一種脂質體人工皮膚膜及其制備方法和在外用制劑中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及經皮給藥技術領域，特別是涉及一種脂質體人工皮膚膜及其制備方法 和在外用制劑中的應用。
【背景技術】
[0002] 眾所周知，經皮給藥是除口服以外的主要給藥途徑之一，具有給藥方便、可隨時中 止用藥、能夠避免口服給藥的首過效應及胃腸道副作用等優點。但是，皮膚是人體最主要的 屏障，大部分藥物較難通過皮膚角質層，因此，不管是局部給藥還是全身給藥，經皮給藥制 劑處方的設計和優化都需要開展體外透皮吸收實驗，以評價經皮滲透性能或優選制劑處方 工藝。
[0003] 由于人皮難以獲得，長期以來，離體動物皮膚被廣泛應用于外用制劑的體外透皮 實驗，但動物皮膚存在種屬、個體、部位、年齡、性別等各種生物因素導致的差異，實驗可控 性和重現性不佳，并且動物皮膚的使用也存在一定倫理學問題。如能采用人工皮膚膜替代 動物皮膚進行體外透皮實驗，將有效地解決上述問題，無疑會為外用制劑包括化妝品的研 發提供有力的技術保障。目前文獻報道的人工皮膚膜主要是借助于簡單的改性技術制備， 與真實皮膚的擬合度較低，直接導致體外透皮實驗結果可信度不高。脂質體是一種組成和 結構類似于生物膜的微型載體，本發明基于脂質體技術，模擬皮膚角質層的組成和結構，并 通過脂質體融合改性人工膜，致力于研發一種重現性好且能模擬真實皮膚的人工皮膚膜， 能夠替代動物皮膚在體外透皮試驗中的應用。
[0004] 發明方案
[0005] 發明目的：本發明要解決的技術問題是研發一種能夠代替真實皮膚進行體外透皮 實驗的人工皮膚膜。該人工膜應用了脂質體技術，模擬角質層的結構特征，從而模擬皮膚的 屏障作用，可以替代真實皮膚應用到體外透皮吸收實驗中，使體外透皮吸收實驗結果具有 較好的可控性和重現性。
[0006] 技術方案：本發明提供一種用于模擬真實皮膚的脂質體人工皮膚膜，其包含兩種 粒徑不同的脂質體，1份過孔徑為SOOnm聚碳酸酯膜的脂質體，1~10份過孔徑為400nm聚 碳酸酯膜的脂質體。
[0007] 作為本發明的進一步改進，所述脂質體采用磷脂材料制備所得，其中磷脂材料為 重量比為1~8:1:0. 2:0. 6:2的卵磷脂，膽固醇，膽固醇硫酸酯、神經酰胺、棕櫚酸。磷脂材 料優選為重量比為8:1~1:1的卵磷脂和膽固醇。最優選為卵磷脂。
[0008] 作為本發明的更進一步改進，所述兩種粒徑不同的脂質體，其組成為1份過孔徑 為SOOnm聚碳酸酯膜的脂質體，2份過孔徑為400nm聚碳酸酯膜的脂質體。
[0009] 作為本發明的更進一步改進，所述兩種粒徑不同的脂質體分層鋪于多孔膜上（見 圖1)。
[0010] 本發明同時提供上述脂質體人工皮膚膜的制備方法，包括脂質體的制備、多孔膜 與嵌套底部的密封、脂質體與多孔膜的結合、凍融循環步驟。
[0011] 作為本發明的進一步改進，所述脂質體采用被動載藥法或主動載藥法制備所得， 其中被動載藥法選自超聲分散法、冷凍干燥法、復乳法、注入法、反相蒸發法、超臨界法；主 動載藥法選自PH梯度法、硫酸銨梯度法、醋酸鈣梯度法。優選為薄膜分散法。
[0012] 作為本發明的進一步改進，本發明同時提供的脂質體人工皮膚膜的制備方法包括 如下步驟：
[0013] 1)脂質體的制備：稱取作膜材用的磷脂材料5~10份，溶于50~120份無水乙 醇或體積比為2:1的氯仿-甲醇混合溶液；減壓蒸發除去溶劑，形成薄膜；再用50~120份 含有5~15 %乙醇的磷酸鹽緩沖溶液室溫水合，得到脂質體混懸液；最后將脂質體混懸液 分別擠壓過孔徑為400nm和SOOnm的聚碳酸酯膜，得到兩種粒徑的脂質體；
[0014] 2)多孔膜與膜嵌套底部的密封：將膜嵌套底部原有的膜去掉，將孔徑為0. 45 μm 的尼龍膜和膜嵌套底部150°C加熱，使多孔膜與嵌套底部形成完全密封的小室；
[0015] 3)脂質體與多孔膜的結合：將步驟1)制備所得過孔徑400nm聚碳酸酯膜的脂質 體1份，加入到步驟2)制得的嵌套中，2000rpm離心10min ;將嵌套版旋轉180°，再次加入 步驟1)制備所得過孔徑400nm聚碳酸酯膜的脂質體1份，2000rpm離心10min ;然后將膜置 于干燥箱中50°C加熱至干燥；最后加入步驟1)制備所得過孔徑SOOnm聚碳酸酯膜的脂質 體1份，2000rpm離心10min，去除上清液，制得脂質體人工皮膚膜初品；
[0016] 4)凍融循環：將步驟3)制備所得脂質體人工皮膚膜初品置于-70~-120°C冷凍 0. 5~lh，取出后50~75°C加熱0. 5~lh，如此循環凍融2~3次，即得脂質體人工皮膚 膜。
[0017] 本發明同時提供用上述方法制備所得的脂質體人工皮膚膜及其在外用藥物制劑 或化妝品中的應用，包括用于經皮途徑的軟膏劑、凝膠劑、乳膏劑、貼膏劑、貼劑、溶液劑、乳 劑、混懸劑、涂劑、搽劑、洗劑、膜劑、氣霧劑、噴霧劑等劑型體外透皮吸收性質的評價。
[0018] 本發明同時提供用上述方法制備所得的脂質體人工皮膚膜在考察或篩選透皮吸 收促進劑的作用及機制中的應用。
[0019] 有益效果
[0020] 本發明提供的脂質體人工皮膚膜能夠替代真實皮膚用于體外透皮吸收實驗，不同 極性藥物成分透過行為與真實皮膚類似，并且模擬程度優于市售人工皮膚膜。
【附圖說明】
[0021] 圖1脂質體人工皮膚膜示意圖
[0022] 圖2模型藥物在脂質體人工皮膚膜、市售人工皮膚膜和真實皮膚的體外透皮曲線 (η = 5);橫坐標為透過時間、縱坐標為單位面積透過量
[0023] 圖3布洛芬通過人工皮膚膜與大鼠皮膚的透皮吸收曲線（η = 5)
[0024] 圖4采用偏最小二乘判別法（PLS-DA)模型，對脂質體人工皮膚膜組、市售Start-M 膜組，及大鼠皮組透過數據進行多維統計分析得分圖（score plot)
[0025] 圖5大鼠皮、脂質體人工皮膚膜、市售Start-M膜的紅外測定結果
【具體實施方式】
[0026] 下面將結合實施例進一步闡明本發明的內容，但這些實例并不限制本發明的保護 范圍。
[0027] 實施例1 :脂質體人工皮膚膜的制備
[0028] 包括如下步驟：脂質體的制備、多孔膜與嵌套底部的密封、脂質體與多孔膜的結 合、凍融循環，具體按如下步驟進行：
[0029] (1)脂質體的制備：稱取卵磷脂460mg，膽固醇140mg，置于前形瓶，用12ml無水乙 醇溶解，用旋轉蒸發儀除去溶劑，成膜。成好的膜置于真空干燥箱過夜除去殘余溶劑。加入 含10 %乙醇的磷酸鹽緩沖溶液12ml水合，得到脂質體混懸液。將該脂質體混懸液分成兩 份，分別過400nm和SOOnm的聚碳酸酯膜，得到兩種粒徑的脂質體混懸液。
[0030] (2)多孔膜與嵌套底部的密封：將尼龍膜（孔徑0. 45 μ m)和膜嵌套底部150°C高 溫加熱25~30s，使之形成完全密封的小室。
[0031] (3)脂質體與多孔膜的結合：將小室置于六孔板中，先加入過400nm聚碳酸酯膜擠 出的脂質體〇. 6ml，2000rpm，離心10min，再將小室水平旋轉180°，加入過400nm聚碳酸酯 膜擠出的脂質體〇. 6ml，2000rpm離心10min ;然后將膜置于干燥箱中50°C加熱使膜干燥； 再加入過800nm聚碳酸酯膜擠出的脂質體0. 6ml，2000rpm離心10min，去除上清液。
[0032] 凍融循環：將載有脂質體的膜置于-80°C冷凍lh，再于真空干燥箱中65°C加熱 0. 5h，完成一次凍-融，重復該凍融循環3次，即得脂質體人工皮膚膜。
[0033] 實施例2 :脂質體人工皮膚膜的制備
[0034] 與實施例1不同的是，步驟（1)中稱取卵磷脂360mg，膽固醇180mg置于前形瓶，用 IOml氯仿-甲醇（v/v = 2:l)溶解，用旋轉蒸發儀除去溶劑，成膜。成好的膜置于真空干燥 箱過夜除去殘余溶劑。加入含5%乙醇的磷酸鹽緩沖溶液IOml水合，得到脂質體混懸液。 步驟（4)中凍融循環條件為，-120