板中。然后，在37°C下的C〇2培養箱中培養3小時誘發每種綴合物的受體內化。然 后，將用于檢測內吞受體的底物加入到孔板中并且使得在室溫下反應60分鐘，并利用發光 板閱讀器測量板的發光。測量的結果在圖2中示出。
[00巧]結果，如圖2中所示出的，實施例的綴合物顯示了37化M的EC日0，并且比較實施例的 綴合物顯示了14.59nM的ECso,運表明，與比較實施例的化P-I激動劑-免疫球蛋白化片段綴 合物相比，本發明的化P-I激動劑-免疫球蛋白化片段綴合物顯示了顯著降低的受體內化。 運樣的結果暗示，與其中生理活性的多膚W二聚體形式存在的綴合物相比，包括連接至免 疫球蛋白Fe片段的生理活性的多膚單體的綴合物可W顯示降低的受體介導的內化和清除 率。
[00%]實驗實施例2:化P-I激動劑-免疫球蛋白片段綴合物之間的體內藥代動力學的比 較的測試
[0097] 為了比較實施例的化P-I激動劑-免疫球蛋白化片段綴合物和化P-I激動劑-免疫 球蛋白化片段綴合物之間的體內藥代動力學，使用正常的SD大鼠分析綴合物的血清濃度的 改變。
[0098] 具體而言，將化P-I激動劑-免疫球蛋白Fe片段綴合物（400mcg/kg)和化P-I激動 劑-免疫球蛋白化片段綴合物(400mcg/kg)的每個在生理鹽水中稀釋并W2mL/kg的劑量皮 下施用給動物。在施用測試物質4、8、24、48、72、96、120、144、168、192、216、240、288、312和 336小時之后，從大鼠的頸靜脈采集血液，并從血液中分離血清。接下來，每個血清樣品中的 藥物濃度通過酶聯免疫吸附試驗量化，并且量化結果在圖3中示出。
[0099] 結果，實施例的化P-I激動劑-免疫球蛋白化片段綴合物和比較實施例的化P-I激 動劑-免疫球蛋白化片段綴合物的血清半衰期分別為40.9小時和28小時，并且綴合物的最 大血清濃度分別為1758.6ng/mL和742.7ng/mL。換句話說，當藥物W相同的劑量皮下施用給 正常的大鼠時，顯示了與二聚體GLP-I激動劑-免疫球蛋白化片段綴合物（圖3)相比，本發明 的單體GLP-I激動劑-免疫球蛋白Fe片段綴合物在體內吸收和半衰期方面是優異的。
[0100] 雖然已經參照具體的說明性實施方式對本發明進行了描述，但是本發明所屬領域 的技術人員將理解，本發明可W W其它具體的形式體現而不背離本發明的技術精神和基本 特性。因此，上面描述的實施方式在所有方面被視為是說明性的而不是限制性的。此外，本 發明的范圍由所附權利要求而不是【具體實施方式】所限定，并且應當理解，由本發明的含義 和范圍衍生的所有的變化和變體W及其等價物也被包含在所附權利要求的范圍中。
【主權項】
1. 一種長效藥物組合物，其包括綴合物，所述綴合物包括連接至免疫球蛋白Fc片段的 生理活性的多肽， 其中所述組合物包括單體綴合物，所述單體綴合物包括連接至單個免疫球蛋白Fc片段 的一分子的所述生理活性的多肽，并且任選地包括多聚體綴合物，所述多聚體綴合物包括 連接至單個免疫球蛋白Fc片段的兩分子或更多分子的相同的生理活性的多肽，條件是所述 組合物中所述單體綴合物與所述多聚體綴合物的摩爾比為至少19。2. 權利要求1所述的長效藥物組合物，其中所述綴合物進一步包括插入所述生理活性 的多肽和所述免疫球蛋白Fc片段之間以將所述生理活性的多肽連接至所述免疫球蛋白Fc 片段的非肽基連接體。3. 權利要求1所述的長效藥物組合物，其中與二聚體綴合物一一其包括經由非肽基連 接體連接至單個免疫球蛋白Fc片段的兩分子的所述生理活性的多肽，或綴合物一一其包括 框內連接至所述免疫球蛋白Fc片段的生理活性的多肽二聚體一一相比，所述單體綴合物顯 示了降低的受體介導的內化或受體介導的清除率。4. 權利要求1所述的長效藥物組合物，其中所述生理活性的多肽選自胰高血糖素樣肽_ 1 (GLP-1)、粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、人生長激素(hGH)、紅細胞生成素(EPO)、胰高血糖 素、胃泌酸調節素、胰島素、生長激素釋放激素、生長激素釋放肽、干擾素、干擾素受體、G-蛋 白-偶聯受體、白介素、白介素受體、酶、白介素結合蛋白、細胞因子結合蛋白、巨噬細胞活化 因子、巨噬細胞肽、B細胞因子、T細胞因子、蛋白A、過敏抑制物、細胞壞死糖蛋白、免疫毒素、 淋巴毒素、腫瘤壞死因子、腫瘤抑制素、轉移生長因子、α-l抗胰蛋白酶、白蛋白、α-乳白蛋 白、載脂蛋白-Ε、高度糖基化的紅細胞生成素、血管生成素、血紅蛋白、凝血酶、凝血酶受體 活化肽、血栓調節蛋白、血液因子VII、VIIa、VIII、IX和XIII、纖維蛋白溶酶原活化因子、纖 維蛋白-結合肽、尿激酶、鏈激酶、水蛭素、蛋白C、C-反應蛋白、腎素抑制物、膠原酶抑制物、 超氧化物歧化酶、瘦蛋白、血小板衍生的生長因子、上皮生長因子、表皮生長因子、制管張 素、血管緊張素、骨生長因子、骨刺激蛋白、降鈣素、心房肽激素、軟骨誘發因子、依降鈣素、 結締組織活化因子、組織因子途徑抑制物、促卵泡激素、黃體生成素、黃體生成素釋放激素、 神經生長因子、甲狀旁腺素、松弛肽、胰泌素、生長調節素、胰島素樣生長因子、腎上腺皮質 激素、膽囊收縮素、胰多肽、胃泌素釋放肽、促腎上腺皮質素釋放因子、促甲狀腺素、自分泌 運動因子、乳鐵蛋白、肌生成抑制素、細胞表面抗原、病毒衍生的疫苗抗原、單克隆抗體、多 克隆抗體和抗體片段。5. 權利要求1所述的長效藥物組合物，其中所述生理活性的多肽選自胰高血糖素樣肽_ 1 (GLP-1)、粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、人生長激素(hGH)、紅細胞生成素(EPO)、胰高血糖 素、胃泌酸調節素、胰島素、和其衍生物。6. 權利要求2所述的長效藥物組合物，其中所述非肽基連接體選自聚乙二醇、聚丙二 醇、乙二醇-丙二醇共聚物、聚氧乙烯化的多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯乙醚、生 物可降解的聚合物、脂質聚合物、甲殼質、透明質酸和其組合。7. 權利要求2所述的長效藥物組合物，其中所述非肽基連接體具有從1到lOOkDa范圍內 的分子量。8. 權利要求1所述的長效藥物組合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段由選自CHI、CH2、CH3 和CH4結構域的1到4個結構域構成。9. 權利要求1所述的長效藥物組合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段進一步包括鉸鏈區。10. 權利要求1所述的長效藥物組合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段選自IgG、IgA、IgD、 IgE、IgM、其組合和其雜化物。11. 權利要求1所述的長效藥物組合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段是IgG4 Fc片段。12. 權利要求1所述的長效藥物組合物，其中所述免疫球蛋白Fc片段是非糖基化的。13. -種生理活性的多肽單體-免疫球蛋白Fc片段綴合物，其中所述生理活性的多肽以 單體形式經由非肽基連接體連接至所述免疫球蛋白Fc片段，所述綴合物與二聚體綴合 物一一其包括經由所述非肽基連接體連接至單個免疫球蛋白Fc片段的兩分子的所述生理 活性的多肽，或綴合物一一其包括框內連接至所述免疫球蛋白Fc片段的生理活性的多肽二 聚體一一相比，顯示了降低的受體介導的內化或受體介導的清除率。14. 一種制備權利要求1所述的長效藥物組合物的方法，其包括： (a) 將生理活性的多肽連接至免疫球蛋白Fc片段以制備生理活性的多肽-免疫球蛋白 Fc片段綴合物的混合物;和 (b) 自所述混合物分離生理活性的多肽單體-免疫球蛋白Fc片段綴合物，所述生理活性 的多肽單體-免疫球蛋白Fc片段綴合物包括連接至單個免疫球蛋白Fc片段的一分子的所述 生理活性的多肽。15. 權利要求14所述的方法，其中所述生理活性的多肽和所述免疫球蛋白Fc片段經由 非肽基連接體彼此連接。16. 權利要求14所述的方法，其中與二聚體綴合物一一其包括經由所述非肽基連接體 連接至單個免疫球蛋白Fc片段的兩分子的所述生理活性的多肽一一或框內連接至所述免 疫球蛋白Fc片段的生理活性的多肽二聚體相比，所述長效藥物組合物的綴合物顯示了降低 的受體介導的內化或受體介導的清除率，所述長效藥物組合物的綴合物包括連接至單個免 疫球蛋白Fc片段的一分子的所述生理活性的多肽。
【專利摘要】本發明涉及：包含綴合物的組合物，所述綴合物具有連接至免疫球蛋白Fc片段的生物活性的多肽，其中組合物是持續的藥物組合物，其包含單體綴合物——其具有連接至一個免疫球蛋白Fc片段的一分子的生物活性的多肽，并且任選地包含多聚體綴合物——其具有連接至一個免疫球蛋白Fc片段的兩分子或更多分子的相同的生物活性的多肽，其中組合物中單體綴合物與多聚體綴合物的摩爾比為19或更大；生物活性的多肽單體-免疫球蛋白Fc片段綴合物，其中生物活性的多肽單體和免疫球蛋白Fc片段經由非肽連接體連接，其中生物活性的多肽以單體形式經由非肽連接體連接至一個免疫球蛋白Fc片段，并且與二聚體綴合物——其具有經由非肽聚合物連接至一個免疫球蛋白Fc片段的兩分子的生物活性的多肽，或生物活性多肽-免疫球蛋白Fc片段框內綴合物相比，顯示了低的受體介導的內化或受體介導的清除率；和用于制備持續的藥物組合物的方法。
【IPC分類】A61K38/26, A61K39/395, A61K47/48
【公開號】CN105517578
【申請號】CN201480048797
【發明人】樸晟喜, 金玟永, 林亨奎, 裴城敏, 鄭圣燁, 權世昌
【申請人】韓美藥品株式會社
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2014年7月14日
【公告號】CA2918023A1, EP3020418A1, US20160158378, WO2015005748A1