充氣微泡的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及新的充氣微泡，其制備W及在診斷和治療方法中的用途。
【背景技術】
[0002] 造影劑的在近幾年快速發展已經產生了許多不同的組合物和制劑，它們在人體或 動物體的器官和組織中的造影增強成像中和在治療性處理中是有用的。
[0003] -類造影劑，特別是用于超聲造影成像的造影劑，包括分散在水性介質中的納米 和/或微米尺寸的氣體泡懸浮液。該氣體通常是被夾帶或包封在穩定化薄膜層中，所述穩 定薄膜層包括，例如，乳化劑，油類，增稠劑或糖類。運些穩定化的氣泡（分散在適宜的生 理溶液中）通常設及本領域中的各種術語，典型地取決于用于其制備的穩定化材料；運些 術語包括，例如，"微球"，"微泡"，"微膠囊"或"微球"，在此全部被稱為"充氣微泡"（或"微 泡"）。
[0004] 特別令人感興趣的是充氣微泡的水懸浮液，其中氣體的氣泡通過非常薄的包絡 (膜）而被限定于氣/液界面，該包絡（膜）設及配置在氣液界面上穩定化兩親性材料（通 常為憐脂）。運些懸浮液通過粉末狀的兩親性材料接觸空氣或其它氣體而有利的制備，例如 冷凍干燥制備的脂質體或冷凍干燥或噴霧干燥的脂質溶液，然后接觸含水的載體，同時攬 拌W產生可W隨后給藥的充氣微泡的懸浮液，優選在其制備后不久給藥。充氣微泡的水性 懸浮液及其制備的實施例已經被公開，例如，US5, 271，928,US5, 445, 813,US5, 413, 774， US5,556,610,US5,597,549,US5,827,504,W097/29783 和W02004/069284,其通過參考 而全文引入到本文中。穩定化層可W包含，除了上述所提及的憐脂類，還有其它的兩親性材 料，如脂肪酸。例如，Sonovue? (由化accoSuisseS.A.制造的商業化的超聲造影劑） 包括作為成膜穩定層的憐脂和脂肪酸的混合物。
[0005] 最近，已經注意到所謂的"分子成像"，其中，適于祀點的特定成分被用在進行器官 或組織選擇性造影增強成像的造影劑的制劑中。此外，造影劑制劑的治療性應用，任選與分 子成像相聯合，也已經被描述。
[0006] 充氣微泡的制劑可W被適當地修飾，或用于提高診斷效果（例如，通過分子成像） 和/或用于治療目的，例如藥物遞送和/或超聲介導的溶栓治療。例如，微泡可W與治療劑 和/或與特定的成分相關聯（例如通過包含在它們邊界外膜之中），其能夠連接患者身體內 確定的目標（稱為"祀向配體"）。祀向配體的實例包括，例如，能夠與在致病過程中由器官 或組織表達的特異性受體結合的膚類，蛋白質，抗體，適體或碳水化合物，所述致病過程例 如，血管生成，炎癥或血栓形成。
[0007] 本申請人現已發現，有可能通過在制劑的穩定層中包括飽和和不飽和脂肪酸的混 合物，提高基于憐脂的充氣微泡的某些特性。特別的是，已經觀察到所述飽和/不飽和脂肪 酸混合物的存在出人意料地增加了充氣微泡的穩定性，相對于在形成穩定層的制劑中僅分 別含有一種飽和或不飽和脂肪酸的相應微泡。
[0008] 發巧簡沐
[0009] 因此，本發明的一個方面設及在生理上可接受液體載體中的充氣微泡的懸浮液， 所述具有穩定化外膜的微泡含有憐脂、飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸，其中飽和和不飽和脂 肪酸的摩爾比是從2.5 : 1至1 : 8。
[0010] 優選飽和和不飽和脂肪酸的摩爾比是從1.5 : 1至1 : 7.5,更優選從1 : 1至 1 : 6,甚至更優選從1 : 1.5至1 : 4,特別優選的是從1 : 2至1 : 3的摩爾比。
[0011] 根據優選的實施方案，憐脂與飽和/不飽和脂肪酸混合物的摩爾比是從3 : 7至 4 : 1，優選從2 : 3至7 : 3,和甚至更優選從2.5 : 3至3 : 2。
[0012] 在一個優選實施方案中，在生物相容性氣體存在下，包括上述量的憐脂和脂肪酸 的制劑（優選W凍干形式）與生理上可接受的液體載體混合而獲得所述懸浮液。
[0013] 本發明的另一個方面設及一種密封小瓶，其含有藥物制劑和生物相容性氣體，所 述制劑包含如上述定義的憐脂、飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸。該制劑任選地還包含藥學上 可接受的添加劑和/或賦形劑。在一個優選實施方案中，所述制劑是在冷凍干燥（凍干） 形式。
[0014] 發巧詳沐
[0015] 本發明的制劑包含飽和和不飽和脂肪酸的混合物W及憐脂，其可W用于制造用于 診斷成像和/或作為治療劑的充氣微泡。
[0016] 本發明的制劑是特別有益于形成一個層，該層使在液體懸浮液中的氣體的氣泡穩 定（穩定層）。該制劑可W包括額外的兩親性材料，W及通常是冷凍干燥（凍干）制劑的形 式，優選包含凍干添加劑。本發明的充氣微泡可W通過在生理上可接受的氣體存在下，混合 所述制劑與生理上可接受的液體載體而制備。
[0017] 胎化酸
[0018] 術語"脂肪酸"包括在其含義范圍的簇酸，該簇酸包含一個相對長的脂肪族鏈，例 如從10至28個碳原子（Cl。CJ。脂肪族鏈優選是直鏈（直）鏈。用于根據本發明組合物 的脂肪酸優選包括Cw-C24脂肪族鏈，更優選C14-C22脂肪族鏈并且甚至更優選通過簇基封端 的Cie-Cw脂肪族鏈。
[0019] 脂肪酸可W是飽和的或不飽和的（即含有一個或多個不飽和度，通常是雙鍵）。
[0020] 飽和脂肪酸包括在脂肪族鏈中無不飽和度的脂肪酸，如，例如：羊蠟酸（正-癸 酸），月桂酸（正-十二燒酸），肉豆違酸（正-十四燒酸），棟桐酸（正-十六燒酸），硬脂 酸（正-十八燒酸），花生酸（正-二十燒酸），山齋酸（正-二十二燒酸）和正-二十四 燒酸。優選的飽和脂肪酸是肉豆違酸，棟桐酸，硬脂酸和花生酸。
[0021] 不飽和脂肪酸可W包括在脂肪族鏈上有一個，兩個，=個，四個或五個不飽和度 (特別是雙鍵）。優選的不飽和度是處于順式構型。優選地，不飽和脂肪酸包括=個或更低 的不飽和度，更優選的是兩個或更低的不飽和度；特別優選的是包括在脂肪族鏈中單不飽 和度的不飽和脂肪酸。為簡便起見，不飽和脂肪酸有時用下列的烷基鏈中碳原子數和在鏈 中不飽和度的位置表示；例如棟桐油酸，即順式-9-十六碳締酸，被稱為Cw順式-A9 (或簡 單地：CwA9)。不飽和脂肪酸的實例包括，例如，癸締酸，十二碳締酸，十四碳締酸，十六碳 締酸，十六碳二締酸，十八碳締酸，十八碳二締酸，十八碳立締酸，十八碳四締酸，二十碳締 酸，二十碳二締酸，二十碳=締酸，二十碳四締酸，二十碳五締酸，二十二碳締酸，二十二碳 二締酸，二十二碳立締酸，二十二碳四締酸，二十二碳五締酸和二十四碳締酸。優選的不飽 和脂肪酸包括肉豆違締酸（順式-9-十四碳締酸），棟桐油酸（順式-9-十六碳締酸），棟 桐酸（順式-6-十六碳締酸），油酸（順式-9-十八締酸），亞油酸（順式-9,12-十八碳二 締酸），亞麻酸（順式-9,12,15-十八碳=締酸），巨頭嫁魚酸（順式-11-二十碳締酸）， 順式-11，14-二十碳二締酸，順式-5,8,11-二十碳S締酸，順式-8,11，14-二十碳S締酸， 順式-11，14,17-二十碳=締酸，花生四締酸（順式-8,11，14,17-二十碳四締酸）和芥酸 (順式-13-二十二碳締酸），特別優選的是棟桐油酸，油酸和巨頭嫁魚酸。
[0022] 飽和和不飽和脂肪酸的混合物優選包含具有相差至多四個碳原子烷基鏈長度的 酸；更優選的飽和和不飽和酸在各自的鏈長度中，相差至多兩個碳原子，和甚至更優選相差 至多一個碳原子；特別優選的是包含具有相同烷基鏈長度的飽和和不飽和脂肪酸的混合物 (例如棟桐酸/棟桐締酸，硬脂酸/油酸，花生酸/巨頭嫁魚酸等）。
[0023]本申請人已經觀察到，通過使用包括摩爾比從2.5 : 1至1 : 8的飽和/不飽和 脂肪酸的組合物，相對于僅采用相同濃度的飽和或不飽和脂肪酸的微泡，可W制備具有增 加穩定性的充氣微泡。優選的是，組合物中飽和和不飽和脂肪酸的摩爾比是從1.5 : 1至 1:7.5，更優選是從1:1至1:6，甚至更優選是從1:1.5至1:4，特別優選的是從 1 : 2至1 : 3的摩爾比。
[0024]
[00巧]本文所使用的，術語"憐脂"意欲涵蓋包含至少一個憐酸基團和至少一個，優選兩 個，（C12-C22)控鏈的兩親性化合物，其能夠在最終的微泡懸浮液的氣-水邊界界面形成穩定 的膜層（通常W單分子層的形式）。因此，運些材料也在本領域中被稱為"成膜憐脂"。
[0026] 術語憐脂包括天然存在的，半合成的或合成的產物，其可W單獨的或作為混合物 而使用。
[0027]適宜憐脂的實例包括具有一個或優選兩個（相同或不同的）脂肪酸殘基和憐酸 殘基的甘油醋，其中所述憐酸殘基依次與親水基團相結合，親水基團如，例如，膽堿（憐脂 酷膽堿-PC)，絲氨酸（憐脂酷絲氨酸-P巧，甘油（憐脂酷甘油-PG)，乙醇胺（憐脂酷乙醇 胺-P巧，肌醇（憐脂酷肌醇）。僅具有一個脂肪酸殘基的憐脂的醋通常在本領域中被稱為 "溶血"形式的憐脂或"溶血憐脂"。在憐脂中存在的脂肪酸殘基通常是長鏈脂肪酸，通常包 括從12到24個，優選從14到22個碳原子；該脂肪族鏈可W包含一個或多個不飽和度或優 選是完全飽和的。包含在憐脂中的適宜脂肪酸的實例是，例如，月桂酸，肉豆違酸，棟桐酸， 硬脂酸，花生酸，山齋酸，油酸，亞油酸，和亞麻酸。優選地，可W使用飽和脂肪酸，如肉豆違 酸，棟桐酸，硬脂酸和花生酸。
[0028]憐脂的進一步實例是憐脂酸，即甘油憐酸與脂肪酸的二醋；銷脂類，如銷憐脂，即 那些憐脂酷膽堿類似物，其中甘油二醋與脂肪酸的殘基被替換為神經酷胺鏈；屯、憐脂類，即 1,3-雙憐脂酷甘油與脂肪酸的醋；糖脂類如神經節巧脂GM1(或GM2)或腦巧脂；糖脂；硫脂 和糖（神經）銷脂類。
[0029] 天然存在的憐脂的實例是天然卵憐脂（憐脂酷膽堿（PC)的衍生物），例如，通常 的，大豆或蛋黃卵憐脂。
[0030] 半合成憐脂的實例是天然存在的卵憐脂的部分或完全氨化的衍生物。優選的憐脂 是憐脂酷膽堿，乙基憐脂酷膽堿，憐脂酷甘油，憐脂酸，憐脂酷乙醇胺，憐脂酷絲氨酸，憐脂 酷肌醇或銷憐脂的脂肪酸二醋。
[0031]憐脂的具體實例是，