?4中任一項所述的制造方法，其特征在于， 檢測循環回路內的液量的檢測單元是所述循環回路的導入用連通管所具備的氣泡傳感器。6.根據權利要求1?4中任一項所述的制造方法，其特征在于， 檢測存積容器內的液量的檢測單元是在與存積容器平行且與存積容器下部連通的回路上所具備的一個以上的氣泡傳感器。7.根據權利要求6所述的制造方法，其特征在于， 在與所述存積容器下部連通的回路具備腔室。8.根據權利要求1?7中任一項所述的制造方法，其特征在于， 在所述注入路徑具備氣泡傳感器。9.一種細胞懸濁液處理系統，其特征在于，具備: 細胞懸濁液的存積容器，其具有溶液入口、循環出口以及循環入口 ； 細胞懸濁液處理器，其在具有細胞懸濁液導入口、細胞懸濁液導出口以及濾液用出口的容器內填充有中空纖維分離膜，用于從細胞懸濁液過濾液體而進行濃縮； 循環回路，其具有將所述存積容器的循環入口與所述細胞懸濁液處理器的細胞懸濁液導入口連通的導入用連通管、以及將所述細胞懸濁液處理器的細胞懸濁液導出口與所述存積容器的循環出口連通的導出用連通管，用于使細胞懸濁液一邊在存積容器以及細胞懸濁液處理器之間循環一邊進行濃縮； 回收容器，其回收被濃縮后的細胞濃縮液； 回收路徑，其用于將所述存積容器內、所述細胞懸濁液處理器內以及所述循環回路內的細胞濃縮液送至所述回收容器； 注入路徑，其用于向所述存積容器的溶液入口注入溶液； 檢測單元，其用于檢測所述存積容器內或者循環回路的導入用連通管內的細胞濃縮液的液量；以及 控制單元，其通過所述檢測單元對細胞濃縮液濃縮至規定的液量進行檢測，使細胞濃縮液從所述存積容器朝細胞懸濁液處理器的輸送停止。10.根據權利要求9所述的細胞懸濁液處理系統，其特征在于， 檢測循環回路內的液量的檢測單元是所述循環回路的導入用連通管所具備的氣泡傳感器。11.根據權利要求9所述的細胞懸濁液處理系統，其特征在于， 檢測存積容器內的液量的檢測單元是在與存積容器平行且與存積容器下部連通的回路上所具備的氣泡傳感器。12.根據權利要求11所述的細胞懸濁液處理系統，其特征在于， 在與所述存積容器下部連通的回路具備腔室。13.根據權利要求9?12中任一項所述的細胞懸濁液處理系統，其特征在于， 在所述注入路徑具備氣泡傳感器。14.根據權利要求9?13中任一項所述的細胞懸濁液處理系統，其特征在于， 所述溶液入口、循環出口以及循環入口全部位于存積容器的下部。15.根據權利要求9?14中任一項所述的細胞懸濁液處理系統，其特征在于， 在存積容器上部附近具備通氣口，使存積容器內成為大氣敞開系統。
【專利摘要】一種細胞濃縮液的制造方法，使用細胞懸濁液處理系統，該細胞懸濁液處理系統具備：細胞懸濁液的存積容器，其具有溶液入口、循環出口以及循環入口；細胞懸濁液處理器，其在具有細胞懸濁液導入口、細胞懸濁液導出口以及濾液用出口的容器內填充有中空纖維分離膜，用于從細胞懸濁液過濾液體而進行濃縮；循環回路，其用于使細胞懸濁液一邊在存積容器以及細胞懸濁液處理器之間循環一邊進行濃縮；被濃縮后的細胞濃縮液的回收容器；回收路徑，其用于將細胞濃縮液送至回收容器；注入路徑，其用于向存積容器的溶液入口注入溶液；以及檢測單元，其用于檢測存積容器內或者循環回路的導入用連通管內的細胞濃縮液的液量，通過對存積容器內或者循環回路的導入用連通管內的細胞濃縮液的液量進行檢測而使通液停止，從而能夠減少細胞的損失地制造清洗除去了懸濁液中的不需要的成分的細胞懸濁液。
【IPC分類】A61M1/18, C12M3/06, C12M1/00, C12M3/02
【公開號】CN105408467
【申請號】CN201480041539
【發明人】谷口修平, 梅田伸好, 坂下敬章, 櫻井宙
【申請人】株式會社鐘化
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2014年7月16日
【公告號】EP3026107A1, US20160168529, WO2015012174A1