于干燥器內冷卻，冷卻后稱 重，選取重量差距較小的一批備用。
[0040] 儀器設備：4°C恒溫冰箱、分光光度計（能同時測定663、645兩個波段的吸光值)、 離心機（6000轉)、量筒（25ml)、塑料離心管（10ml)、真空泵、0.45um微孔醋酸纖維濾膜、干 燥器、小鑷子、玻璃平皿、l〇ml離心管架。
[0041] 測定步驟：1)取待測液，搖勻，量取25ml，放入真空泵抽濾，將藻類過濾置濾膜上， 以小鑷子輕取濾膜，置于l〇ml離心管備用；2)取配制好的二甲基亞砜與80%丙酮混合液 l〇ml，加入上一步離心管中，迅速搖勻，將濾膜溶解(如果搖勻不及時，濾膜將粘貼在離心管 上，影響實驗效果；3)將離心管置于離心管架，放入4°C恒溫冰箱內，靜置提取24h;4)經過 靜置提取后，測定樣品吸光值，測定波長分別為663nm、645nm，按照公式帶入，即可得到葉綠 素-a吸光值；5)測定過程中，每個水樣要求測定雙樣，以保證數據的穩定性，同時，要求測 定CK，S卩：水樣，不經過藻類過濾，其余步驟與測定方法相同。
[0042] 計算公式：葉綠素-a含量（ug/L) = (12. 7XA663純吸光值-2. 69XA645純吸光 值）X萃取液體積（ml)/水樣體積（L)。
[0043] 實施例7微生態液體制劑降氮功能測定 配制亞硝、氨氮降解能力測定培養基，亞硝氮、氨氮濃度分別為2. 5mg/L，滅菌。實驗前 試驗組添加EM10產品，菌濃度為104CFU/mL;對照組為空白，分別培養1、2、3天后取樣進行 測定。
[0044] 測定方法：在超凈臺中，將待測菌株菌液接入相應的測定培養基中，接種終濃度為 5X105CFU/mL，重復數為3 ;放入搖床中進行培養30°C，180r/min;均勻取樣到1. 5mL離心 管中，12000rpm離心3min，取上清200μL加入96孔板； 測定亞硝態氮時，在96孔板中加入待測樣上清液200μL后，每孔先后加入格里斯試劑Α、Β各20μL，于550nm比色測定；測定氨氮時每孔加入納氏試劑20μL，于450nm比色測定。
[0045] 篩選培養基為兩種：氨氮篩選培養基和亞硝酸氮篩選培養基； 氨氮篩選培養基為每50mL由（NH4) 2S04母液50ul，市售粉碎蝦料0. 05mg和余量的水 (0%。、3%。、15%。鹽濃度）組成，銨態氮濃度為：2.511^/1; 亞硝酸氮篩選培養基為每50mL由NaN02母液50ul，市售粉碎蝦料0. 05mg和余量的水 (0%。、3%。、15%。鹽濃度）組成，亞硝態氮濃度為：2.511^/1; 硫酸銨母液為稱取9g(NH4)2S04加入1L模擬蝦池水，此時銨態氮濃度約為：2. 5g/l; 亞硝酸鈉母液為稱取3.75gNaN02加入1L模擬蝦池水，此時亞硝態氮濃度約為：2. 5g/ 1〇
[0046] 如圖2、3所示：添加EM10培養3天，氨氮降解率分別為71%、83%，92%，對照組為： 0%、1%、1% ;亞硝氮降解率分別為：71%、84%、88%，對照組為：0%、1. 5%、2. 3%，3天后氨氮、亞硝 氮降解率都達到了 80%以上，EM10發揮了非常理想的降氮功效。
[0047] 本發明復合微生態制劑中的菌種都是安全、優良菌種；菌種豐富，功能全面：不僅 能夠降解養殖水體中的有害物質、剩余傅料及雜質；且含有有機酸等有益因子，提1?養殖動 物免疫活性；發酵生產過程中能夠合成微生物蛋白，為有益藻生長提供原料；產品穩定性 好，防污染能力強。
[0048] 以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人 員來說，在不脫離本發明技術原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾 也應視為本發明的保護范圍。
【主權項】
1. 一種復合微生態制劑，其特征在于，其為枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢 桿菌、地衣芽孢桿菌、屎腸球菌、短小乳桿菌、植物乳桿菌、乳酸乳球菌和釀酒酵母通過混菌 液體深層發酵制備而成。2. 如權利要求1所述的復合微生態制劑，其特征在于，芽孢桿菌的活菌數為 1X109tFU/mL，乳酸菌活菌數為1X109tFU/mL，酵母菌的活菌數為1X106sCFU/mL。3. 如權利要求1所述的復合微生態制劑，其特征在于，所述的枯草芽孢桿菌的保藏號 為CGMCCNo. 9356。4. 如權利要求1所述的復合微生態制劑，其特征在于，所述的屎腸球菌的保藏號為 CGMCCNo. 9134。5. 權利要求1-4任一項所述的復合微生態制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步 驟： 1) 種子液制備：分別制備所述菌株的一級和二級種子液； 2) 種子罐發酵：將步驟1)的制備的所述菌株的種子液混合均勻后接入種子罐進行 混合發酵，發酵溫度33°C，轉速60-100rpm，灌壓0· 5Mpa，通風比是1:0. 4-0.8,pH值為 4. 3-7. 0,發酵時間 8-10h; 3) 發酵罐發酵：種子罐發酵完成后，全部接入發酵罐進行發酵罐發酵，發酵溫度33°C， 轉速 60-100rpm，灌壓 0· 5Mpa，通風比是 1:0. 4-0.8,pH值為 4. 3-7. 0,發酵時間 8-10h。6. 如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，芽孢桿菌種子液的制備方法如下： 將所述的芽孢桿菌的單菌落分別接種至MNB培養基中，180rpm，33°C培養12-16h至 0D600為0. 9~1. 1 ;按照1. 0-2. 0%的接種量將制備的一級種子液接種至MNB培養基中， 180rpm，33°C培養 10_12h至 0D600 為 0· 7~1. 0。7. 如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，乳酸菌種子液的制備方法如下： 將所述的乳酸菌的單菌落分別接種至MRS培養基中，37 °C培養16-24h至0D600為 0. 8~1 ;將制備好的一級種子液按照1. 0-2. 0%的接種量接種至MRS培養基中，37°C培養 16-20h至 0D600 為 0· 7-1. 0。8. 如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，釀酒酵母種子液的制備方法如下： 將釀酒酵母接種至YH)培養基中，180rpm30°C培養12-16h至0D600為0. 8-1. 0 ;將制 備好的一級種子液按照〇. 5-1. 0%的接種量接種至YH)培養基中，180rpm30°C培養10_12h至 0D600 為 0· 8-1. 0。9. 如權利要求6-8任一項所述的制備方法，其特征在于，種子罐發酵和發酵罐發酵所 用培養基含有：可溶性淀粉5-10g/L;蛋白胨15-20g/L;酵母膏2-4g/L;葡萄糖15-20g/L; 磷酸二氫鉀2-4g/L;氯化鈉3-5g/L;碳酸|丐0. 5-lg/L。
【專利摘要】本發明主要針對目前水產養殖中池塘水質差的問題，應用現代生物工程技術，提供一種水產用改水肥水功能的復合活菌制劑及其制備方法。本發明的復合微生態制劑為枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、屎腸球菌、短小乳桿菌、植物乳桿菌、乳酸乳球菌和釀酒酵母通過混菌液體深層發酵制備而成。在該液體制劑中微生物處于休眠狀態，穩定而易保存，投放到水體后，休眠菌株能夠很快復蘇，迅速分解水中的有害物質如：亞硝酸氮、氨氮等，同時，促進優良藻類生長，抑制有害藻類繁殖，從而達到改善養殖水體水質的目的。CGMCC No913420140508
【IPC分類】C12R1/11, C12R1/10, C12R1/125, C12R1/07, C12R1/865, C12R1/25, C12N1/18, C12R1/24, C12R1/01, C02F3/34, C12N1/20
【公開號】CN105462872
【申請號】CN201410461391
【發明人】胡婷, 馬青山, 贠錦軍, 何增國
【申請人】北京大北農科技集團股份有限公司, 福建大北農水產科技有限公司, 天津昌農科技有限責任公司
【公開日】2016年4月6日
【申請日】2014年9月11日