做出評價。
[0076] 實施例四：疊鞘石斛的質(zhì)量評價方法
[0077] 與實施例一不同的是：
[0078] 標準樣品溶液的制備：取標準疊鞘石斛干燥樣品，用粉碎機粉碎，過藥典篩（孔徑 0. 335mm)，精密稱取石斛粉末l.OOOg，置于100ml錐形瓶中，加入50mL75%甲醇（V水：V甲 醇=25:75)，室溫下超聲30min后取出，過濾，濾液旋蒸濃縮至干，用75%甲醇溶劑（V水：V 甲醇=25:75)溶解，最后轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中定容，搖勻，以0.45μπι微孔濾膜過濾，即得 不同批次的標準樣品溶液。
[0079] 表5 10批疊鞘石斛指紋圖譜相似度評價結(jié)果
[0080]
[0081] 按照上述方法，對10批疊鞘石斛藥材建立了HPLC指紋圖譜（如圖11)，表3為10 批疊鞘石斛相似度結(jié)果，根據(jù)10批次樣品的指紋圖譜，制定疊鞘石斛的標準指紋圖譜（如 圖 12)。
[0082] 由表5可知，各樣品相似度值大于0. 85,相似度較高，樣品之間的化學物質(zhì)差異越 小。說明該10批疊鞘石斛品質(zhì)相對比較穩(wěn)定；而劣質(zhì)疊鞘石斛藥材和其他類型的石斛藥材 的相似度均在〇. 6以下（圖4-6為其他類型的石斛），因此，根據(jù)指紋圖譜的這些特征和相 似度可以對各類石斛的質(zhì)量做出評價。
[0083] 實施例五：霍山石斛的質(zhì)量評價方法
[0084] 與實施例一不同的是：
[0085] 標準樣品溶液的制備：取標準霍山石斛干燥樣品，用粉碎機粉碎，過藥典篩（孔徑 0. 335mm)，精密稱取石斛粉末l.OOOg，置于100ml錐形瓶中，加入50mL75%甲醇（V水：V甲 醇=25:75)，室溫下超聲30min后取出，過濾，濾液旋蒸濃縮至干，用75%甲醇溶劑（V水：V 甲醇=25:75)溶解，最后轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中定容，搖勻，以0.45μπι微孔濾膜過濾，即得 不同批次的標準樣品溶液。
[0086] 表6 10批霍山石斛指紋圖譜相似度評價結(jié)果
[0087]
[0088] 按照上述方法，對10批霍山石斛藥材建立了HPLC指紋圖譜（如圖13)，表3為10 批霍山石斛相似度結(jié)果，根據(jù)10批次樣品的指紋圖譜，制定霍山石斛的標準指紋圖譜（如 圖 14)。
[0089] 由表5可知，各樣品相似度值大于0. 85,相似度較高，樣品之間的化學物質(zhì)差異越 小。說明該10批霍山石斛品質(zhì)相對比較穩(wěn)定；而劣質(zhì)霍山石斛藥材和其他類型的石斛藥材 的相似度均在〇. 6以下（圖4-6為其他類型的石斛），因此，根據(jù)指紋圖譜的這些特征和相 似度可以對各類石斛的質(zhì)量做出評價。
[0090] 本發(fā)明不局限于上述最佳實施方式，任何人在本發(fā)明的啟示下所作的有關(guān)本發(fā)明 的任何修飾或變更，凡是具有與本申請相同或相近似的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護范 圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種石斛藥材的質(zhì)量評價方法，其特征在于，以夏佛托苷為對照品，采用高效液相色 譜法制定標準指紋圖譜，測定供試石斛樣品的指紋圖譜與標準指紋圖譜比較，計算相似度， 確定樣品的質(zhì)量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的石斛藥材的質(zhì)量評價方法，其特征在于，標準指紋圖譜是由 某類若干不同批次的標準石斛藥材的指紋圖譜通過歸一化法制成的，相似度> 〇. 85的為 質(zhì)量好的石斛藥材；相似度< 〇. 6的為劣質(zhì)或是不屬于該類的石斛藥材。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2述的石斛藥材的質(zhì)量評價方法，其特征在于，具體檢測步驟如 下： ① 對照品溶液的制備：精密稱取夏佛托苷，甲醇稀釋溶解。 ② 標準樣品溶液的制備：分別取某類不同批次的標準石斛藥材干燥樣品，粉碎，過篩， 精密稱取粉末，加入水或一元醇溶解，室溫下超聲，過濾，濾液濃縮至干，再用甲醇溶解，容 量瓶中定容，搖勻，微孔濾膜過濾，即得該類各個批次的標準石斛樣品溶液； ③ 石斛藥材HPLC指紋圖譜的建立：Alltima (：18色譜柱；二極管陣列檢測器；流動 相為乙腈/乙酸一乙酸銨溶液，梯度洗脫；檢測波長為280±10nm;柱溫25-35°C ;流速 0. 8-1. 2ml/min ;在此條件下分析該類各個批次的標準石斛樣品溶液，得到該類各個批次標 準石斛樣品的指紋圖譜； ④ 標準指紋圖譜的建立：以對照樣品夏佛托苷色譜峰作為指紋圖譜的參照峰，計算該 類各個批次標準石斛樣品各特征峰的相對保留時間和保留峰面積，制定得到該類石斛藥材 的標準指紋圖譜； ⑤ 供試樣品溶液的制備：取供試石斛藥材干燥樣品，粉碎，過篩，精密稱取石斛粉末，加 入水或一元醇溶解，室溫下超聲，過濾，濾液濃縮至干，再用甲醇溶解，容量瓶中定容，搖勻， 微孔濾膜過濾，即得供試樣品溶液； ⑥ 石斛藥材質(zhì)量評價：按照步驟③測定供試樣品的指紋圖譜，以供試樣品指紋圖譜中 的特征峰的相對保留時間和保留峰面積與標準指紋圖譜對比，相似度> 0.85的為質(zhì)量好 的該類石斛藥材，相似度< 〇. 6的為該類劣質(zhì)石斛藥材或是其他種類的石斛藥材。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的石斛藥材的質(zhì)量評價方法，其特征在于：步驟①所述的 對照品溶液的制備過程為：精密稱取夏佛托苷，用75%甲醇（V水：V甲醇=25:75)溶解 稀釋，制備成濃度為16. 4 μ g/ml的夏佛托苷溶液即為對照品溶液；步驟①所述的標準樣品 溶液的制備過程為：取某類不同批次的標準石斛干燥樣品，用粉碎機粉碎，過篩，得石斛粉 末，精密稱取石斛粉末l.OOOg，置于100mL錐形瓶中，加入50mL 75%甲醇（V水：V甲醇= 25:75)，室溫下超聲30min后取出，過濾，濾液旋蒸濃縮至干，用75 %甲醇溶劑（V水：V甲醇 =25:75)溶解，然后轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中定容，搖勻，以0. 45 μπι微孔濾膜過濾，即得該類 不同批次的標準石斛準樣品溶液；步驟①所述的供試樣品溶液的制備過程為：取供試石斛 干燥樣品，用粉碎機粉碎，過篩，得石斛粉末，精密稱取石斛粉末I. 〇〇〇g，置于100mL錐形瓶 中，加入5〇1^75%甲醇（￥水：￥甲醇=25:75)，室溫下超聲3〇11^11后取出，過濾，濾液旋蒸 濃縮至干，用75%甲醇溶劑（V水：V甲醇= 25:75)溶解，然后轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中定容，搖 勻，以0. 45 μ m微孔濾膜過濾，即得供試樣品溶液。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的石斛藥材的質(zhì)量評價方法，其特征在于：所述精密稱取 石斛粉末的稱量誤差< 〇. 2%;所述過篩為過孔徑0. 335mm的篩；所述的一元醇為甲醇或乙 醇；所述的室溫超聲時間為10_40min。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的石斛藥材的質(zhì)量評價方法，其特征在于：流動相為0. 4% 乙酸+20mmol/L乙酸銨溶液㈧和乙腈（B)。7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的石斛藥材的質(zhì)量評價方法，其特征在于：所述標準石斛 藥材可以為鐵皮石斛、霍山石斛、兜唇石斛、齒瓣石斛、金釵石斛、疊鞘石斛、鼓槌石斛、環(huán)草 石斛以及流蘇石斛中的任意一種。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的石斛藥材的質(zhì)量評價方法，其特征在于：所述洗脫梯度如下 所示： 時間（min) A相濃度 B相濃度（％) 0 魏 2 12 85 15 24 45. 64 36 m 25 75 80 S 95，： 理論板數(shù)按夏佛托苷計算，應不低于10000。9. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的石斛藥材的質(zhì)量評價方法，其特征在于：所述石斛的 標準指紋圖譜中含有11個特征峰，保留時間分別為：10. 83±0. 3min、13. 01±0. 3min、 21. 22±0. 3min、24. 15±0. 3min、27. 84±0. 3min、28. 80±0. 3min、43. 32±0. 3min、 44. 64±0. 3min、52. 67±0. 3min、56. 37±0. 3min 以及 66. 15±0. 3min，其中，保留時間為 24. 15±0. 3min的峰為夏佛托苷對照品的特征峰。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種石斛藥材的質(zhì)量評價方法，步驟包括：以夏佛托苷色譜峰為對照品，用HPLC(高效液相色譜法)制定標準指紋圖譜；通過供試樣品的指紋圖譜與標準指紋圖譜的對比，確定供試樣品的質(zhì)量。該方法對各供試樣品的前處理方法簡單，特征性成分保留完成，且供試樣品溶液穩(wěn)定性良好；該高效液相色譜方法的精密度較高、重現(xiàn)性良好，分析時間較短，具有一定的專屬性，所得指紋圖譜中各指紋峰分離效果較好，能夠準確全面的反應石斛藥材質(zhì)量，進一步完善了石斛藥材的質(zhì)量標準，從而可以應用于藥用石斛的石斛組培苗、石斛鮮品、石斛干品的質(zhì)量分級及真?zhèn)舞b別。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/88
【公開號】CN105424850
【申請?zhí)枴緾N201510745330
【發(fā)明人】梁瓊麟, 邵自星, 梁曉萍, 趙田
【申請人】北京藍標一成科技有限公司
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年11月5日