9a更高的位置設置腔室7。通過設置該腔室7具有比回路32單獨的情況下更能夠抑制液面的搖晃的優點。
[0158]在上述回路32的比存積容器3的上部更高的位置設置分支部，在比該分支部更高的位置與圖1同樣地設置空氣過濾器8即可。另外，也可以在分支部與空氣過濾器8之間設置另一氣泡傳感器％。通過成為這樣的結構在供給了超過存積容器3的容積的細胞懸濁液的情況下氣泡傳感器9b工作使栗12停止，從而能夠抑制細胞懸濁液從空氣過濾器8泄漏。氣泡傳感器9b與栗12電連接從而能夠進行自動的處理。
[0159]圖2所示的細胞懸濁液處理系統A’的其他結構與圖1相同因此省略說明。
[0160]另外，作為回收路徑31，也可以是圖3所示的細胞懸濁液處理系統A”那樣的方式。
[0161]S卩，也可以在存積容器3設置回收口 33，成為連接了該回收口 33與回收容器5的回收路徑31’。在該路徑設置夾具34即可。
[0162]另外，也可以在細胞懸濁液處理器6設置細胞濃縮液回收口 35，連接該細胞濃縮液回收口 35與回收容器5而作為回收路徑31”。在該路徑設置夾具36即可。
[0163](細胞濃縮液的制造方法)
[0164]本發明的細胞濃縮液的制造方法使用具有上述那樣的結構的細胞懸濁液處理系統，該方法的特征在于，包括:
[0165]a)從上述溶液入口將細胞懸濁液供給到存積容器而進行存積的工序；
[0166]b)使存積容器內的細胞懸濁液經由循環回路的導入用連通管朝細胞懸濁液處理器流通，然后經由循環回路的導出用連通管向存積容器循環而將細胞懸濁液濃縮的工序；
[0167]c)通過對存積容器內或者循環回路的導入用連通管內的細胞濃縮液的液量進行檢測，使上述b)工序停止的工序；以及
[0168]d)使上述存積容器內、上述細胞懸濁液處理器內以及循環回路內的細胞濃縮液經由回收路徑送至回收容器而進行回收的工序。
[0169]以下對使用圖1所示的細胞懸濁液處理系統制造細胞濃縮液的具體例進行說明。此外，制造前各夾具預先關閉。
[0170]a)工序(存積工序)
[0171]首先，將細胞培養袋連接部1與細胞培養袋連接，將稀釋液袋連接部2與稀釋液袋連接。然后確認打開夾具22，并夾具21關閉，從細胞培養袋連接部1驅動栗12而以規定的流速使細胞懸濁液存積于存積容器3。存積的液量若沒有超過存積容器的容量則能夠無特別限制地存積。另外，作為流速優選50mL/分?300mL/分的范圍。
[0172]b)工序(濃縮工序)
[0173]接下來，打開夾具23，使用栗13在存積容器3與細胞懸濁液處理器6之間通過循環回路30而使細胞懸濁液循環，并且從細胞懸濁液使用中空纖維膜來過濾培養基等的液體成分，進行濃縮。此時循環的方向為從存積容器3的循環入口 17向細胞懸濁液處理器6的細胞懸濁液導入口 18流入的方向。濃縮細胞懸濁液的方法可以使用在細胞懸濁液在中空纖維分離膜的內側流動時利用了在內側流動的液體的壓力的過濾、和使用了栗14的過濾中的任一個。
[0174]上述存積工序與濃縮工序可以反復進行直至連結于細胞培養袋連接部1的細胞懸濁液袋內的液量成為規定量，也可以使存積工序與濃縮工序同時并行。另外，也可以利用栗12的驅動時間等處理細胞懸濁液袋內的細胞懸濁液直至固定量，也可以在將細胞懸濁液全部輸送后使用氣泡傳感器10對流入注入路徑27的氣泡進行檢測從而控制基于栗12的送液。
[0175]c)工序(濃縮停止工序)
[0176]在進行細胞懸濁液的濃縮直至通過設置于導入用連通管28的氣泡傳感器11檢測出氣泡后，停止栗13、14而停止濃縮。圖1所示的細胞懸濁液處理系統A中，如上述那樣，能夠實施直至不再向存積容器3內存積細胞濃縮液的精度高的濃縮。
[0177]d)工序(回收工序)
[0178]然后，關閉夾具23，打開夾具24，使栗13驅動，從而能夠將處于上述存積容器3內、上述細胞懸濁液處理器6內以及循環回路30內的充分被濃縮了的細胞懸濁液經由回收路徑31而回收于回收容器5。
[0179]另外，本發明中，也可以在上述a)工序前進行預充。該情況下，打開夾具21，關閉夾具22，從稀釋液袋連接部2將生理鹽水作為預充液向存積容器3存積。驅動栗12而以規定的流速存積于存積容器3。存積的液量沒有特別限定，只要存積循環回路30以及細胞懸濁液處理器6被生理鹽水浸漬的液量即可。流速優選50mL/分?300mL/分的范圍。
[0180]接下來，確認打開夾具23，并關閉夾具24，對設置于將存積容器3與細胞懸濁液處理器6連結的循環回路30的導入用連通管28的栗13、以及設置在與過濾用出口 20連接的路徑上的栗14進行驅動，從而進行循環回路30內以及細胞懸濁液處理器6內的預充。通過栗13以規定的流速在循環回路30內裝滿預充液后，驅動栗14而在中空纖維分離膜的外側過濾預充液，用預充液裝滿細胞懸濁液處理器內6。此時，循環方向為正方向、反方向均可，能夠無特別限制地循環。若栗14比栗13的流速低則能夠無特別限制地設定。此外，在栗14的流速比栗13的流速更高的情況下，存在成為沒有在循環回路30內裝滿液體的狀態的擔憂，從而不優選。栗13的流速優選在50mL/分?500mL/分的范圍進行調整。
[0181]通過預先進行上述那樣的預充，能夠作業效率高地進行細胞濃縮。
[0182]另外，本發明中，也可以在上述c)工序中停止了細胞懸濁液的濃縮后，打開夾具21，關閉夾具22，通過栗12將稀釋液送至存積容器3內，從而稀釋存積容器3內的細胞懸濁液(稀釋工序)。在該稀釋工序中稀釋了細胞懸濁液內的不需要的成分后，再次在b)工序進行濃縮，接下來在c)工序停止濃縮，由此通過中空纖維膜過濾并除去細胞懸濁液內的不需要的成分，從而能夠制造進一步除去了不需要的成分的細胞濃縮液。此外，該稀釋工序也可以根據需要反復進行兩次以上。
[0183]另外，氣泡在c)工序后的導入用連通管28中進入到氣泡傳感器11的位置，因此使栗13朝反方向驅動而使細胞濃縮液的液面預先返回至存積容器3下部的循環入口 17附近或者存積容器3內，從而再次進行b)工序的情況下也能夠使氣泡不進入細胞懸濁液處理器6o
[0184]另外，在進行上述預充與稀釋時預充液與稀釋液不同的情況下，將預充液所進入的袋與稀釋液所進入的袋交替即可。
[0185]另外，上述a)工序的存積工序與b)工序的濃縮工序也可以并行實施。通過這樣將a)工序與b)工序并行實施，具有能夠縮短處理時間的優點。
[0186]另外，以下記載制造使用了圖2所示的細胞濃縮處理系統A’的情況下的細胞濃縮液的具體例。
[0187]a)工序的存積工序能夠與使用了圖1所示的細胞濃縮處理系統A的情況同樣地處理。但是，圖2所示的細胞濃縮處理系統A’中，在a)工序前進行預充的情況下，首先，在預充液袋連接部26連接預充液袋并打開夾具21、25，將預充液存積于存積容器3即可。其后，在稀釋液袋連接部2安裝稀釋液袋即可。
[0188]b)接著工序的濃縮工序，濃縮充分進行，通過設置于回路32的氣泡傳感器9a檢測處于存積容器3內的細胞濃縮液的量，從而停止栗13、14而停止濃縮(c)工序)。
[0189]其后，也可以進一步在存積容器3追加細胞懸濁液，也可以如上述那樣，進行基于稀釋液的稀釋工序。此時，再次進行b)工序、c)工序即可。
[0190]接下來，與使用了圖1所示的細胞濃縮處理系統A的情況同樣地進行d)工序的回收工序。
[0191]如以上那樣，通過使用細胞懸濁液處理系統，能夠降低細胞的損失以及污染的擔憂，降低對細胞的損傷，而且能夠高精度地制造細胞濃縮液。
[0192]作為通過本發明能夠進行濃縮處理的細胞，例如可例示出，誘導多能干細胞(iPS細胞)、胚胎干細胞(ES細胞)、間充質干細胞、脂肪來源間充質細胞、脂肪基質干細胞、多能成體干細胞、骨髓基質細胞、造血干細胞等具有多分化能的成體干細胞、T細胞、B細胞、殺傷性T細胞(細胞毒性T細胞)、NK細胞、NKT細胞、調節性T細胞等淋巴樣細胞、巨噬細胞、單核細胞、樹突狀細胞、粒細胞、紅血球、血小板等、神經細胞、肌細胞、成纖維細胞、肝細胞、心肌細胞等體細胞、或者、進行了基因的導入、分化等處理的細胞。其中能夠優選對粒細胞、T細胞、B細胞、殺傷性T細胞(細胞毒性T細胞)、NK細胞、NKT細胞、調節性T細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞等免疫細胞使用。另外，也例示癌細胞、白血病細胞等各種的疾病所相關的細胞。
[0193]另外，作為本發明所使用的細胞懸濁液，只要是包含上述細胞的懸濁液沒有特別限定，例如可例示，對脂肪、皮膚、血管、角膜、□腔、腎臟、肝臟、胰臟、心臟、神經、肌肉、前列腺、腸、羊膜、胎盤、臍帶等生物體組織進行了酶處理、粉碎處理、提取處理、分解處理、超聲波處理等后的懸濁液、對血液、骨髓液進行密度梯度離心處理、過濾處理、酶處理、分解處理、超聲波處理等前處理而調制的細胞懸濁液等。或者，可例示，在生物體外使用培養液例如DMEM、a - MEM、MEMUMEM、RPMI — 1640、細胞因子、抗體、肽等刺激因素等來培養上述所例示的細胞后的細胞懸濁液。
[0194]實施例
[0195]以下，使用實施例對本發明進行說明。
[0196](實施例1)
[0197]使用圖1所示的細胞懸濁液處理系統A進行了細胞懸濁液的濃縮處理。
[0198]此外，夾具21、22、23、24均為關閉的狀態。
[0199]另外，使用的細胞懸濁液使用將jurkat細胞在10% FBS的RPMI — 1640培養基中培養而得的懸濁液。
[0200]將細胞懸濁液進入的袋與細胞培養袋連接部1連接，將生理鹽水袋與稀釋液袋連接部2連接。確認打開夾具21，并關閉夾具22，將栗12設定為300mL/分的流速并使其驅動60秒，將生理鹽水存積于存積容器3。
[0201]接下來，確認打開夾具23，并關閉夾具24，將栗13設定為450mL/分，將栗14設定為150mL/分而使它們驅動，進行循環回路30內以及細胞懸濁液處理器6內的預充。此時，栗13的驅動方向成為在細胞懸濁液處理器6內使預充液從上向下流動的方向。若氣泡傳感器11檢測出氣泡則停止栗13以及栗14。
[0202]此外，為了不使氣泡進入細胞懸濁液處理器6，因此使栗13向反方向驅動而使生理鹽水的液面返回存積容器3下部的循環入口 17附近。
[0203]然后打開夾具22，關閉夾具21，從細胞培養袋連接部1將栗12設定為300mL/分的流速使其驅動60秒，將細胞懸濁液存積于存積容器3 (a)工序)。
[0204]接下來，以使栗12為200mL/分、栗13為450mL/分、栗14為200mL/分的方式設定各自的流速，使細胞懸濁液一邊在循環回路30內循環一邊進行濃縮。循環回路30內的通液方向成為從存積容器3的循環入口 17向細胞懸濁液處理器6的細胞懸濁液導入口 18流動的方向(b)工序)。
[0205]氣泡傳感器10檢測出氣泡后停止栗12。接下來，使栗13以及栗14驅動，對存積容器3內的細胞懸濁液進行濃縮，氣泡傳感器11檢測出氣泡后停止栗13以及栗14(c)工序)。
[0206]此外，為了不使氣泡進入細胞懸濁液處理器6，因此使栗13向反方向驅動而使細胞懸濁液的液面返回存積容器3下部的循環入口 17附近。
[0207]接下來，打開夾具