堿加成鹽。堿加成鹽的實例包括鋁鹽、鈣鹽、鈉鹽、鉀鹽等。其實例 包括但不限于乳酸鋁、乳酸鈣、乳酸鈉、蘋果酸鈉、蘋果酸二鈉、酒石酸氫鉀、酒石酸鈉、檸檬 酸鉀、檸檬酸鈉等。當兩個或更多個羧基存在時，不同的堿基可加到各羧基上。其實例包括 但不限于酒石酸鉀鈉等。然而，它可以是水合物。其實例包括但不限于乳酸鈣水合物、蘋果 酸鈉1/2水合物、蘋果酸二鈉一水合物、酒石酸鈉二水合物、酒石酸鉀鈉四水合物、檸檬酸 水合物、檸檬酸鈉水合物等。使用乙醇酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸，可穩定包含本發 明的肽的水性液體組合物。這些的一種或多種可組合使用。待用于本發明的α羥酸優選 為乙醇酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或其藥理學上可接受的鹽，更優選酒石酸或其藥理學上可 接受的鹽。雖然乳酸、蘋果酸和酒石酸具有光學異構體，但是旋光形式和外消旋體不影響本 發明的作用。酒石酸常用作藥物產品的賦形劑，優選描述于日本藥典（第16版）的L_(+) 酒石酸。
[0060] 在本發明的水性液體組合物中，雖然每體積" α羥酸"的含量沒有特別規定，但優 選為1-100禮，更優選1-50禮，最優選1-25禮。
[0061] "二羧酸" 一般意指分子中具有2個羧基的羧酸。本發明中"二羧酸"的實例包括 丙二酸、琥珀酸、戊二酸、馬來酸、富馬酸及其藥理學上可接受的鹽。藥理學上可接受的鹽的 實例包括堿加成鹽。堿加成鹽的實例包括鈉鹽、鉀鹽等。其實例包括但不限于丙二酸二鈉、 琥珀酸鈉、戊二酸鈉、富馬酸二鈉等。然而，它可以是水合物。其實例包括但不限于丙二酸 二鈉一水合物、琥珀酸鈉6-水合物、馬來酸一鈉三水合物等。使用丙二酸、琥珀酸、戊二酸、 馬來酸或富馬酸，可以穩定包含本發明的肽的水性液體組合物。可組合使用這些的一種或 多種。待用于本發明的二羧酸優選為琥珀酸、馬來酸、富馬酸或其藥理學上可接受的鹽。
[0062] 在本發明的水性液體組合物中，雖然每體積"二羧酸"的含量沒有特別限定，但優 選為 10-100 mM，更優選 25-100 mM，最優選 50-100 mM。
[0063] 本發明中的"甲硫氨酸"是必需氨基酸之一，并且是在側鏈中包含硫原子的疏水氨 基酸。雖然"甲硫氨酸"具有光學異構體，并包括D型、L型和DL型，但是可使用這些的任一 種而不影響本發明的效果。甲硫氨酸常常用作藥物產品的賦形劑，優選為日本藥典（第16 版）的L型。雖然本發明的水性液體組合物中每體積甲硫氨酸的含量沒有特別限定，但是 優選為1-300禮。
[0064] " α羥酸"、"二羧酸"和"甲硫氨酸"甚至在其單獨使用時也可穩定本發明的水性 液體組合物。通過使用與"α羥酸"和/或"二羧酸"組合的"甲硫氨酸"，可預期進一步的 穩定性。在這種情況下，待與"甲硫氨酸"組合的酸優選為乙醇酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、琥 珀酸、馬來酸或富馬酸，更優選蘋果酸或酒石酸，最優選酒石酸。
[0065] 雖然本發明的水性液體組合物具有pH 3-6,但是在生產期間未達到所預期的pH 時，一般使用pH調節劑調節pH。從穩定性方面來看，優選的pH為3-6,更優選的pH為4-5。 當PH小于3或超過6時，類似物例如本發明的肽中甲硫氨酸殘基的氧化形式等往往在生產 或存儲期間增加。因此，水性液體組合物中本發明的肽的含量可能不優選地降低。
[0066] 從通常用于藥物制劑的pH調節劑中適當地選擇和使用pH調節劑。具體來講，可 提及鹽酸、磷酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸氫鈉、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸三鈉等。
[0067] 另外，除上述賦形劑以外，本發明的水性液體組合物可適當地包含通常用于藥物 制劑的賦形劑，例如穩定劑、增溶劑、緩沖劑、等滲劑、增溶劑等，只要不影響本發明的效果。
[0068] 可通過通常用于生產藥物產品的方法等，來生產本發明的水性液體組合物。例如， 在保持在5-25Γ恒溫的環境下，將注射用水加入合適的容器中，將提前稱量的肽和賦形劑 加入其中，同時輕輕攪拌混合物。然后，最后調節混合物至所需的pH。混合物通過過濾等滅 菌，裝入容器（例如玻璃小瓶等）中，將其用橡膠塞等密封。
[0069] 使用本發明的水性液體組合物制備癌癥疫苗的方法不受特別限制，可提及例如： 通過與合適的佐劑混合以制備癌癥疫苗的方法；通過提前與合適的佐劑混合并冷凍干燥混 合物等，來制備癌癥疫苗的方法；用時通過將本發明的水性液體組合物與佐劑混合，來制備 癌癥疫苗的方法等。佐劑的實例包括：弗氏佐劑；礦物凝膠例如氫氧化鋁；表面活性物質例 如溶血卵磷脂、Pluronic多元醇、聚陰離子、肽、油乳液、匙孔蜮血藍蛋白和二硝基苯酚；人 佐劑例如BCG (Bacille de Calmette et Gu6rin)和短小厭氧棒狀桿菌（Corynebacterium parvum)等。
[0070] 使用本發明的水性液體組合物制備的癌癥疫苗可用于預防或治療WTl基因表達 水平增加有關的癌癥，例如，血液學癌癥例如白血病、骨髓增生異常綜合征、多發性骨髓瘤、 惡性淋巴瘤等，和實體瘤例如胃癌、結腸直腸癌、肺癌、乳腺癌、生殖細胞癌、肝癌、皮膚癌、 泌尿膀胱癌、前列腺癌、子宮癌、宮頸癌、卵巢癌等。
[0071] 因為本發明的水性液體組合物可以穩定地保持作為活性成分的癌抗原肽，所以可 選擇不同的給藥形式。具體地說，可提及口服、經鼻、經肺、經皮、皮內、皮下、肌內、靜脈內或 腹膜內給藥等，并且可根據使用目的通過上述方法制備癌癥疫苗。總的來說，作為優選用于 用癌癥疫苗免疫刺激的給藥途徑，胃腸外給藥是已知的，例如腹膜內給藥、皮下給藥、皮內 給藥、肌內給藥、靜脈內給藥以及經鼻給藥、經皮給藥等。這些當中，可優選提及經注射給 藥，例如皮下給藥、皮內給藥、腹膜內給藥、肌內給藥等。 實施例
[0072] 下面參照不得解釋為限制性的實施例、比較實施例、實驗實施例等，更詳細地解釋 本發明。在下面的實施例等中，"％"意指、t%"，除非另有說明。
[0073] "乙醇酸（晶體）（由Nacalai Tesque生產）"用作乙醇酸，"乳酸（由Nacalai Tesque生產）"用作乳酸，"DL-蘋果酸（由Nacalai Tesque生產）"用作蘋果酸，"L(+)_酒 石酸粉（由Merck生產）"用作酒石酸，和"檸檬酸一水合物（由Nacalai Tesque生產）" 用作檸檬酸。"丙二酸（由Nacalai Tesque生產）"用作丙二酸，"琥珀酸（由Nacalai Tesque生產）"用作琥珀酸，"戊二酸（由Nacalai Tesque生產）"用作戊二酸，"馬來酸（由 Nacalai Tesque生產）"用作馬來酸，和"L-甲硫氨酸（由Kyowa Hakko Bio Co.，Ltd.生 產）"用作甲硫氨酸。為了調節pH，"l mol/1-鹽酸（由Nacalai Tesque生產）"用作鹽 酸，和" I mol/1-氫氧化鈉溶液（由Nacalai Tesque生產）"用作氫氧化鈉。
[0074] 在比較實施例中，"無水磷酸二氫鈉（由Nacalai Tesque生產）"用作磷酸二氫鈉， "乙酸鈉三水合物（由Nacalai Tesque生產）"用作乙酸鈉，"巰基乙醇酸鈉（由Nacalai Tesque生產）"用作疏基乙醇酸鈉，"焦亞硫酸鈉（由Nacalai Tesque生產）"用作焦亞硫 酸鈉，和"L(+)_抗壞血酸（由Nacalai Tesque生產）"用作抗壞血酸。"L-α -丙氨酸（由 Nacalai Tesque生產）"用作丙氨酸，"甘氨酸（由Nacalai Tesque生產）"用作甘氨酸， 和"L-精氨酸鹽酸鹽（由Nacalai Tesque生產）"用作精氨酸。
[0075] " IFA (由 Wako Pure Chemical Industries，Ltd.生產）"用作不完全弗氏佐劑， "NOFABLE E0-85S (由 NOF Corp.生產）"用作油酸乙酯，"NOFABLE S0-991 (由 NOF Corp. 生產）"用作脫水山梨醇單油酸酯，"NIKKOL HC0-10 (由Nikko Chemicals生產）"用作聚 氧乙烯氫化蓖麻油10,和"日本藥典濃甘油（由NOF Corp.生產）"用作濃甘油。"NIKK0L 0DM-100 (由Nikko Chemicals生產）"用作肉豆蔻酸辛基十二烷基酯，"NOFABLE G0-991 (由NOF Corp.生產）"用作甘油單油酸酯，和"NIKKOL HC0-20 (由Nikko Chemicals生 產）"用作聚氧乙烯氫化蓖麻油20。
[0076] [水性液體組合物的制備]
[實施例1] 按表1所示量，將作為肽的肽（A)即SEQ ID NO: I (RMFPNAPYL)所示肽（下文稱為肽 (1))和作為賦形劑的賦形劑（C)即乙醇酸溶于注射用水中，用鹽酸和/或氫氧化鈉調節至 pH 4. 5。將混合物通過0.2 μπι無菌濾器過濾，以I mL裝入玻璃小瓶，將小瓶用丁基橡膠 塞密封，藉此得到水性液體組合物1。
[0077] [實施例 2-38] 按與實施例1相同的方式，將作為肽（A)的肽（1)和作為賦形劑（C)、（D)和/或（E) 的α羥酸、二羧酸和/或甲硫氨酸按表1-9所述的量制備，裝入小瓶中，將小瓶用丁基橡膠 塞密封，藉此得到水性液體組合物2-38。
[0078] [比較實施例1-23] 按與實施例1相同的方式，以表10-14所述的量制備，裝入小瓶中，將小瓶用丁基橡膠 塞密封，藉此得到水性液體組合物39-61。
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