含有肉毒桿菌神經毒素的藥物組合物及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及藥物，即，涉及在臨床實踐（優選地，在心臟內科中用于治療心律失 常）中應用的含有肉毒桿菌神經毒素的藥物組合物的制備。
【背景技術】
[0002] 目前，最常用的肉毒桿菌神經毒素為A型肉毒桿菌神經毒素（A型肉毒桿菌毒素）。 這種神經毒素是在肉毒梭菌（Clostridiumbotulinum)菌株存在下的發酵過程中產生的。
[0003] 在臨床實踐中，基于A型肉毒桿菌毒素的少量藥物例如保妥適（Botox)、 麗舒妥（Dysport)、Kseomin(Xeomin)或Lantoks(Lantox)已被應用。這些藥物在 許多國家有注冊治療應用，以及還有一些目前正在被開發并且還沒有注冊的治療應 用(ShengChen, 2012,Toxins,ClinicalUsesofBotulinumNeurotoxins:Current Indications,LimitationsandFutureDevelopments, 4, 913-939)。由美國食品藥品監督 管理局（FDA)提供的備有證明文件的應用包括：在眼科中：斜視的治療；在神經科中：眼瞼 痙攣、面肌痙攣、痙攣性斜頸（頸肌張力障礙）、慢性偏頭痛（頭痛）、逼尿肌過度活動、成人 和2歲以上兒童的局部肌肉痙攣（包括腦癱和痙攣）、腋窩多汗、多涎的治療；在美容醫學 科中：面部皺紋的消除；在泌尿科中：下尿路疾病的治療；在腸胃科中：胃腸道疾病的治療； 在耳鼻咽喉科中：痙攣性發音困難的治療。
[0004]目前，基于A型肉毒桿菌毒素的藥物的以下應用正在被研究：在牙科中：顳下頌關 節功能紊亂的治療；在神經科中：慢性肌肉骨骼疼痛和糖尿病神經病變的治療；在婦產科 中：陰道痙攣的治療；在創傷和一般的外科手術中：傷口愈合的改善；在心臟內科中：心律 失常的治療。
[0005] 心律失常是一組廣泛而復雜的心臟疾病。該疾病唯一有效的、合理的手術治療 是射頻消融治療（使用高頻電流灼燒心臟的心律失常性區域）。然而，這種方法并不是 足夠有效的（低于60% )，而且具有很高的例如心包積血、經食道痿管（transesophageal fistula)、消融后遺癥（post-ablation)、心房撲動、膈神經麻痹性癡呆和附壁血栓等并 發癥的風險，該風險高于 30%(Cammetal.，2010,Guidelinesforthemanagementof atrialfibrillationEuropeanHeartJournal, 31，2369 - 2429)〇
[0006] 最近的公開出版物致力于使用肉毒桿菌神經毒素進行心律失常的治療，但是針 對心房纖維性顫動的抑制效果的持續時間不會超過一周（〇hetal.，2011，Botulinum ToxinInjectioninEpicardialAutonomicGangliaTemporarilySuppressesVagally Mediated.AtrialFibrillation.CircArrhythm.Electrophysiol.，4, 560-565) 〇 這種效 果的持續時間在臨床實踐中是不可接受的。
[0007]目前，基于肉毒桿菌毒素的藥物的制造商均在參與穩定性藥劑的應用的開發以加 強毒素的貨架期和其傳遞至靶向器官的有效性，該穩定性藥劑為例如各種蛋白質、氨基酸、 多糖和其它成分。
[0008] 含有選自A、B、C、D、E、F或G和S不同血清型的肉毒桿菌的肉毒桿菌神經毒素以及 選自聚賴氨酸、聚精氨酸、聚組氨酸或聚鳥氨酸所組成的組中的聚胺酸（polyamineacid) 的藥物組合物已經被開發（專利申請RU2011125775A;W02010/07842)。
[0009] 含有6pg至30ng的量的，具有大約50-250單位的LDm (致死劑量，50% )的生物 活性的A型肉毒桿菌毒素以及其它成分的其它藥物組合物已經被開發（專利RU2453333C2， W02008/000490)，所述其它成分例如pH緩沖液、賦形劑、稀釋劑、冷凍保護劑和/或穩定劑， 選自透明質酸、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇。
[0010] 然而，這些已知的組合物并不具有持續作用，也不增加肉毒桿菌毒素的治療效果， 并且不旨在用于治療心律失常。那些制劑在心臟的組織中不具有足夠的接觸（exposure) 以實現最佳效果，并且活性物質可能會快速消除而全身循環。
[0011] 含有：(a)濃度為每ImL溶液50-10000單位LD5。的肉毒桿菌神經毒素復合物（A、B、 C、D、E、F或G型）或高純度肉毒桿菌神經毒素（A、B、C、D、E、F或G型），（b)含有0. 005-0. 02 體積％的量的表面活性劑（SAS)，優選聚山梨醇酯80的穩定性試劑，（c)濃度為0. 15-0. 3M 的作為結晶劑（crystallineagent)的氯化鈉，（d)濃度為10_20mM的二糖，優選為鹿糖， (d)維持pH值為5. 5-7. 5的緩沖液，主要為組氨酸，以及水的液體藥物組合物也已經被開發 (專利RU2407541C2,W02006/005910)。然而，這些已知的組合物不旨在用于治療心律失常 疾病，而且據說誘導對肉毒桿菌毒素的穩定性效果，沒有任何關于持續作用或者降低治療 劑量和副作用的任何明示或建議或者。
[0012] 因此，對于治療心律失常，特別是心房纖維性顫動的能夠導致持續效果以及能夠 限制潛在副作用的新策略具有重要的需求。
【發明內容】
[0013] 本發明涉及對治療心律失常有效的肉毒桿菌神經毒素的藥物組合物，特別是具有 高治療效果、延長的持續效果和減少的副作用。
[0014] 發明人意外地發現，本發明的組合物實現了提高A型肉毒桿菌毒素的藥理學活 性，已經通過單一劑量實現了期望的治療效果，延長了肉毒桿菌毒素的效果，同時降低了肉 毒桿菌毒素的副作用。進一步地，當維持在溶液中以待使用時，本發明的組合物允許制備成 具有用于直接進入臨床的個性化藥物所需的性質并且呈現出延長活性的組合物。
[0015] 本發明的第一方面提供了一種含有肉毒桿菌毒素，特別是A型肉毒桿菌毒素和選 自由殼聚糖和那曲肝素所組成的組中的黏多糖，以及藥學上可接受的賦形劑的組合物，所 述殼聚糖和那曲肝素采用1 : (IO3-IO9)，優選1 : (IO6-IOs)的重量比，該組合物具有以下成 分：
[0016] 肉毒桿菌毒素l-200U/mL
[0017] 黏多糖 0?l_5〇mg/mL
[0018] 鹽水 0?l-50mL。
[0019] 本發明的第二方面涉及根據本發明的藥物制劑用作藥劑。
[0020] 本發明的第三方面涉及根據本發明的組合物在制備用于預防和/或治療心律失 常特別是心房纖維性顫動和動脈性高血壓的藥物制劑中的應用。
[0021] 本發明的第四方面涉及在需要所述組合物的受試者中預防和/或治療心律失常 特別是心房纖維性顫動或動脈性高血壓的方法，該方法包括在所述受試者中給藥根據本發 明的藥物制劑。
[0022] 本發明的第五方面涉及藥用試劑盒，該藥用試劑盒包括隔室形式的第一室或一系 列室以及第二室或一系列室，其中，第一室或一系列室包括根據權利要求1-13中任意一項 所述的組合物，第二室或一系列室包括具有使用說明書的注射用注射器。
[0023] 本發明的第六方面涉及根據本發明的組合物的制備的藥用試劑盒，該藥用試劑盒 包括隔室形式的第一室或一系列室以及第二室或一系列室，其中，第一室或一系列室包括 肉毒桿菌毒素溶液，第二室或一系列室包括具有使用說明書的殼聚糖粉末和任選的用于制 劑制備的小瓶。
【附圖說明】
[0024]圖1示出了如實施例9中所描述的由大鼠股骨肌肉的電刺激閾值（以伏特為量 度）的變化表示的本發明的藥物組合物相比于商業的制劑（Xeomin)以及相比于含有肉毒 桿菌毒素和另一種黏多糖的對比制劑的效果。A:制劑N2 2 (_殼聚糖）；B:制劑N2 6 (_那曲 肝素）；C:對比制劑N2 11 (-透明質酸鈉）；D:對比制劑N2 4(_肝素）；(-----)Xeomin0
[0025]圖2示出了如實施例11中所描述的由大鼠股骨肌肉的電刺激閾值（以伏特為量 度）的變化表示的本發明的藥物組合物相比于根據專利RU2407541描述的含有二糖和A型 肉毒桿菌毒素的組合物的效果和其持續時間。
[0026]圖3示出了如實施例13中所描述的由大鼠股骨肌肉的電刺激閾值（以伏特為 量度）的變化表示的在不同殼聚糖濃度下的本發明的兩個藥物組合物與商業的組合物 (Xeomin)的對比效果。（---Xeomin)，（--制劑Ns1)，（???.制劑Ns2) 〇
[0027] 圖4示出了如實施例12中所描述的對比注射[Visipaque?(碘克沙醇）]至包括 前右（A)、右下（B)和左上GP(C)的心外膜脂肪墊的圖。導管輸出針進入心包腔空間（D)。
[0028]圖5示出了如實施例11所描述的由大鼠股骨肌肉的電刺激閾值（以伏特為量度） 的變化檢測的誘導AF的刺激閾值。（? ? ? ?基線），（Xeomin)，（-制劑Na2)
[0029]圖6示出了將本發明的組合物給藥至四個主要的心外膜脂肪墊的可視區域的例 子。A:第一心外膜左心房脂肪墊位于右上肺靜脈（PV)的前方，并且與右前神經節叢（GP)相 對應；B:第二心外膜脂肪墊位于右下肺靜脈的下后方，并且與右下GP相對應；C:第三脂肪 墊位于左上PV和左下PV的前方（在PVs與左心耳（LAA)之間），并且與馬歇爾束（Marshall tract)GP和左上GP相對應；以及D:第四脂肪墊位于左下PV的下方并向后延伸，并且與左 下GP相對應。針尖在直接視覺控制下手工置于脂肪墊的心外膜表面的幾處位置，以確保最 佳注射。
【具體實施方式】
[0030] 術語"肉毒桿菌毒素"指的是選自A、B、E、F和G型肉毒桿菌毒素的任意類型。肉 毒桿菌毒素（BTX)通過阻斷來自神經肌肉接頭的突觸前末梢的乙酰膽堿的釋放而起作用。 已經描述了由肉毒梭菌（Clostridiumbotulinum)的不同菌株產生的七種不同的抗原性 肉毒桿菌毒素（BTX-A、B、C、D、E、