價方法來對石斛檢測到的化學(xué)成分進(jìn)行質(zhì)量 控制具有重要的意義。
【附圖說明】
[0030] 下面根據(jù)附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0031] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例所述的對照品夏佛托苷色譜峰的HPLC圖；
[0032] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例一所述的對10批鐵皮石斛藥材的指紋圖譜；
[0033] 圖3是本發(fā)明實(shí)施例一所述的鐵皮石斛的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
[0034] 圖4為美化石斛的指紋圖譜；
[0035] 圖5為流蘇石斛的指紋圖譜；
[0036] 圖6為金釵石斛的指紋圖譜。
[0037] 圖7是本發(fā)明實(shí)施例二所述的10批鼓槌石斛的HPLC指紋圖譜；
[0038] 圖8是本發(fā)明實(shí)施例二所述的鼓槌石斛的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
[0039] 圖9是本發(fā)明實(shí)施例三所述的10批兜唇石斛的HPLC指紋圖譜；
[0040] 圖10是本發(fā)明實(shí)施例三所述的兜唇石斛的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
[0041] 圖11是本發(fā)明實(shí)施例四所述的10批疊鞘石斛的HPLC指紋圖譜；
[0042] 圖12是本發(fā)明實(shí)施例四所述的疊鞘石斛的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
[0043] 圖13是本發(fā)明實(shí)施例四所述的10批疊鞘石斛的HPLC指紋圖譜；
[0044] 圖14是本發(fā)明實(shí)施例四所述的疊鞘石斛的HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
【具體實(shí)施方式】
[0045] 本發(fā)明【具體實(shí)施方式】如下：
[0046] 實(shí)施例1 :鐵皮石斛質(zhì)量評價方法
[0047] 儀器和試劑：儀器:Agilentl200series高效液相色譜儀（包括低壓二元梯度栗 G1312A，柱溫箱G1316A，二極管陣列檢測器G1315B，Chemstation化學(xué)工作站，美國Agilent 科技有限公司），l〇〇g手提式粉碎機(jī)（廣州旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司）Milli-QSynthesis超 純水純化系統(tǒng)（Millipore公司），RQ-250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）， PB303-N電子天平（MEETTLERTOLEDO, 0. 001g)，0. 45μm微孔濾頭（津騰公司）。試劑：乙 腈、甲醇（色譜純，美國Fisherscientific公司）；其它試劑為分析純；超純水（MilliQ超 純水，過〇.45μπι微孔濾膜）；乙酸（北京東方精細(xì)化工品有限公司）。
[0048] 本發(fā)明中石斛藥材HPLC指紋圖譜建立的色譜條件為AlltimaC18色譜柱；二極管 陣列檢測器；流動相為乙腈/乙酸一乙酸銨溶液，梯度洗脫；檢測波長為280±10nm;柱溫 25-35°C;流速0. 8-1. 2ml/min;優(yōu)選的當(dāng)流速為lml/min，檢測波長為280nm，柱溫為30°C 時，評價方法如下：
[0049] (1)對照品溶液的制備：精密稱取夏佛托苷對照品0· 164mg，用75%甲醇（V水：V 甲醇=25:75)溶解稀釋，制備成濃度為16. 4μg/ml夏佛托苷對照品溶液。
[0050] (2)標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的制備：分別取不同批次的鐵皮石斛干燥樣品，用粉碎機(jī)粉碎， 過藥典篩（孔徑〇.335mm)，精密稱取鐵皮石斛粉末l.OOOg，置于100ml錐形瓶中，加入 50mL75%甲醇（V水：V甲醇=25:75)，室溫下超聲30min后取出，過濾，濾液旋蒸濃縮至 干，用75%甲醇溶劑（V水：V甲醇=25:75)溶解，最后轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中定容，搖勻，以 0. 45μm微孔濾膜過濾，即得不同批次鐵皮石斛樣品的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0051] (3)采用高效液相色譜儀進(jìn)行測定的色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)為：色譜分離柱 填料AlltimaC18色譜柱（250mmX4. 6mm，5um)，流動相：包括流動相A和流動相B，流動相A 為0. 4%乙酸+20mmol/L乙酸銨水溶液，流動相B為乙腈，；流速lml/min，檢測波長280nm， 柱溫 30°C;采用梯度洗脫方式：0min- 12min- 35min- 45min- 60min- 80min，乙腈 2% -15%- 24%- 36%- 75%- 95% (即米用梯度洗脫方如表1所不），后運(yùn)彳丁lOmin;在 此條件下分析不同批次的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，得到鐵皮石斛的指紋圖譜。
[0052] 表1流動相的梯度洗脫變化表
[0053]
[0054]
[0055] (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測定：分別精密吸取不同批次標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液和對照品溶液， 分別注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定，以對照品夏佛托苷色譜峰作為指紋圖譜的參照峰，夏 佛托苷色譜峰如圖1所示，計算標(biāo)準(zhǔn)樣品各特征峰的相對保留時間和保留峰面積，制定得 到標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
[0056] (5)供試樣品溶液的制備過程為：取供試干燥樣品，用粉碎機(jī)粉碎，過篩，得石斛 粉末，精密稱取石斛粉末l.OOOg，置于l〇〇ml錐形瓶中，加入50mL75%甲醇（V水：V甲醇= 25:75)，室溫下超聲30min后取出，過濾，濾液旋蒸濃縮至干，用75 %甲醇溶劑（V水：V甲醇 =25:75)溶解，然后轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中定容，搖勻，以0. 45μπι微孔濾膜過濾，即得供試 樣品溶液；
[0057] (6)供試樣品質(zhì)量評價：取供試樣品（包括劣質(zhì)鐵皮石斛和其他類型的石斛）按 照上述⑶所述方法及步驟，測定出指紋圖譜，與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計算相似度。
[0058] 按照上述方法，對10批鐵皮石斛藥材建立了HPLC指紋圖譜（如圖2所示），表2為 10批石斛相似度結(jié)果，根據(jù)10批次樣品的指紋圖譜，制定鐵皮石斛的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。相似 度顯示了各批次圖譜與對照圖譜的相似程度，其值越接近1. 〇〇〇說明與對照圖譜越相似。 由表2可知，各樣品相似度值大于0. 85,相似度較高，樣品之間的化學(xué)物質(zhì)差異越小。各樣 品圖譜相似度集中于0. 85-0. 96之間，說明該10批鐵皮石斛品質(zhì)相對比較穩(wěn)定；而劣質(zhì)鐵 皮石斛藥材和其他類型的石斛藥材的相似度均在〇. 6以下（圖4-6為其他類型的石斛），因 此，根據(jù)指紋圖譜的這些特征和相似度可以對各類石斛的質(zhì)量做出評價。
[0059] 表2 10批鐵皮石斛相似度結(jié)果
[0060]
[0062] 實(shí)施例二：鼓槌石斛的質(zhì)量評價方法
[0063] 與實(shí)施例一不同的是：
[0064] 標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的制備：取不同批次的鼓槌石斛干燥樣品，用粉碎機(jī)粉碎，過藥典篩 (孔徑〇· 335_)，精密稱取石斛粉末1. 000g，置于100ml錐形瓶中，加入50mL75%甲醇（V 水：V甲醇=25:75)，室溫下超聲30min后取出，過濾，濾液旋蒸濃縮至干，用75%甲醇溶劑 (V水：V甲醇=25:75)溶解，最后轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中定容，搖勻，以0. 45μm微孔濾膜過 濾，即得不同批次的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液。
[0065] 表3 10批鼓槌石斛指紋圖譜相似度評價結(jié)果
[0066]
[0067] 按照上述方法，對10批鼓槌石斛藥材建立了HPLC指紋圖譜（如圖7)，表3為10 批鼓槌石斛相似度結(jié)果，根據(jù)10批次樣品的指紋圖譜，制定鼓槌石斛的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜（如 圖8)。
[0068] 由表3可知，各樣品相似度值大于0.85,相似度較高，樣品之間的化學(xué)物質(zhì)差異越 小。說明該10批鼓槌石斛品質(zhì)相對比較穩(wěn)定；而劣質(zhì)鼓槌石斛藥材和其他類型的石斛藥材 的相似度均在〇. 6以下（圖4-6為其他類型的石斛），因此，根據(jù)指紋圖譜的這些特征和相 似度可以對各類石斛的質(zhì)量做出評價。
[0069] 實(shí)施例三：兜唇石斛的質(zhì)量評價方法
[0070] 與實(shí)施例一不同的是：
[0071] 標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的制備：取不同批次的兜唇石斛干燥樣品，用粉碎機(jī)粉碎，過藥典篩 (孔徑〇· 335_)，精密稱取石斛粉末1. 000g，置于100ml錐形瓶中，加入50mL75%甲醇（V 水：V甲醇=25:75)，室溫下超聲30min后取出，過濾，濾液旋蒸濃縮至干，用75%甲醇溶劑 (V水：V甲醇=25:75)溶解，最后轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中定容，搖勻，以0. 45μm微孔濾膜過 濾，即得不同批次的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液。
[0072] 表4 10批兜唇石斛指紋圖譜相似度評價結(jié)果
[0073]
[0074] 按照上述方法，對10批兜唇石斛藥材建立了HPLC指紋圖譜（如圖9)，表3為10 批兜唇石斛相似度結(jié)果，根據(jù)10批次樣品的指紋圖譜，制定兜唇石斛的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜（如 圖 10)。
[0075] 由表4可知，各樣品相似度值大于0. 85,相似度較高，樣品之間的化學(xué)物質(zhì)差異越 小。說明該10批鼓槌石斛品質(zhì)相對比較穩(wěn)定；而劣質(zhì)兜唇石斛藥材和其他類型的石斛藥材 的相似度均在〇. 6以下（圖4-6為其他類型的石斛），因此，根據(jù)指紋圖譜的這些特征和相 似度可以對各類石斛的質(zhì)量