致使基本上純的"。為了分離核酸，可W使用標準技術例如下述：堿/SDS處理、CsCl顯帶、 柱層析、瓊脂糖凝膠電泳及其他本領域眾所周知的其他技術。
[005。針對AT0H的單克隆抗體 其中穩態在血友病或其中傷口導致暫時性止血喪失的創傷患者中失調的出血障礙可W通過AT抑制劑進行治療。抗體、其抗原結合片段及其他AT特異性蛋白質支架可W用于 提供祀向特異性，W抑制AT蛋白質功能子集，同時保存剩余部分。考慮到ATP的血漿濃度 (<12ug/ml)相對于ATa (120ug/ml)中的至少10倍差異，在高度循環過量ATa的存在 下，任何潛在ATP抑制劑治療劑的特異性增加幫助阻斷ATP功能。阻斷ATP的抗凝功能 的ATP特異性抗體可W用作患有出血障礙的患者的治療劑。出血障礙的例子包括血友病、 具有抑制劑的血友病患者、創傷誘導的凝血病、在通過AT的敗血癥治療過程中嚴重出血的 患者、起因于選擇性手術(例如移植、屯、臟手術、矯形外科手術）的出血、和由于月經過多的 過量出血。具有長循環半衰期的抗ATPH抗體可W用于治療慢性疾病如血友病。具有更短 半衰期的AT 0 H抗體片段或AT 0 H結合蛋白支架可W對于急性用途(例如創傷中的治療用 途)更有效。ATPH結合抗體通過淘選且篩選針對與肝素復合的人ATP的人抗體文庫進行 鑒定。所鑒定的抗體顯示出與人ATPH的結合。將經分離的每種單克隆抗體的重鏈可變區 和輕鏈可變區測序，并且鑒定其CDR區。對應于AT0H特異性單克隆抗體的重鏈和輕鏈可 變區的序列標識號（"SEQIDNO")概括于表IA中。
[005引表IA-人抗AT0H(肝素復合的AT0 )抗體
[0053] 在至少一些可能的實施方案中，經分離的單克隆抗體與人ATeH結合，并且抑制 抗凝活性，其中所述抗體包含含有選自SEQIDNO: 2、4、6、8和10的氨基酸序列的重鏈可 變區。
[0054] 在至少一些可能的實施方案中，經分離的單克隆抗體與人AT0H結合，并且抑制 抗凝活性，其中所述抗體包含含有選自SEQIDNO: 1、3、5、7和9的氨基酸序列的輕鏈可變 區。
[00巧]在至少一些可能的實施方案中，經分離的單克隆抗體與人AT0H結合，并且抑制 抗凝活性，其中所述抗體包含含有選自SEQIDNO: 2、4、6、8和10的氨基酸序列的重鏈可 變區，W及含有選自SEQIDNO: 1、3、5、7和9的氨基酸序列的輕鏈可變區。
[0056] 在至少一些可能的實施方案中，抗體包含重鏈和輕鏈可變區，其包含： (a) 包含SEQIDNO: 2的氨基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQIDNO: 1的氨基酸序 列的輕鏈可變區； (b) 包含SEQIDNO: 4的氨基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQIDNO: 3的氨基酸序 列的輕鏈可變區； (C)包含SEQIDNO: 6的氨基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQIDNO: 5的氨基酸序 列的輕鏈可變區；或 (d) 包含SEQIDNO: 8的氨基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQIDNO: 7的氨基酸序 列的輕鏈可變區；或 (e) 包含SEQIDNO: 10的氨基酸序列的重鏈可變區，和包含SEQIDNO: 9的氨基酸 序列的輕鏈可變區。
[0057] 表IB顯示了關于人源化IgGHiAb的重鏈和輕鏈氨基酸序列。
[0058] 表IB-關于人源化IgGmAb的重鏈和輕鏈氨基酸序列。
[0059] 表IC-顯示了TPP2803IgG2,種系的且轉換為IgG2。表IC中所示的TPP2803 1邑62輕鏈62，^，氨基酸序列是56〇10^:59，并且表1(：中所示的1口口2803重鏈氨基酸序 列是沈QIDNO: 60。
[0060] 表IC-TPP2803IgG2,種系的且轉換為IgG2
[0061]表2A提供了關于與人AT e H結合的單克隆抗體的重鏈和輕鏈的CDR區（"CDRl"、"CDR2"和"CDR3")的沈Q ID NO:概括。
[006引表2A -關于人抗AT 0 H抗體的CDR區的序列標識符
[0063] 表2B提供了關于與人AT 0 H結合的單克隆抗體的重鏈和輕鏈的CDR區（"CDR1"、 "CDR2"和"CDR3")的沈Q ID NO:序列。
[0064] 表2B -關于人抗AT PH抗體的CDR區的序列
[0065] 在至少一些可能的實施方案中，提供了與人ATPH結合的經分離的單克隆抗體， 其中所述抗體包含含有SEQIDNO: 46-50中任何一個的氨基酸序列的CDR3。運些CDR3來 自在淘選和篩選過程中鑒定的抗體的重鏈。
[0066] 在一個進一步的實施方案中，該抗體進一步包含：（a)含有選自SEQIDNO: 36-40 的氨基酸序列的CDRl;(b)含有選自SEQIDNO: 41-45的氨基酸序列的CDR2 ;或（C)含有 選自SEQIDNO: 36-40的氨基酸序列的CDRl，W及含有選自SEQIDNO: 41-45的氨基酸 序列的CDR2兩者。
[0067] 在至少一些可能的實施方案中，抗體共享來自在淘選和篩選過程中鑒定的抗體輕 鏈之一的CDR3。因此，還提供的是經分離的單克隆抗體，其中所述抗體與AT0H結合且抑制 抗凝活性，其中所述抗體包含含有選自SEQIDNO: 31-35的氨基酸序列的CDR3。在進一 步的實施方案中，抗體進一步包含（a)含有選自SEQIDNO: 21-25的氨基酸序列的CDRl; (b)含有選自沈QIDNO: 26-30的氨基酸序列的CDR2;或（C)含有選自沈QIDNO: 21-25的氨基酸序列的CDRl，W及含有選自SEQIDNO: 26-30的氨基酸序列的CDR2兩者。
[0068] 在至少一些可能的實施方案中，抗體包含來自由篩選和淘選鑒定的抗體的重鏈和 輕鏈的CDR3。提供的是經分離的單克隆抗體，其中所述抗體與AT0H結合且抑制抗凝活性， 其中所述抗體包含含有選自SEQIDNO: 46-50的氨基酸序列的CDR3,化及含有選自SEQID NO: 31-35的氨基酸序列的CDR3。在一個進一步的實施方案中，抗體進一步包含（a)含有 選自SEQIDNO: 36-40的氨基酸序列的CDRl;(b)含有選自SEQIDNO: 41-45的氨基酸 序列的CDR2 ;(C)含有選自SEQIDNO: 21-25的氨基酸序列的CDRl;和/或（d)含有選自 沈QIDNO: 26-30的氨基酸序列的CDR2。
[0069] 在一些實施方案中，抗體包含含有下述的重鏈和輕鏈可變區： (a) 包含含有SEQIDNO: 21、26和31的氨基酸序列的輕鏈可變區，W及包含含有SEQ IDNO: 36、41和46的氨基酸序列的重鏈可變區； (b) 包含含有SEQIDNO: 22、27和32的氨基酸序列的輕鏈可變區，W及包含含有SEQ IDNO: 37、42和47的氨基酸序列的重鏈可變區； (C)包含含有SEQIDNO: 23、28和33的氨基酸序列的輕鏈可變區，W及包含含有SEQ IDNO: 38、43和48的氨基酸序列的重鏈可變區； (d) 包含含有SEQIDNO: 24、29和34的氨基酸序列的輕鏈可變區，W及包含含有SEQ IDNO: 39、44和49的氨基酸序列的重鏈可變區； (e) 包含含有SEQIDNO: 25、30和35的氨基酸序列的輕鏈可變區，W及包含含有SEQ IDNO: 40、45和50的氨基酸序列的重鏈可變區。
[0070] 還提供的是與At0H結合且抑制抗凝活性的經分離的單克隆抗體，其中所述抗體 包含的氨基酸序列與選自SEQIDNO: 1-10中所示的氨基酸序列的氨基酸序列具有至少約 89%、約 90%、約 91%、約 92%、約 93%、約 94%、約 95%、約 96%、約 97%、約 98%、約 99% 或約 99. 5% 同一'性。
[0071] 抗體可W是物種特異性的，或可W與多個物種交叉反應。在一些實施方案中，抗體 可W與人、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猴、豬、狗、貓或其他哺乳動物物種的ATPH特異性反應或 交叉反應。
[0072] 抗體可W是各種抗體類別中的任一個，例如但不限于IgGUIgG2、IgG3、IgG4、IgM、 IgAUIgA2、分泌型IgA和I曲和I姐抗體。
[0073] 在一個實施方案中，提供的是針對人ATIII的經分離的全人單克隆抗體。
[0074] 抗AT e H抗體的優化變體 在一些實施方案中，抗體可W進行淘選、篩選且優化，例如W增加對AT0H的親和力、 進一步減少對ATa的任何親和力、改善對不同物種的交叉反應性、或改善AT0H的阻斷活 性。例如，通過利用CDR或與CDR緊密接近的氨基酸殘基，即與抗體的CDR郵鄰的約3或4 個殘基的位點飽和誘變，可W執行此類優化。
[00巧]還提供的是可W具有針對ATPH增加的或高親和力的單克隆抗體。在一些實施方 案中，抗AT0H抗體可W具有至少約IO8M1的結合親和力，在一些其他實施方案中，可W具 有至少約1〇9m1、約l〇i°M1、約IQiiM1或更大，例如最高達約10"M1或更大的結合親和力。 [0076] 在一些實施方案中，可W引入另外的氨基酸修飾，W降低與種系序列的分歧。在其 他實施方案中，可W引入氨基酸修飾，W促進用于大規模生產過程的抗體生產。
[0077] 在一些實施方案中，提供的是與人ATP特異性結合的經分離的抗ATPH的單克隆 抗體，所述抗體可W包含一個或多個氨基酸修飾。在一些實施方案中，抗體可W包含約1、約 2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、 約18、約19或約20個或更多個修飾。
[0078] 表位 還提供的是可W與人AT0H的預測表位結合的經分離的單克隆抗體，其中所述表位包 含來自人ATPH的一個或多個殘基，如圖11中所示。
[0079] 在一些實施方案中，表位包含人ATPH的N135位點。在其他實施方案中，位點可 W包含人AT0H的RCL環的氨基酸殘基序列的一部分。
[0080] 還提供的是可W與本文描述的抗體中的任一種競爭結合人AT0H的抗體。例如， 此類競爭抗體可W與上文描述的一個或多個表位結合。
[008。核酸、載體和宿主細胞 還提供的是編碼本文描述的單克隆抗體中任一種的經分離的核酸分子。因此，提供的 是編碼與人AT0H結合的抗體的經分離的核酸分子。表3顯示了一些抗AT0H抗體的核巧 酸序列。
[008引表3 -抗AT0H抗體的核巧酸序列。
[0083] 在一些實施方案中，經分離的核酸分子編碼與ATeH結合且抑制抗凝活性、但與 ATa具有最低限度結合的抗體，其中所述抗體包含含有選自SEQIDNO: 2、4、6、8和10的 氨基酸序列的重鏈可變區。
[0084] 在一些實施方案中，經分離的核酸分子編碼與AT0H結合且抑制抗凝活性、但與 ATa具有最低限度結合的抗體，其中所述抗體包含含有選自SEQIDNO: 1、3、5、7和9的氨 基酸序列的輕鏈可變區。
[0085] 在其他實施方案中，經分離的核酸分子編碼與ATP結合且抑制ATP的抗凝活性 的抗體，其中所述抗體包含含有選自SEQIDNO: 2、4、6、8和10的氨基酸序列的重鏈可變 區，或含有選自SEQIDNO: 1、3、5、7和9的氨基酸序列的輕鏈可變區，W及重鏈可變區或 輕鏈可變區中的一個或多個氨基酸修飾。
[0086] 進一步地，還提供的是包含編碼上文描述的單克隆抗體中任一種的經分離的核酸 分子的載體，W及包含此類載體的宿主細胞。
[0087] 制備針對AT目H的抗體的方法 單克隆抗體可W通過在宿主細胞中表達核巧酸序列重組產生，所述核巧酸序列編碼根 據本發明實施方案之一的單克隆抗體的可變區。借助于表達載體，含有核巧酸序列