細胞濃縮液的制造方法以及細胞懸濁液處理系統的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及使用具有填充了中空纖維分離膜的細胞懸濁液處理器的細胞懸濁液處理系統來對細胞懸濁液進行濃縮的技術。
【背景技術】
[0002]在細胞醫療的領域中將用于治療的細胞投藥于患者的情況下，存在從生物體采取后馬上投藥于患者的情況，也存在暫時在生物體外培養后再次投藥于患者的情況。一般，用于這些治療的細胞通過適于治療的懸濁液清洗，經過濃縮為適于投藥的液量等細胞調制過程后，進行移植。清洗是指將懸濁有細胞的體液、培養基等置換為生理鹽水、輸液等。通過對細胞濃縮液進行反復進行稀釋與濃縮的清洗處理，能夠除去細胞濃縮液中的不需要的異物，從而能夠在向人、動物的移植中適當地使用。
[0003]用于細胞醫療的細胞貴重，得到較多的細胞存在限制的情況占大多數，因此必須極力避免在細胞調制過程中損失細胞。另外，存在混入懸濁液中的成分對治療帶來負面影響的擔憂，因此需要進行清洗，盡可能除去混入的成分。
[0004]根據以上內容，在細胞調制過程中，減少細胞的損失、極力減少不需要的成分混入細胞懸濁液來調制細胞是影響其后的治療成果的重要課題。
[0005]作為細胞調制方法，公知有例如，使用了離心分離的濃縮、清洗操作。使用離心分離的方法為了細胞的濃縮清洗，通過使細胞懸濁液存積于封閉容器進行離心分離來使細胞沉淀。其后，在凈化操作臺等，打開容器除去懸濁液的上清液。此時，細胞向大氣敞開，存在污染等的品質的劣化的可能性。因此，提出在封閉系統的離心操作(專利文獻1)，從而擔憂裝置大型、成本增大。
[0006]另外，作為其他細胞調制方法，提出使用了旋轉膜過濾器的細胞懸濁液的濃縮清洗方法(專利文獻2)。根據該方法能夠使裝置緊湊簡便，另外能夠在封閉系統的回路無菌地操作細胞。但是，根據上述專利文獻2，形成如下手段:為了自動地進行濃縮清洗工序，利用計重秤測定存積容器的重量并將重量變化反饋于工序的控制，從而自動地進行工序。然而，重量的變化中準確性、響應性存在擔憂，從而工序切換是否正確地進行存在擔憂，進而存在細胞懸濁液的濃縮、清洗未準確地進行，品質方面有缺陷的擔憂。
[0007]與此相對地，提出使用過濾單元進行過濾、清洗的系統(專利文獻3)。該系統是以將因手術等損失的患者血液再利用為目的系統。記載有在該系統中，邊對存儲于儲藏槽的血液使用液面的液位傳感器，邊將存儲于儲藏槽的血液量保持在固定范圍內。該方法中，通過氣泡檢測器對系統內的氣泡進行檢測來進行工序的控制。通過這樣的氣泡的檢測進行控制，從而能夠正確地迅速掌握回路內的液量，因此能夠期待各工序的切換立即準確地進行。另一方面，上述的系統是以血液為對象的系統，血液處理中氣泡的混入有害，因此未假設將檢測氣泡的系統用于作為細胞調制過程的目的不需要的成分的除去、為了減少投藥的液量而進行濃縮的系統。另外，在以血液作為對象的濃縮系統中，如上述專利那樣使用中空纖維，但在使用中空纖維膜的情況下，根據中空纖維的種類，存在氣泡的混入對中空纖維的分離性能產生負面影響并對清洗效率產生影響的擔憂。
[0008]專利文獻1:日本特表2007 - 524396號公報
[0009]專利文獻2:日本專利第4307714號公報
[0010]專利文獻3:日本專利第3012689號公報
【發明內容】
[0011]本發明的目的在于解決使用了中空纖維分離膜的細胞濃縮液的制造中的上述課題，在于提供細胞的損失以及污染的擔憂低、對細胞的損傷低、而且高精度地制造細胞濃縮液的方法。
[0012]另外，本發明的另一目的在于提供能夠高效地制造上述那樣的細胞濃縮液的細胞懸濁液處理系統。
[0013]本發明人們為了解決上述課題重復深入研究，結果發現，使用具備:與填充了中空纖維分離膜的細胞懸濁液處理器一起存積細胞的容器、檢測該存積容器內或者將存積容器與細胞懸濁液處理器連通的管內的液量的設備、以及以使細胞懸濁液一邊在存積容器與細胞懸濁液處理器之間循環一邊可進行濃縮的方式連接的回路的細胞懸濁液處理系統，對上述存積容器內或者將上述存積容器與細胞懸濁液處理器連通的管內的液量進行檢測，對基于上述循環的濃縮進行控制，由此細胞的污染的擔憂低，對細胞的損傷低，細胞損失的擔憂小，而且，發現能夠高效率地制造細胞濃縮液，由此以至完成本發明。
[0014]S卩，本發明所提供的如以下那樣。
[0015](1) 一種細胞濃縮液的制造方法，使用細胞懸濁液處理系統，該細胞懸濁液處理系統具備:
[0016]細胞懸濁液的存積容器，其具有溶液入口、循環出口以及循環入口 ；
[0017]細胞懸濁液處理器，其在具有細胞懸濁液導入口、細胞懸濁液導出口以及濾液用出口的容器內填充有中空纖維分離膜，用于從細胞懸濁液過濾液體而進行濃縮；
[0018]循環回路，其具有將上述存積容器的循環入口與上述細胞懸濁液處理器的細胞懸濁液導入口連通的導入用連通管、以及將上述細胞懸濁液處理器的細胞懸濁液導出口與上述存積容器的循環出口連通的導出用連通管，用于使細胞懸濁液一邊在存積容器以及細胞懸濁液處理器之間循環一邊進行濃縮；
[0019]被濃縮后的細胞濃縮液的回收容器；
[0020]回收路徑，其用于將上述存積容器內、上述細胞懸濁液處理器內以及上述循環回路內的細胞濃縮液送至上述回收容器；
[0021]注入路徑，其用于向上述存積容器的溶液入口注入溶液；以及
[0022]檢測單元，其用于檢測上述存積容器內或者循環回路的導入用連通管內的細胞濃縮液的液量，
[0023]在上述細胞濃縮液的制造方法中，
[0024]包括:
[0025]a)從上述溶液入口將細胞懸濁液供給到存積容器而進行存積的工序；
[0026]b)使存積容器內的細胞懸濁液經由循環回路的導入用連通管朝細胞懸濁液處理器流通，然后經由循環回路的導出用連通管向存積容器循環而將細胞懸濁液濃縮的工序；
[0027]c)通過對存積容器內或者循環回路的導入用連通管內的細胞濃縮液的液量進行檢測，使上述b)工序停止的工序；以及
[0028]d)使上述存積容器內、上述細胞懸濁液處理器內以及循環回路內的細胞濃縮液經由回收路徑送至回收容器而進行回收的工序。
[0029](2)上述細胞濃縮液的制造方法中，在c)工序后，從上述存積容器的溶液入口將稀釋液注入存積容器而將存積容器內的細胞濃縮液稀釋之后，進一步反復b)工序以及c)工序。
[0030](3)上述細胞濃縮液的制造方法中，在a)工序前，從溶液入口注入預充液(priming solut1n ；7° 7 ^ ^ >夕'液)，進行預充。
[0031](4)上述細胞濃縮液的制造方法中，并行實施a)工序和b)工序。
[0032](5)上述細胞濃縮液的制造方法中，檢測循環回路內的液量的檢測單元是上述循環回路的導入用連通管所具備的氣泡傳感器。
[0033](6)上述細胞濃縮液的制造方法中，檢測存積容器內的液量的檢測單元是在與存積容器平行且與存積容器下部連通的回路上所具備的一個以上的氣泡傳感器。
[0034](7)上述細胞濃縮液的制造方法中，在與上述存積容器下部連通的回路具備腔室。
[0035](8)上述細胞濃縮液的記載的制造方法中，在上述注入路徑具備氣泡傳感器。
[0036](9) 一種細胞懸濁液處理系統，具備:
[0037]細胞懸濁液的存積容器，其具有溶液入口、循環出口以及循環入口 ；
[0038]細胞懸濁液處理器，其在具有細胞懸濁液導入口、細胞懸濁液導出口以及濾液用出口的容器內填充有中空纖維分離膜，用于從細胞懸濁液過濾液體而進行濃縮；
[0039]循環回路，其具有將上述存積容器的循環入口與上述細胞懸濁液處理器的細胞懸濁液導入口連通的導入用連通管、以及將上述細胞懸濁液處理器的細胞懸濁液導出口與上述存積容器的循環出口連通的導出用連通管，用于使細胞懸濁液一邊在存積容器以及細胞懸濁液處理器之間循環一邊進行濃縮；
[0040]回收容器，其回收被濃縮后的細胞濃縮液；
[0041]回收路徑，其用于將上述存積容器內、上述細胞懸濁液處理器內以及上述循環回路內的細胞濃縮液送至上述回收容器；
[0042]注入路徑，其用于向上述存積容器的溶液入口注入溶液；
[0043]檢測單元，其用于檢測上述存積容器內或者循環回路的導入用連通管內的細胞濃縮液的液量；以及
[0044]控制單元，其通過上述檢測單元對細胞濃縮液濃縮至規定的液量進行檢測，使細胞濃縮液從上述存積容器朝細胞懸濁液處理器的輸送停止。
[0045](10)上述細胞懸濁液處理系統中，檢測循環回路內的液量的檢測單元是上述循環回路的導入用連通管所具備的氣泡傳感器。
[0046](11)上述細胞懸濁液處理系統中，檢測存積容器內的液量的檢測單元是在與存積容器平行且與存積容器下部連通的回路上所具備的氣泡傳感器。
[0047](12)上述細胞懸濁液處理系統中，在與上述存積容器下部連通的回路具備腔室。
[0048](13)上述細胞懸濁液處理系統中，在上述注入路徑具備氣泡傳感器。
[0049](14)上述細胞懸濁液處理系統中，上述溶液入口、循環出口以及循環入口全部位于存積容器的下部。
[0050](15)上述細胞懸濁液處理系統中，在存積容器上部附近具備通氣口，使存積容器內成為大氣敞開系統。
[0051]本發明中，使用具備:與填充了中空纖維分離膜的細胞懸濁液處理器一起存積細胞的容器、將上述存積容器與上述細胞懸濁液處理器連接的回路、以及對上述存積容器內或者將存積容器與細胞懸濁液處理器連通的管內的液量進行檢測的設備的細胞懸濁液處理系統，通過上述檢測單元對細胞濃縮液濃縮至規定的液量的情況進行檢測，使從上述存積容器朝細胞懸濁液處理器的細胞濃縮液的輸送停止，由此能夠在無菌的封閉系統高精度地制造對細胞的損傷低、細胞損失以及污染的擔憂小的細胞濃縮液。因此，被濃縮了的細胞能夠用于細胞治療用。并且，在上述細胞懸濁液處理系統對預先處理條件進行編程而進行了細胞濃縮液制造的自動化的情況下，也能夠高效地生產細胞濃縮液。
[0052]另外，細胞濃縮液的制造方法中，在細胞濃縮結束后，將稀釋液注入存積容器而稀釋了存積容器內的細胞濃縮液后，進一步反復進行b)濃縮工序以及c)濃縮停止工序，從而除去細胞濃縮液中的不需要的成分，能夠得到純度更高的細胞濃縮液。
[0053]另外，在細胞濃縮液的制造方法中，在a)存積工序前，從溶液入口注入預充液，進行預充，從而能夠作業性良好地進行細胞濃縮。
[0054]另外，在細胞濃縮液的制造方法中，并行實施a)存積工序與b)濃縮工序，從而能夠縮短處理時間。
[0055]另外，檢測上述細胞懸濁液處理系統的循環回路內的液量的檢測單元是上述循環回路的導入用連通管所具備的氣泡傳感器，從而與檢測存積容器內的液量的情況相比，能夠進一步濃縮細胞懸濁液，因此能夠減少被濃縮的懸濁液量，能夠降低懸濁液中的不需要的成分的量。
[0056]另外，檢測上述存積容器內的液量的檢測單元是在與存積容器平行且與存積容器下部連通的回路上所具備的一個以上的氣泡傳感器，從而與如檢測存積容器的液面的情況那樣需要檢測范圍大的氣泡傳感器相比，檢測回路內的液面檢測范圍小，而能夠通過更緊湊的氣泡傳感器來應對。