皮生長因子、制管張素、血管緊張素、骨 生長因子、骨刺激蛋白、降巧素、屯、房膚激素、軟骨誘發因子、依降巧素、結締組織活化因子、 組織因子途徑抑制物、促卵泡激素、黃體生成素、黃體生成素釋放激素、神經生長因子、甲狀 旁腺素、松弛膚、膜泌素、生長調節素、膜島素樣生長因子、腎上腺皮質激素、膽囊收縮素、膜 多膚、胃泌素釋放膚、促腎上腺皮質素釋放因子、促甲狀腺素、自分泌運動因子 (autotaxin)、乳鐵蛋白、肌生成抑制素、細胞表面抗原、病毒衍生的疫苗抗原、單克隆抗體、 多克隆抗體和抗體片段。
[0021 ]在又另一個實施方式中，生理活性的多膚可選自膜高血糖素樣膚-1 (GLP-1 )、粒細 胞集落刺激因子(G-CSF)、人生長激素化GH)、紅細胞生成素化P0)、膜高血糖素、胃泌酸調節 素、膜島素、和其衍生物。
[0022] 在又另一個實施方式中，非膚基連接體可選自聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇-丙二 醇共聚物、聚氧乙締化的多元醇、聚乙締醇、多糖、葡聚糖、聚乙締乙酸、生物可降解的聚合 物、脂質聚合物、甲殼質、透明質酸和其組合。
[0023] 在又另一個實施方式中，非膚基連接體可具有1到IOOk化范圍內的分子量。
[0024] 在又另一個實施方式中，免疫球蛋白化片段可由選自CH1、CH2、C冊和CH4結構域的 1到4個結構域組成。
[0025] 在又另一個實施方式中，免疫球蛋白化片段可進一步包括較鏈區。
[0026] 在又另一個實施方式中，免疫球蛋白Fc片段可選自1邑6、1邑4、1邑0、1邑6、1邑1、其組合 和其雜化物。
[0027] 在又另一個實施方式中，免疫球蛋白化片段可W是IgG4Fc片段。
[0028] 在又另一個實施方式中，免疫球蛋白化片段可W是非糖基化的形式。
[0029] 在另一方面，本發明提供了生理活性的多膚單體-免疫球蛋白Fc片段綴合物，其包 括經由非膚基連接體連接至免疫球蛋白Fc片段的生理活性的多膚單體，其中生理活性的多 膚W單體形式經由非膚基連接體連接至免疫球蛋白化片段，該綴合物與二聚體綴合物一-其包括經由非膚基連接體連接至單個免疫球蛋白化片段的兩分子的生理活性的多膚，或綴 合物一一其包括框內連接至免疫球蛋白Fc片段的生理活性的多膚二聚體一一相比，顯示了 降低的受體介導的內化或受體介導的清除率。
[0030] 在又另一方面，本發明提供了制備長效藥物組合物的方法，該方法包括：（a)將生 理活性的多膚連接至免疫球蛋白Fc片段W制備生理活性的多膚-免疫球蛋白Fc片段綴合物 的混合物;和(b)自該混合物分離生理活性的多膚單體-免疫球蛋白化片段綴合物，該生理 活性的多膚單體-免疫球蛋白化片段綴合物包括連接至單個免疫球蛋白化片段的一分子的 生理活性的多膚。
[0031] 在一個實施方式中，該方法中的綴合物中包含的生理活性的多膚和免疫球蛋白化 片段可W經由非膚基連接體彼此連接。
[0032] 在又另一個實施方式中，與二聚體綴合物一一其包括經由非膚基連接體連接至單 個免疫球蛋白化片段的兩分子的生理活性的多膚，或綴合物一一其包括框內連接至免疫球 蛋白化片段的生理活性的多膚二聚體一一相比，該方法中的綴合物一一其包括連接至單個 免疫球蛋白Fc片段的一分子的生理活性的多膚一一可顯示降低的受體介導的內化或受體 介導的清除率。
【具體實施方式】
[0033] 在一方面，本發明提供了包含綴合物的長效藥物組合物，所述綴合物包括連接至 免疫球蛋白化片段的生理活性的多膚，其中組合物包含單體綴合物一一其包括連接至單個 免疫球蛋白化片段的一分子的生理活性的多膚，并且任選地包含多聚體綴合物一一其包括 連接至單個免疫球蛋白Fe片段的兩分子或更多分子的相同的生理活性的多膚，條件是組合 物中單體綴合物與多聚體綴合物的摩爾比為至少19。
[0034] 在本發明的實施方式中，已經發現，與包括連接至免疫球蛋白Fe片段的生理活性 的多膚多聚體，特別是生理活性的多膚二聚體的綴合物相比，包括連接至免疫球蛋白化片 段的生理活性的多膚單體的綴合物顯示了降低的受體介導的內化和受體介導的清除率，并 且因此可具有增加的血清半衰期。因此，已經發現，包括綴合物的藥物一一所述綴合物包括 連接至免疫球蛋白Fe片段的生理活性的多膚單體W顯示降低的受體介導的清除率一一可 被用作長效藥物，運是因為它顯示了降低的受體介導的內化和受體介導的清除率。換句話 說，本發明基于W下發現:與多聚體綴合物，特別是二聚體綴合物相比，生理活性的多膚單 體-免疫球蛋白Fe片段綴合物顯示了降低的受體介導的內化和受體介導的清除率。
[0035] 如本文所使用，術語"長效藥物組合物"指的是包含生理活性的多膚單體-免疫球 蛋白Fe片段綴合物的藥物組合物，與生理活性的多膚本身或生理活性的多膚多聚體-免疫 球蛋白化片段相比，所述生理活性的多膚單體-免疫球蛋白化片段綴合物顯示了降低的受 體介導的內化和受體介導的清除率。換句話說，該術語指的是包含單體綴合物的藥物組合 物，所述單體綴合物包括連接至單個免疫球蛋白Fe片段的一分子的生理活性的多膚。此外， 術語"藥物組合物"可W與術語"制劑"可交換地使用。
[0036] 在本發明的藥物組合物中，單體綴合物一一其包括連接至單個免疫球蛋白化片段 的一分子的生理活性的多膚一一相對于多聚體綴合物一一其包括連接至免疫球蛋白化片 段的兩分子或更多分子的相同生理活性的多膚一一可W W至少19:1，優選地至少99:1，更 優選地至少500:1的摩爾比存在。換句話說，長效藥物組合物的特征在于單體綴合物與多聚 體綴合物的摩爾比（[單體綴合物]/[多聚體綴合物])為至少19。
[0037] 根據本發明的實施方式，生理活性的多膚-非膚基聚合物-免疫球蛋白化片段綴合 物中的生理活性的多膚W單體形式存在，并且在運種情況下，與在其中生理活性的多膚W 二聚體形式存在的情況下相比，該綴合物具有更長的體內作用持續時間。因此，在如此組合 物的情況下:在該組合物中，僅單體綴合物作為綴合物存在而不存在多聚體綴合物，或者在 該組合物中單體綴合物與多聚體綴合物特別是二聚體綴合物的摩爾比為至少19，該組合物 與其它組合物相比具有優異的增加生理活性的多膚的血清半衰期的效果。
[0038] 具體而言，因為與多聚體綴合物一一其包括連接至免疫球蛋白化片段的兩分子或 更多分子的生理活性的多膚一一相比，根據本發明的單體綴合物由生理活性的多膚的受體 介導的內化降低，因此具有長的體內作用持續時間。特別地，已知，腎臟消除一一其是決定 分子半衰期的另一機制一一取決于分子的分子量。因此，如果腎臟消除是決定半衰期的重 要變量，則隨著具有更高分子量的多聚體綴合物的比率增加，半衰期將增加。然而，在本發 明中，已經發現，單體綴合物顯示了更長的體內作用持續時間。就此而言，可見受體介導的 內化在增加根據本發明的綴合物的體內半衰期中是重要的因素。運樣的結果可歸因于單體 綴合物的有益效果(例如，減小的位阻），該有益效果不能在多聚體綴合物中發現。
[0039] 因此，與包括生理活性的多膚多聚體-免疫球蛋白化片段綴合物或包括框內連接 至免疫球蛋白化的生理活性的多膚二聚體的綴合物的藥物組合物相比，本發明的長效藥物 組合物可顯示更長的體內作用持續時間。具體而言，在本發明的藥物組合物中，單體綴合 物一一其包括連接至單個免疫球蛋白化片段的一分子的生理活性的多膚一一相對于多聚 體綴合物一-其包括連接至免疫球蛋白化片段的兩分子或更多分子的相同的生理活性的 多膚一-可W W至少19:1，優選地至少99:1更優選地至少500:1的摩爾比存在，并且在運種 情況下，包括單體綴合物和多聚體綴合物的組合物因為組合物的體內半衰期沒有降低，因 此提供了優異的持久的制劑。
[0040] 如本文所使用，術語"生理活性的多膚-免疫球蛋白化片段綴合物"指的是包括綴 合至免疫球蛋白化片段的生理活性的多膚的綴合物。優選地，綴合物可包括插入生理活性 的多膚和免疫球蛋白化片段之間W將生理活性的多膚連接至免疫球蛋白化片段的非膚基 連接體。
[0041] 如本文所使用，術語"生理活性的多膚單體-免疫球蛋白Fc片段綴合物"指的是包 括綴合至免疫球蛋白化片段的生理活性的多膚單體的綴合物。綴合物包括如此形式:其中 單個生理活性的多膚連接至單個免疫球蛋白化片段。在此，單個免疫球蛋白化片段優選地 為如此形式:其中兩條化鏈通過例如二硫鍵一一但不限于此一一彼此連接。該生理活性的 多膚單體-免疫球蛋白化片段綴合物的結構在圖1中圖解，但不限于此。在本說明書中，術語 "生理活性的多膚單體-免疫球蛋白Fc片段綴合物"與術語"單體綴合物"可交換地使用。
[0042] 生理活性的多膚單體-免疫球蛋白Fc片段綴合物的特征在于：與多聚體綴合 物一一其包括連接至單個免疫球蛋白化片段的兩分子或更多分子的生理活性的多膚，或綴 合物一一其包括框內連接至免疫球蛋白Fc片段的生理活性的多膚多聚體一一相比，生理活 性的多膚單體-免疫球蛋白化片段綴合物顯示了降低的受體介導的內化或受體介導的清除 率。因此，包括單獨的生理活性的多膚單體-免疫球蛋白化片段綴合物或包括高比率的綴合 物的藥物顯示了長的體內作用持續時間和優異的治療效果。
[0043] 同時，多聚體綴合物一一其包括連接至免疫球蛋白化片段的兩分子或更多分子的 生理活性的多膚一一包括如此形式:其中兩分子或更多分子的生理活性的多膚連接至單個 免疫球蛋白Fc片段(例如，由通過二硫鍵等彼此連接的兩個Fc鏈組成）。
[0044] 具體而言，生理活性的多膚二聚體-免疫球蛋白化片段綴