m渦旋振蕩孵育反應過夜；
[0137] (9)磁鐵吸附，然后用0.01M磷酸鹽緩沖液洗滌3次，即得超順磁性功能顆粒。
[0138] 實施例14 一種超順磁性功能顆粒的制備方法
[0139] 該方法包括如下步驟：
[0140] (1)取細菌磁顆粒，用蒸餾水配制成0.1 %~0.3% (w/v)濃度，超聲處理10min;
[0141] (2)取30mL上述細菌磁顆粒，然后加入50mL無水乙醇、2mL氨水和500yL正硅酸乙 酯，在200rpm攪拌條件下反應5h，反應完成后將產物用去離子水洗滌至中性；
[0142] (3)用無水乙醇配制0.1 %~0.3% (w/v)濃度的細菌磁顆粒，用冰乙酸調節溶液pH 值至4.0，取20mL上述溶液加入至30mL 10%3-氨丙基三乙氧基硅烷乙醇溶液中，在200rpm 攪拌條件下反應3h，反應完成后將產物用去離子水洗滌至中性；
[0143] (4)用乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(pH為6.0)洗滌細菌磁顆粒，并配制成1%~5% (w/v) 濃度的懸液；
[0144] (5)取2mL上述細菌磁顆粒懸液，加入100yL濃度為10%(w/v)的EDC溶液和100yL 10 % (w/v)的NHS溶液，室溫150rpm渦旋振蕩反應3h，然后用去離子水洗去過量的EDC和NHS， 并最終懸浮至2mL，備用；
[0145] (6)用乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(pH6.0)稀釋抗紅細胞糖蛋白GP A單克隆抗體至lmg/ mL；
[0146] (7)向活化后的細菌磁顆粒懸液中加入100~200yL上述抗紅細胞糖蛋白GP A單克 隆抗體；
[0147] (8)加入孵育劑，室溫150rpm渦旋振蕩孵育反應過夜；孵育劑為重量份數比為2: 7 的殼聚糖和海藻酸鈉的混合物；
[0148] (9)磁鐵吸附，然后用0.01M磷酸鹽緩沖液洗滌3次，即得超順磁性功能顆粒。
[0149] 實施例15-種超順磁性功能顆粒的制備方法
[0150] 該制備方法與實施例9不同的是，該制備方法還包括細菌磁顆粒的制備方法，其包 括如下步驟：
[0151] 1)將趨磁細菌MSR-1菌株進行擴大培養；
[0152] 2)離心并收集趨磁細菌MSR-1菌株，用Tris-HCl緩沖液懸浮，得懸浮液；
[0153] 3)超聲波破碎懸浮液中的細胞；
[0154] 4)磁鐵吸附破碎后的細胞，靜置過夜，棄去上清，用磷酸鹽緩沖液重新懸浮吸附到 的沉淀，超聲波清洗，磁鐵再次吸附，棄上清，將吸附到的沉淀用磷酸鹽緩沖液懸浮，洗滌3 次，即得細菌磁顆粒。
[0155] 實施例16-種超順磁性功能顆粒的制備方法
[0156] 該制備方法與實施例15不同的是，細菌磁顆粒的制備方法包括如下步驟：
[0157] (1)將趨磁細菌MSR-1菌株進行擴大培養。
[0158] (2)離心收集菌株（10000rpm，5min)，用適量Tris-HCl緩沖液(pH7.4)懸浮，得懸浮 液；
[0159] (3)超聲波破碎懸浮液中的細胞，超聲波破碎條件為:超聲功率300w，超聲時間5s， 間隔時間5s，超聲次數90次，重復3次，至細胞完全破碎；
[0160] (4)磁鐵吸附破碎后的菌體細胞，靜置過夜后，棄去上清，用10mM磷酸鹽緩沖液重 新懸浮吸附到的沉淀，超聲波清洗，磁鐵再次吸附，棄上清，磷酸鹽緩沖液懸浮，重復洗滌3 次，超聲波清洗條件為:超聲功率80w，超聲時間5s，間隔時間5s，超聲次數50次；
[0161] (5)純凈的細菌磁顆粒在蒸餾水中超聲波清洗兩次，磁鐵吸附，即得細菌磁顆粒。
[0162] 實施例17-種超順磁性功能顆粒的制備方法
[0163] 該制備方法與實施例9不同的是，該方法還包括抗紅細胞糖蛋白GPA單克隆抗體的 制備方法，其包括如下步驟：
[0164] I用紅細胞糖蛋白GPA免疫小鼠；
[0165] Π取免疫后的小鼠，通過融合劑與雜交瘤細胞進行融合，將融合后的細胞懸浮于 選擇培養基中，進行培養；
[0166] ΙΠ抗紅細胞糖蛋白GPA單克隆抗體篩選；
[0167] IV抗紅細胞糖蛋白GPA單克隆抗體的制備及純化。
[0168] 實施例18-種超順磁性功能顆粒的制備方法
[0169] 該制備方法與實施例17不同的是，抗紅細胞糖蛋白GPA單克隆抗體的制備方法包 括如下步驟：
[0170] 1.小鼠免疫
[0171] 將紅細胞糖蛋白GPA通過腹腔、背部皮下等途徑多點免疫小鼠，共免疫4次，間隔期 為10天;融合前2天用0.2ml血小板懸液經鼠尾靜脈加強注射1次；
[0172] 2.細胞融合
[0173] (1)取免疫后的小鼠脾臟，制備脾細胞懸液，并將小鼠脾細胞和培養好的NS1骨髓 瘤細胞按10:1比例混合；
[0174] (2)采用50%聚乙二醇4000作融合劑，將小鼠脾細胞和NS1骨髓瘤細胞進行融合；
[0175] (3)融合細胞懸于含選擇培養基內培養數日；
[0176] 3.克隆篩選
[0177] (1)將紅細胞糖蛋白GPA用0.05M pH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋至10μg/ml，包被酶標板 100μL7孔，4°C 過夜；
[0178] (2)次日用含0.03~0.06 % Tween-20的磷酸鹽緩沖液洗滌5次，控干；
[0179] (3)加入待檢的細胞培養上清，37 °C孵育后采用間接ELISA法進行檢測；
[0180] (4)Cutoff值設為陰性對照值的2.1倍，高于Cutoff值為陽性結果；
[0181] (5)選取檢測結果陽性孔內的融合細胞經有限稀釋法進行多次單克隆培養，待單 細胞生長成亞克隆后再進行測定，陽性克隆擴大后液氮冷凍保存；
[0182] 4.單抗制備及純化
[0183] (1)培養經克隆篩選的雜交瘤細胞株，注射至經致敏的小鼠腹腔內，每只約106個 細胞；
[0184] (2)觀察小鼠腹腔，并在約5~10天內采集小鼠腹水；
[0185] (3)取小鼠腹水，邊攪拌邊緩慢加入等比例的飽和硫酸銨溶液，攪拌lh后4°C靜置 過夜；
[0186] (4)次日將已沉淀的小鼠腹水離心，收集沉淀并用少量生理鹽水溶解;然后采用G-25凝膠層析柱去除其中的硫酸銨；
[0187] (5)繼續采用DEAE-52陰離子交換層析柱純化單抗，并用不同濃度的NaCl溶液洗 脫；
[0188] (6)采用SDS-PAGE電泳和間接ELI SA法進行純化抗體的純度和效價測定。
[0189] 實施例19 一種超順磁性功能顆粒的制備方法
[0190]該制備方法與實施例17不同的是，抗紅細胞糖蛋白GPA單克隆抗體的制備方法中， 所用的融合劑為質量比為5.6:1.2的聚乙二醇4000和聚乙二醇1500的混合物;選擇培養基 由DMEM培養液和懸浮溶質組成，所述懸浮溶質及其在DMEM培養液中的濃度為20μg/ml牛血 清、17 · 5ng/ml0-胡蘿卜素、2ng/ml丙酮酸鈉、7 · 5ng/ml維生素E、7 · 5ng/ml多聚谷氨酸、3yg/ ml殼聚糖和27.5ng/ml堿性成纖維細胞。
[0191 ]實施例20-種超順磁性功能顆粒的制備方法
[0192 ]該制備方法與實施例15不同的是，該方法還包括趨磁細菌MSR-1菌株的擴大培養， 其包括如下步驟：
[0193] a.在培養罐內加入第一培養基，107 °C滅菌lOmin，靜置lh后，將趨磁細菌MSR-1菌 株接種到培養罐中，進行第一次培養，獲得第一培養液;第一次培養的條件為:起始pH值為 5.8，培養溫度為30 °C，培養時間為5天，搖床轉速為300轉/分鐘，培養過程中通入氧氣，通入 氧氣的方式為：間隔20min，通入50min氧氣；
[0194] b.將第一培養液加入含有第二培養基的培養罐中，無氧狀態進行第二次培養;第 二次培養的條件為:起始pH值為6.5，培養溫度為25 °C，培養時間為2天，搖床轉速為150轉/ 分鐘；
[0195] 其中，第一培養基由重量份數為7.5份的谷氨酰胺、2份麥芽糖醇、3份、0.7份泛酸 鈣、0.7份酪蛋白酸鈉、0.3份磷酸二氫鉀、0.7份月桂酸肌氨酸和1.5份氯化鈉組成；
[0196] 所述第二培養基由重量份數為2.5份蛋白胨、3份生物素、1.5份甘氨酸、0.75份酒 石酸鈉、1.5份硝酸銨、1.5份磷酯酰絲氨酸和0.3份月桂醇硫酸酯鈉的組成。
[0197] 對照例1
[0198] 該對照例與實施例20不同的是：
[0199] 第一次培養的條件為:起始pH值為5，培養溫度為32°C，培養時間為5天，搖床轉速 為200轉/分鐘，培養過程中一直通入氧氣；
[0200] 第二次培養的條件為:起始pH值為7.2，培養溫度為30°C，培養時間為2天，搖床轉 速為250轉/分鐘；
[0201] 第一培養基由重量份數為7.5份的谷氨酰胺、3份、0.7份泛酸鈣、0.7份酪蛋白酸 鈉、〇. 3份磷酸二氫鉀和1.5份氯化鈉組成；
[0202] 第二培養基由重量份數為2.5份蛋白胨、1.5份甘氨酸、0.75份酒石酸鈉、1.5份硝 酸銨、和0.3份月桂醇硫酸酯鈉的組成。
[0203] 對照例2
[0204]該對照例與實施例20不同的是：
[0205]第一次培養的條件為:起始pH值為6.2，培養溫度為25°C，培養時間為5天，搖床轉 速為350轉/分鐘，培養過程中不通入氧氣;第二次培養的條件為:起始pH值為6，培養溫度為 15 °C，培養時間為2天，搖床轉速為100轉/分鐘；
[0206] 第一培養基由重量份數為7.5份的谷氨酰胺、2份麥芽糖醇、3份、0.7份泛酸鈣、0.7 份酪蛋白酸鈉、〇. 3份磷酸二氫鉀、2份瓊脂、0.7份月桂酸肌氨酸和1.5份氯化鈉組成；
[0207] 第二培養基由重量份數為2.5份蛋白胨、3份生物素、1.5份甘氨酸、0.75份酒石酸 鈉、1.5份硝酸銨、2份瓊脂、2份葡萄糖、1.5份磷酯酰絲氨酸和0.3份月桂醇硫酸酯鈉的組 成。
[0208] 試驗例1磁化紅細胞在臨床血型相容性檢測中的應用
[0209] 1.紅細胞反定型檢測
[0210]用已知血型的A型紅細胞、B型紅細胞、0型紅細胞按上述【具體實施方式】制備A型磁 化紅細胞、B型磁化紅細胞、0型磁化紅細胞，以替代新鮮紅細胞進行ΑΒ0血型系統反定型，即 血漿中抗A、抗B檢測。
[0211] 檢測步驟如下：
[0212] ⑴取潔凈試管三支，分別標記Α、Β、0;
[0213] (2)各加入待檢樣本(血清或血漿)50ul;
[0214] (3)對應管分別加入制備的A型磁化