組為（CK)空白，培養溫度為30°C， 轉速180rpm，培養1、2、3天后取樣進行測定。亞硝氮降解率分別為：71%、84%、88%，對照組 為：0%、1· 5%、2· 3%。
[0025] 圖3為EM10發酵液樣品氨氮降解率測定結果。起始亞硝氮濃度為2. 5mg/L，實驗 前試驗組添加EM10產品，菌濃度為104CFU/mL;對照組為（CK)空白，培養溫度為30°C，轉速 180rpm，培養1、2、3天后取樣進行測定。添加EM10培養3天，氨氮降解率分別為71%、83%， 92%，對照組為：0%、1%、1%。
【具體實施方式】
[0026] 以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
[0027] 實施例1共生菌種組合的獲得 將以下所有菌株作為微生態制劑研究的候選菌株：（1)本實驗室新保藏功能優異的 菌株：枯草芽抱桿菌CfeciUiA? )CGMCCNo. 9356 和屎腸球菌（/?terococci/6· /aeci?)CGMCCNo. 9134 ; (2 )實驗室已保藏優秀菌株包括：地衣芽孢桿菌rfeciWys CGMCCNo. 7030 ;釀酒酵母菌 cereKisiae) CGMCCNo. 6921 ;短小乳桿菌OgcioAaciWiA? CGMCCNo. 4756 ;約氏乳桿菌 (Xactobacillusjohnsonii、No.AQ26,蹲廢免於麗（Lactobacillusacidophilus)〇6皿0：吣.6499;乳酸片球菌(/^//〇^〇^^?(3^^//7 (^以^)0610：吣.6500;(3)市售菌株： 從市售單菌株菌粉中分離得到如下菌株：1株乳酸乳球菌，分離自MG1614乳酸乳球菌菌粉； 1株植物乳桿菌，分離自購自于北京和美科盛生物技術有限公司的P8植物乳桿菌菌粉；1株 干酪乳桿菌，分離自芯來旺生物科技(南京）有限公司干酪乳桿菌菌粉；1株解淀粉芽孢桿 菌，分離自汕頭市富耕源農業科技有限公司解淀粉芽孢桿菌菌粉；1株巨大芽孢桿菌，分離 自滄州旺發生物技術研究所（普通合伙）菌粉；1株放線菌，分離自滄州旺發生物技術研究 所有限公司菌粉。將以上株菌采用同一培養基YH分別培養后，取濃度相同的菌株種子液各 lmL，接入一定體積的液體培養基YH液體培養基中進行混合培養，發酵溫度33°C，搖床轉速 lOOrpm，起始pH值為7. 0,連續培養5d，將獲得的混合菌液梯度稀釋，分別在LB、MRS、YH)和 高氏一號固體培養基上進行涂布，挑取所有不同單菌落進行鑒定。
[0028] 鑒定結果為：1株枯草芽孢桿菌、1株巨大芽孢桿菌、1株解淀粉芽孢桿菌、1株地衣 芽孢桿菌、1株屎腸球菌、1株短小乳桿菌、1株植物乳桿菌、1株乳酸乳球菌、1株釀酒酵母菌 共9株菌，在發酵液中共生存在。
[0029] 所用的發酵培養基配方如下：可溶性淀粉，10g/L;蛋白胨20g/L;酵母膏4g/L;葡 萄糖20g/L;磷酸二氫鉀4g/L;氯化鈉5g/L;碳酸鈣lg/L。
[0030] 實施例2 9株菌液體混合培養 篩選得到9株菌的共生菌種組合，將9株菌采用同一培養基YH分別培養后，取濃度相 同的菌株種子液各lmL，接入一定體積的液體培養基YH中進行混合培養，發酵溫度33°C， 搖床轉速l〇〇rpm，起始pH值為7. 0,連續培養4d，記錄0、3、4d活菌數，結果如表1所 示：9株菌混合培養4d后，芽孢桿菌總濃度達到1. 4X1012CFU/mL以上，乳酸菌總濃度為 6. 08X10nCFU/mL以上，酵母菌濃度為6. 52X10sCFU/mL以上，說明9株菌協同生長情況良 好。
[0031]表1
實施例3 9株菌種子液制備 (1) 4株芽孢桿菌種子液的制備 將枯草芽孢桿菌H8-1，保藏編號為CGMCCNo. 9356 ;巨大芽孢桿菌；地衣芽孢桿菌 CGMCCNo. 5094 ;解淀粉芽孢桿菌CGMCCNo. 7030 單菌落分別 接種至裝有l〇〇mlMNB培養基的250mL錐形瓶中，搖床轉速為180rpm，33°C恒溫搖床中培 養16h;將制備好的一級種子液，0D600為0. 9左右，按照1. 0%的接種量接種至裝有500mL MNB培養基的1L錐形瓶中，33°C恒溫搖床中培養12h，搖床轉速為180rpm，0D600為0. 8左 右； (2) 4株乳酸菌種子液的制備 將屎腸球菌，保藏編號為CGMCCNo. 9134 ;短小乳桿菌(ZactoAaciWiA?AreKis)CGMCC No. 4756 ;植物乳桿菌；乳酸乳球菌單菌落分別接種至裝有100mlMRS培養基的250mL錐形 瓶中，37°C恒溫厭氧培養20h;將制備好的一級種子液，0D600為1. 0,按照2. 0%%的接種量 接種至裝有500mLMRS培養基的1L錐形瓶中，37°C恒溫厭氧培養20h，0D600為1. 0。
[0032] (3) 1株釀酒酵母種子液的制備 將釀酒酵母菌 cereKisiaeOCGMCCNo. 6921 接種至裝有 100mlYPD 培養基的250mL錐形瓶中，30°C恒溫搖床中培養12h，搖床轉速為1800rpm;將制備好的一級 種子液，0D600為0. 8 ;按照0. 5%的接種量接種至裝有500mlYH)培養基的1L錐形瓶中， 30°C恒溫搖床中培養12h，搖床轉速為180rpm，0D600為0. 8。
[0033] 實施例4種子罐液體混菌發酵 分別取500mL的各菌株二級種子液，共4. 5L種子液，在發酵前混合均勻后接入裝液量 為70L的100L種子罐中進行混菌發酵，發酵溫度33°C，轉速lOOrpm，灌壓0. 5Mpa，通風比是 1: 0. 4-0. 8,初始pH值為6. 7,發酵時間8h，鏡檢菌落形態種類齊全，且比例均勻。
[0034] 所用的發酵培養基YH配方如下：可溶性淀粉，10g/L;蛋白胨20g/L;酵母膏4g/L; 葡萄糖20g/L;磷酸二氫鉀4g/L;氯化鈉5g/L;碳酸鈣lg/L。
[0035] 實施例5發酵罐液體混菌發酵制備微生態液體制劑 種子罐發酵完成后，全部接入裝液量為1. 2t的1. 5t發酵罐，在一定條件下進行發酵罐 發酵，發酵溫度33°C，轉速lOOrpm，灌壓0. 5Mpa，通風比是1:0. 4-0. 8,pH值為4. 3-7. 0,發 酵時間9h，鏡檢菌落形態種類齊全，且比例均勻。
[0036] 所用的發酵培養基YH配方如下：可溶性淀粉，10g/L;蛋白胨20g/L;酵母膏4g/L; 葡萄糖20g/L;磷酸二氫鉀4g/L;氯化鈉5g/L;碳酸鈣lg/L。
[0037] 實施例6發酵液肥水功效測定 取10mL配制的肥水膏到1000mL水中組成功效測定培養基。配制統一肥水功效測定培 養基，滅菌，實驗前同時加入同比例的小球藻液體。在光照條件下，室溫，放置培養72h，培 養過程中每隔4h進行搖晃15次。實驗分為陰性對照組（CK)、陽性對照組（市售產品組） (一種全效穩水劑，產品組成菌種分類與EM10相似，現廣泛應用于水產養殖中。）以及試驗組 (EM10組，實施例5制備的微生態液體制劑，下同)，重復數為3,EM10和市售產品組接種菌濃 度終為105CFU/mL，分別從瓶中取樣10mL樣品進行葉綠素-a含量的測定，如圖1可見，EM10 組和市售產品組樣品的葉綠-a含量分別比CK組葉綠素-a含量提高了 42. 12%和34. 48%。
[0038] 肥水膏配方為：糖蜜，78%;硝酸銨，5%;腐植酸鈉，7%;硅酸鈉，5%;過磷酸鈣，3%; 磷酸二氫鉀，〇. 2% ;硫酸錳，0. 6% ;硫酸銅，0. 25% ;七水硫酸亞鐵，0. 5% ;鑰酸銨，0. 1% ;硼 酸，0. 1%;硫酸鋅，0.25%; 葉綠素測定方法： 試劑配制：配制80%丙酮備用；二甲基亞砜與80%丙酮按照體積比1:2的比例配制溶劑 (現用現配）。
[0039] 濾膜的制備：將孔徑為0. 45um的醋酸纖維濾膜浸泡于1%。HC1中24h，浸泡后用蒸 餾水涮洗干凈，用小鑷子置于玻璃平皿上，50°C烘干；烘干后放