。這種甜的液體稱(chēng)為"麥芽汁",而剩余的谷粒殘余物稱(chēng)為"麥糟"。糖化醪通常 經(jīng)過(guò)提取,這涉及將水加入到糖化醪中,以便由麥糟回收殘余的可溶提取物。
[0055] 在第三個(gè)步驟中,麥芽汁被強(qiáng)烈煮沸。這對(duì)麥芽汁進(jìn)行了消毒,并有助于顯色、形 成風(fēng)味和氣味。在煮沸過(guò)程中的某一時(shí)間點(diǎn)加入啤酒花。
[0056] 在第四個(gè)步驟中,麥芽汁被冷卻并轉(zhuǎn)移至發(fā)酵罐中,該發(fā)酵罐裝有酵母,或者向其 中加入酵母。酵母通過(guò)發(fā)酵將糖轉(zhuǎn)化成酒精和二氧化碳?xì)怏w;在發(fā)酵結(jié)束時(shí),將發(fā)酵罐冷 凍,或者可以將發(fā)酵罐冷凍至停止發(fā)酵。酵母絮凝并移除。
[0057] 在最后一個(gè)步驟中,將啤酒冷卻并儲(chǔ)存一段時(shí)間,在該過(guò)程中,啤酒變澄清并形成 其風(fēng)味,并且可能損害啤酒的外觀、風(fēng)味和保質(zhì)期的任何材料都沉淀下來(lái)。在包裝之前,將 啤酒充入二氧化碳,并可任選地過(guò)濾和巴氏消毒。
[0058] 發(fā)酵后,獲得飲料,其通常包含大約2重量%至大約10重量%的酒精。不可發(fā)酵 的碳水化合物在發(fā)酵過(guò)程中沒(méi)有被轉(zhuǎn)化,并形成了啤酒成品中主要的溶解固體。
[0059] 這種殘余物之所以保留是因?yàn)辂溠康矸勖覆荒芩獾矸鄣摩?-1,6-鍵。每12盎 司的啤酒,不可發(fā)酵的碳水化合物貢獻(xiàn)大約50卡路里。
[0060] 近來(lái),特別在美國(guó)市場(chǎng)上,出現(xiàn)了被稱(chēng)為清淡啤酒、少熱量啤酒或低熱量啤酒的廣 泛流行的釀造飲料。如在美國(guó)所定義的,這些啤酒比制造商的"正常啤酒"低大約30%卡路 里。
[0061] 關(guān)于傳統(tǒng)釀造工藝的其他信息以及適用于本發(fā)明的釀造技術(shù)領(lǐng)域中使用的術(shù) 語(yǔ)的定義可以在 the Research and Teaching Institute of Brewing(Berlin(VLB)) 的 Wolfgang Kunze 的〃Technology Brewing and Malting"(1999 年第二次修 訂版,ISBN 3-921690-39-0,第三版(2004): ISBN 3-921690-49-8,第四最新版, 2010(ISBN978-3-921690-64-2))中找到。
[0062] 木聚糖酶分類(lèi)為 EC 3· 2. I. 8、EC 3· 2. I. 32、EC 3· 2. I. 136 和 EC3. 2. I. 156 ;它 們的活性可以測(cè)量,例如在實(shí)施例中所述。與根據(jù)本發(fā)明的表現(xiàn)出內(nèi)切-1,3(4)-β-葡 聚糖酶活性的酶組合使用的合適的木聚糖酶包含分類(lèi)于EC 3. 2. 1.8、EC 3. 2. 1.32、EC 3. 2. L 136 和 EC 3. 2. L 156 中的任何木聚糖酶,例如在 WO 2010072226、WO 2010072225、 W02010072224.W0 2005059084,W0200705632Uff02008023060A,ff09421785,ff02006114095, W02006066582、US 2008233175 和 W010059424 中所公開(kāi)的任意一種。
[0063] 內(nèi)切-1,4-β木聚糖酶分類(lèi)為EC 3. 2. 1.8。該酶使木聚糖中的1,4-β-D-木糖苷 鍵從內(nèi)部水解。
[0064] 如本文所用,術(shù)語(yǔ)"家族11木聚糖酶"、"糖苷水解酶(GH)家族11"或簡(jiǎn)稱(chēng)"GH11木 聚糖酶"是指分類(lèi)為EC 3.2. 1.8的內(nèi)切-1,4-β木聚糖酶,其使木聚糖中的1,4-β-D-木 糖苷鍵從內(nèi)部水解,并且根據(jù) Β. Henrissat, A classification of glycosyl hydrolases based on amino acid sequence similarities. Biochem. J. 280 (1991),pp. 309 - 316,其分 類(lèi)為家族11木聚糖酶。
[0065] 術(shù)語(yǔ)"家族10木聚糖酶"、"糖苷水解酶(GH)家族10"或簡(jiǎn)稱(chēng)"CH10木聚糖酶" 包含具有多種已知的活性的酶,例如木聚糖酶(EC: 3. 2. 1. 8)、內(nèi)切-1,3-β-木聚糖酶 (EC: 3. 2. 1. 32)和纖維二糖水解酶(EC: 3. 2. 1. 91)。這些酶以前稱(chēng)為纖維素酶家族F。 [0066] 在一些實(shí)施方案中,表現(xiàn)出內(nèi)切-1,4- β -木聚糖酶活性的酶為家族11木聚糖酶。 在一些實(shí)施方案中,表現(xiàn)出內(nèi)切-1,4-β -木聚糖酶活性的酶為家族10木聚糖酶。
[0067] 在一個(gè)方面中,根據(jù)本發(fā)明的酶組合物具有內(nèi)切-1,4-β木聚糖酶活性,其可以 通過(guò)實(shí)施例中所述的測(cè)定法來(lái)測(cè)量。
[0068] 用于測(cè)量木聚糖酶活性的測(cè)定法可以在ρΗ3. 5或ρΗ5以及50°C下使用木聚糖作為 底物來(lái)實(shí)施,或者可以在不同的PH和溫度值下實(shí)施該測(cè)定法用于酶的其他特征和規(guī)格。酶 活性可以由每單位時(shí)間內(nèi)540nm處由木糖引起的吸光率的增加來(lái)計(jì)算。
[0069] 在一些實(shí)施方案中,根據(jù)本發(fā)明的酶組合物包含至少大約5000U/g,例如至少大約 6000U/g、例如至少大約7000U/g、例如至少大約8000U/g、例如至少大約8500U/g的木聚糖 酶活性,其可通過(guò)實(shí)施例中所述的測(cè)定法來(lái)測(cè)量。
[0070] 根據(jù)本發(fā)明的酶組合物可以具有纖維素水解活性。纖維素的系統(tǒng)名為4-(1,3 ; 1,4)-β-D-葡聚糖。4-葡聚糖水解酶以及纖維素水解酶或纖維素酶分類(lèi)為EC 3.2. 1.4。 纖維素酶內(nèi)切水解例如纖維素、地衣多糖和谷物β-D-葡聚糖中的(1 - 4)-β-D-葡糖苷 鍵,并且還水解β-D-葡聚糖(還包含1,3-鍵)中的1,4-鍵。此外,纖維素酶還具有其他 的名稱(chēng),例如內(nèi)切-1,4-β -D-葡聚糖酶、β -1,4-葡聚糖酶、β -1,4-內(nèi)切葡聚糖水解酶、纖 維素酶Α、木粉ΑΡ、內(nèi)切葡聚糖酶D、堿性纖維素、纖維素酶A 3、纖維素二糖酶、9. 5纖維素 酶、微晶纖維素酶、pancellase SS和1,4-(1,3 ;1,4)-0-〇-葡聚糖4-葡聚糖水解酶。
[0071] 在本發(fā)明的一個(gè)方面中,根據(jù)本發(fā)明的酶組合物的纖維素酶活性可以通過(guò)"纖維 素酶活性法"來(lái)測(cè)量,如下文中在標(biāo)題為"測(cè)定法"中所述。
[0072] 在其他方面中,本發(fā)明涉及具有內(nèi)切-1,3(4)_β-葡聚糖酶活性的酶,其活性可 以通過(guò)實(shí)施例中所述的測(cè)定法來(lái)測(cè)定。
[0073] 如本文所用," β -葡聚糖酶"或"beta-葡聚糖酶"是指EC 3. 2. 1. 6的內(nèi) 切-1,3 (4)-β-葡聚糖酶。當(dāng)葡萄糖殘基(其還原基團(tuán)與待水解的鍵有關(guān))本身在C-3 處被取代時(shí),所述的酶催化β-D-葡聚糖中(1->3)_或(I-M)-鍵的內(nèi)切水解。與根據(jù) 本發(fā)明的表現(xiàn)出內(nèi)切-1,4-β -木聚糖酶活性的酶組合使用的合適的β -葡聚糖酶包含 在 W02004087889、W02005059084、W09414953、W02007056321、W09531533、W008023060、 W02005100582、W09828410、W09742301、W02006066582、W005118769、W02005003319 和 W010059424中公開(kāi)的任意一種β-葡聚糖酶。
[0074] 在pH5. 0下實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定法,并且可以在不同的pH值下實(shí)施該測(cè)定法用于酶的 其他特征和規(guī)格。
[0075] -個(gè)單位的內(nèi)切-1,3(4)_β -葡聚糖酶活性被定義為在測(cè)定法的條件(pH5. 0(或 者指定的)和50°C )下,每分鐘產(chǎn)生I μ mole葡萄糖等價(jià)物的酶量。
[0076] 在一些實(shí)施方案中,根據(jù)本發(fā)明的酶組合物包含至少大約10000U/g,例如至少大 約12000U/g、例如至少大約14000U/g、例如至少大約15000U/g、例如至少大約18000U/g的 β -葡聚糖酶活性,其可通過(guò)實(shí)施例中所述的測(cè)定法來(lái)測(cè)量。
[0077] 在其他方面中,根據(jù)本發(fā)明的酶組合物具有昆布多糖酶(Iaminarinase)活性,或 者包含具有昆布多糖酶活性的任意一種或多種其他的酶。昆布多糖酶活性可以根據(jù)測(cè)定法 部分中所述的昆布多糖酶測(cè)定法的描述來(lái)測(cè)定。
[0078] 昆布多糖酶可以為分類(lèi)為Ε. C. 3. 2. 1. 6的內(nèi)切-1,3 (4) - β -葡聚糖酶或分類(lèi)為 E.C.3.2. 1.39的葡聚糖內(nèi)切-l,3-f3-D-葡萄糖苷酶。內(nèi)切-1,3(4)-β-葡聚糖酶分類(lèi)為 Ε. C. 3. 2. 1. 6,其備選名稱(chēng)為昆布多糖酶、內(nèi)切-1,3-β -葡聚糖酶、內(nèi)切-1,4-β -葡聚糖 酶。底物包括昆布多糖、地衣多糖和谷物D-葡聚糖,并且當(dāng)葡萄糖殘基(其還原基團(tuán)與待水 解的鍵有關(guān))本身在C-3處被取代時(shí),所述的酶催化β-D-葡聚糖中或(I-M)-鍵 的內(nèi)切水解。葡聚糖內(nèi)切-l,3-f3-D-葡萄糖苷酶(備選名稱(chēng)為(1->3)-β-葡聚糖內(nèi)切水 解酶、內(nèi)切-1,3-β-葡聚糖酶和昆布多糖酶)分類(lèi)為E.C. 3. 2. 1.39,并水解底物(例如昆 布多糖、裸藻淀粉和茯苓多糖)中(l->3)-f3-D-葡聚糖的(l->3)-f3-D-葡糖苷鍵。
[0079] 在一些方面中,根據(jù)本發(fā)明的酶組合物具有阿拉伯糖內(nèi)切酶(arabinanase)活 性,或者包含具有阿拉伯糖內(nèi)切酶活性的其他酶。阿拉伯糖內(nèi)切酶分類(lèi)為EC 3. 2. 1. 99。系 統(tǒng)名稱(chēng)為5-a -L-阿拉伯聚糖5-a -L-阿拉伯聚糖水解酶,但是其具有多個(gè)其他的名稱(chēng),例 如阿拉伯聚糖內(nèi)切-1,5-a -L-阿拉伯糖苷酶,以及內(nèi)切-1,5-a -L-阿拉伯糖內(nèi)切酶、內(nèi) 切-α -1,5-阿拉伯聚糖酶、內(nèi)切-阿拉伯聚糖酶、1,5- a -L-阿拉伯聚糖和1,5- a -L-阿拉 伯聚糖水解酶。阿拉伯糖酶內(nèi)切水解(1 - 5)-阿拉伯聚糖中的(1 - 5)-α -阿拉伯呋喃 糖苷鍵。阿拉伯糖內(nèi)切酶也作用于阿拉伯聚糖。
[0080] 在本發(fā)明的一個(gè)方面中,根據(jù)本發(fā)明的酶組合物的阿拉伯糖酶活性是通過(guò)下文中 在標(biāo)題為"測(cè)定法"中所述的阿拉伯糖酶測(cè)定法來(lái)測(cè)量的。在ΡΗ3. 5及50°C下,使用糖用甜 菜的阿拉伯聚糖作為底物來(lái)實(shí)施測(cè)定法,并且可以在不同的PH和溫度值下實(shí)施該測(cè)定法 用于酶的其他的特征和規(guī)格。酶活性可以由每單位時(shí)間內(nèi)540nm處吸光率的增加來(lái)計(jì)算。
[0081] 一個(gè)單位的阿拉伯糖酶活性定義為在測(cè)定法的條件(pH3. 5和50°C )下,使得 Λ OD54tol. HiirT1增加的酶量(對(duì)測(cè)定法的總體積進(jìn)行歸一化)。
[0082] 在一些方面中,根據(jù)本發(fā)明的酶組合物具有β -D-葡萄糖苷酶活性,或者包含具 有β -D-葡萄糖苷酶活性的其他酶。β -D-葡萄糖苷酶是指Ε. C 3. 2. 1. 21的酶。
[0083] 在一些方面中,根據(jù)本發(fā)明的酶組合物具有木糖苷酶活性,或者包含具有 β -木糖苷酶活性的其他酶。" β -木糖苷酶"或"木聚糖1,4-β -木糖苷酶"是指E. C 3. 2. 1. 37的酶。β -木糖苷酶催化(I-M) - β -D-木聚糖的水解,從而除去非還原末端的連 續(xù)D-木糖殘基。
[0084] 在本發(fā)明的一些方面中,根據(jù)本發(fā)明的酶組合物具有纖維二糖水解酶活性,或者 包含具有纖維二糖水解酶活性的其他酶。"纖維二糖水解酶"或"纖維素1,4-β -纖維二糖 分支酶"是指EC 3.2. 1.91的酶。纖維素1,4-β-纖維二糖分支酶催化纖維素和纖維四糖 中1,4-β -D-葡糖苷鍵的水解,從而由鏈的非還原末端釋放纖維二糖。
[0085] 根據(jù)本發(fā)明的酶組合物的纖維二糖水解酶活性是通過(guò)下文中在標(biāo)題為"測(cè)定法" 中所述的纖