保了目標產物的高效合成。 [0047] 進一步，所述操作方法中，鎖住步驟5)中萃取溶劑為乙醚、石油醚、環己烷、正己烷 中的一種或幾種任意比例的混合溶劑。
[0048]進一步，DTX-5-維瑞肽偶合物的合成路線如下：
[0050]進一步，具體操作方法如下：
[0051 ] 1)選用NH2-Rink-Linker-Resin特殊的固相合成樹脂，用-Trt基團保護的疏基(- SH)在I2/DIEA條件下可在固相合成樹脂上形成分子內二硫鍵，用烯丙甲酯基(AllylO-CO) 保護Lys5側鏈的氨基，在加入特定的催化劑選擇性脫除烯丙甲酯基，得到N-端氨基受保護、 Lys5-側鏈氨基游離的維瑞肽樹脂，并將其置于固相合成反應器中，用無水二氯甲烷浸洗后 抽取溶劑并通入干燥氮氣；
[0052] 2)將多西紫杉醇-2'-丁二酸酯（DTX-Linker)溶于無水二氯甲烷，加入ByBop， DIEA，在一定條件下反應一段時間，滴入上述通有氮氣的固相合成反應器中；
[0053] 3)將反應后的溶液減壓濃縮，濃縮液依次用二甲基甲酰胺洗滌6次，二氯甲烷洗滌 5次，乙醚、石油醚、環己烷、正己烷的一種或任意比例的混合溶劑洗滌3次，減壓濃縮后即得 到維瑞肽Lys5(DTX-Linker-NH)_固相合成樹脂；
[0054] 4)目標產物從固相合成樹脂上解離步驟如下：將干燥的樹脂加入一定的溶劑中， 攪拌1小時后過濾，將過濾后的物質用無水二氯甲烷洗滌過濾；
[0055] 5)目標產物純化步驟如下:合并上述濾液后減壓濃縮，濃縮物用溶劑萃取，抽濾收 集溶劑不溶的固體，干燥后得到目標產物即DTX-5-維瑞肽偶合物。
[0056] 進一步，所述操作方法中，所述步驟1)中烯丙甲酯基脫除反應的催化劑為:Pd[P (C6H5)3]4、C6H5SiH3中的一種或兩種任意比例混合物，其中摩爾比1:1為最佳，采用上述脫除 劑的有益效果為:脫除烯丙甲酯基的同時，其他保護基不受影響，確保了目標產物的高效合 成。
[0057] 進一步，所述操作方法中，所述步驟2)中溶解DTX-Linker的二氯甲烷可用無水二 氯乙烷替換，其中無水二氯乙烷與無水二氯甲烷的替換摩爾比為：（1:1)-(3:1);溶劑ByBop 可以用六氟異丙醇替換，其中六氟異丙醇與ByBoy的替換摩爾比為：（1:1)-(3:1);反應體系 溶劑DIEA可用N，N-二甲基甲酰胺替換，其中N，N-二甲基甲酰胺與DIEA的替換摩爾比為：（1: 1)-(3:1)〇
[0058]進一步，所述操作方法中，所述步驟2)中反應條件為:反應溫度為：（20-35 )°C，攪 拌速度為：（200-800 )r/min，攪拌時間（5-30)min，其中最佳反應條件為:反應溫度為25°C， 攪拌速度為540r/min，攪拌時間為10min。
[0059] 進一步，所述操作方法中，所述步驟4)中解離試劑為質量分數為2%-10%的三氟 乙酸的二氯甲烷溶液，其中最佳質量比為5%;所述步驟4)中解離反應條件為:反應溫度為： (20-25)°C，攪拌速度為：（300-800)r/min，攪拌時間為：（0.8-1.5)h，最佳反應條件為:反應 溫度為:231，攪拌速度為:45(^/ 1^11，攪拌時間為：1.011。所述的本操作方法的有益效果是 將目標產物從樹脂上切除，同時避免了目標產物結構遭到破壞，確保了目標產物的高效合 成。
[0060] 進一步，所述操作方法中，所述的步驟5)中萃取溶劑為乙醚、石油醚、環己烷、正己 烷中的一種或幾種任意比例的混合溶劑。
[0061 ]進一步，（DTX)2-維瑞肽偶合物的合成路線如下：
[0063]所述的(DTX)2-維瑞肽偶合物液相合成的技術方案如下：
[0064] 1)將DTX-5-維瑞肽偶合物粗品加入到特定溶劑中，在室溫下滴入高效偶合試劑， 低速攪拌，滴加中間體DTX-1inker，在特定條件下反應一段時間；
[0065] 2)將反應后的溶液進行減壓蒸餾，除去多余的溶劑，將殘余物滴入冰水中，減壓濃 縮，收集水中析出的固體并用蒸餾水洗滌3次。所得固體用特定的溶劑進行重結晶，得到目 標產物(DTX) 2_維瑞肽偶合物。
[0066]進一步，所述操作方法中，所述步驟1)中特定溶劑是指N，N-二甲基甲酰胺、DIEA、 無水二氯甲烷、無水二氯乙烷中一種或兩種的混合溶劑，所述步驟1)中高效偶合試劑為 HOCt、DMC、DIC、DIEA按一定比例的混合溶齊IJ，其中Vdmc:VH〇ct= (5:1)-(10:1)，Vdic:Vdiea= (3:1)-(8:1)〇
[0067] 進一步，所述操作方法中，所述步驟1)中反應條件為:反應溫度為：（20_25)°C，攪 拌速度為：（300-800 )r/min，攪拌時間為（5-25 )min，其中最佳反應條件為：反應溫度為23 °C、攪拌速度為450r/min、攪拌時間lOmin。
[0068] 進一步，所述操作方法中，所述步驟2)中重結晶溶劑為甲醇、乙酸乙酯任意比例混 合的溶劑，其中甲醇可用乙醇等同替換，但并不僅限于乙醇一種溶劑。
[0069]所述的(DTX)2-維瑞肽偶合物固相合成的具體技術方案如下：
[0070] 1)按照權利要求6制備出維瑞肽-Lys5(DTX-Linker-NH)-固相合成樹脂后，在室溫 下加入高效偶合試劑，低速攪拌，滴加中間體DTX-Linker進行反應，在特定條件下反應一段 時間；
[0071] 2)將反應后溶液進行減壓濃縮，將濃縮物滴入冰水中，抽濾收集水中析出的固體 并用蒸餾水洗滌3次，所得固體用乙醚或乙酸乙酯進行重結晶，即得到(DTX)2-維瑞肽-固相 合成樹脂；
[0072] 3)目標產物(DTX)2-維瑞肽偶合物從固相合成樹脂上解離反應步驟如下：將干燥 的樹脂加入質量分數為2%-10%的三氟乙酸的二氯甲烷溶液中，攪拌1小時后過濾，過濾物 再用無水二氯甲烷洗滌過濾；
[0073] 4)目標產物純化步驟如下:合并上述濾液后減壓濃縮，濃縮物用溶劑萃取，抽濾收 集溶劑不溶的固體，干燥后得到純凈的目標產物(DTX)2-維瑞肽偶合物。
[0074] 進一步，所述操作方法中，所述步驟1)中高效偶合試劑為:!10(^、01(：、01(：、0此八按 一定比例混合的混合溶劑，其中關鍵溶劑HOCt為公司自制，Vdmc:VHQCt = (5:1)-(10:1)，VDIC: Vdiea= (3:1)-(8:1)〇
[0075] 進一步，所述操作方法中，所述步驟1)中反應條件如下：反應溫度為：（20_25)°C， 攪拌速度為：（300-800)r/min，攪拌時間為(5-25)min，其中最佳反應條件是:反應溫度為23 °C、攪拌速度為450r/min、攪拌時間lOmin。
[0076] 進一步，所述操作方法中，所述步驟4)中萃取溶劑為乙醚、石油醚、環己烷、正己烷 中的一種或幾種任意比例的混合溶劑。
[0077]本發明采用的上述技術方案，具有的有益效果在于：
[0078]本發明所合成制備的多西紫杉醇-維瑞肽偶合物，從根本上克服了多西紫杉醇細 胞選擇性低、毒副作用大、水溶性差的缺點，具有選擇性高、毒副作用低、水溶性好的優異性 能，達到了抗癌細胞毒性與癌細胞表面受體高選擇性的優勢互補，顯著提高了藥物抗癌活 性，大大降低了毒副作用，且其具有良好的水溶性為劑型制備及給藥方式的選擇提供了方 便，因此，通過分子靶向多肽與多西紫杉醇相連接而制備的DTX-1-維瑞肽偶合物、DTX-5-維 瑞肽偶合物、（DTX)2-維瑞肽偶合物，有利于增強腫瘤部位多西紫杉醇的濃度，更有效地提 高抗癌效率，本發明制備的多西紫杉醇維瑞肽偶合物在新型高效低毒分子靶向抗癌藥物研 發領域具有重要應用前景。
[0079] 說明書附圖
[0080] 附圖1多西紫杉醇-維瑞肽偶合物的總體合成工藝路線圖。
[0081] 附圖2透射電鏡下(DTX)2-維瑞肽偶合物處理后A549細胞的凋亡過程。
[0082]附圖3實施例2-5產物及DTX濃度及培養時間對A549細胞凋亡率的影響。
【具體實施方式】
[0083]實施例1多西紫杉醇-2'-丁二酸酯的合成
[0084]多西紫杉醇（1.212g，1.5mmol)溶于無水二氯甲烷（15ml)，加入4-二甲基氨基吡 啶(DMAP，1.5mol)，丁二酸酐(0.190g，1.9mmol)，于0°C攪拌26小時后，加入乙酸乙酯150ml， 并用鹽酸（1.0m〇l/L)調至pH3-4,依次用60ml的蒸餾水洗滌3次，40ml的飽和食鹽水萃取2 次，用無水硫酸鈉干燥，過濾后減壓回收乙酸乙酯。所得殘余物用丙酮-乙醚重結晶，得到多 西紫杉醇-2 ' -丁二酸酯純品 1.115g，收率81.9%JPLC: 9.10min，質譜分析:MS: 901.3[M+H ]+，Mw:907.95 (C47H57NO17)。
[0085]實施例2DTX-1-維瑞肽偶合物的合成
[0086] 將與固相合成樹脂NH2-Rink-Linker-Resin相連，用-Trt基團保護的巰基(-SH)在 I2/DIEA條件下可在固相合成樹脂上形成分子內二硫鍵，側鏈保護Lys5-端氨基受保護、N-端 氨基游離的維瑞肽樹脂(含有維瑞肽〇.15mmol)置于固相合成反應器中，加入吡啶/N，N-二 甲基甲酰(質量比為1:5)，再用無水二氯甲烷浸洗后抽取溶劑并通入干燥氮氣，將多西紫杉 醇-2'-丁二酸酯(0· 363g，0.4mmol)溶于無水二氯甲燒（15ml)，加入DMC(0.099g，1 ·lmmol)， H0Ct(0.156g，0.30mmol)，DIC(0.227g，l.8mmol)，DIEA(0.039g，0.30mmol)，低速攪拌 lOmin，滴入上述固相合成反應器中并用干燥氮氣進行攪拌，在攪拌速度為450r/min、反應 溫度為23°C的條件下反應lh，再將反應溶液中的溶劑減壓濃縮，抽干溶劑，將過濾后物質依 次用5ml的二甲基甲酰胺洗滌6次，10ml二氯甲烷洗滌5次，5ml乙醚洗滌3次后減壓濃縮，除 去多余溶劑，將干燥的樹脂加入到20ml質量分數為2%的三氟乙酸的二氯甲烷溶液中，攪拌 1小時后過濾，將樹脂