II中，供料管線A中的茚達特羅濃度是18%w/w且噴霧混合散裝粉末中的濃 度僅為4. 1%w/w，因為來自供料管線B和C的剩余噴霧干燥顆粒不含API。如果假定馬來 酸茚達特羅的水溶性為0. 2mg/ml，則用于組II的噴霧混合工藝使原料中溶解的茚達特羅 從約8. 0%下降到L6% (等式1)。
[0244] 批次III的配制如同組II，除了向供料管線A加入5%w/w海藻糖。海藻糖是賦 形劑，用于穩定所述工藝中可能形成的無定形頂。
[0245] 批次IV的配制如同組II，除了向供料管線A加入20mM馬來酸鈉（pH5. 5)。加入 馬來酸鈉以使水中茚達特羅溶解度降至約〇.Olmg/ml(共同離子效應）。此情況中，噴霧混 合使原料中溶解的茚達特羅從約8.O%減少到0. 1%。假定噴霧干燥粉末中的所有％溶解 轉化成無定形固體，在有噴霧混合和共同離子效應的噴霧干燥過程中引入的無定形藥物部 分可能與在有相關脫非晶化步驟的標準微粒化過程中引入的量相當或更少。
[0246] 批次V包含頂和MF的固定劑量組合。MF在供料管線B和C中配制。
[0247] 表3:含馬來酸茚達特羅（頂）或馬來酸茚達特羅與糠酸莫米松（MF)固定劑量組 合的干粉制劑
[0248]
[0249] 所有藥物含量在游離堿基礎上表示；固體含量=30mg/mL;10/lw/wPFOB/賦形劑 比例
[0250] 1供料管線A包括5 %w/w海藻糖
[0251] 2供料管線A包括20mM馬來酸鈉（pH5. 5)
[0252] 表4詳述噴霧混合制劑的組成。應注意所述制劑主要由2:1摩爾比的DSPC:氯化 鈣構成（>90%w/w)。磷脂用作疏水賦形劑，控制表面組成和顆粒形態。其還用作制劑中的 膨脹劑。
[0253] 表4:含馬來酸茚達特羅和馬來酸茚達特羅與糠酸莫米松固定劑量組合的干粉制 劑組成
[0256]2含量表示為％w/w游離堿
[0257]2含量表示為％w/w游離堿
[0258] 實施例2-從基于乳液的原料制備馬來酸茚達特羅和馬來酸茚達特羅+糠酸莫米 松的噴霧混合干粉制劑
[0259] 此實施例中，對實施例1所用原料的制備提供更多細節。制備含馬來酸茚達特羅 的本發明干粉制劑并從根據美國專利說明書US6565885所述方法生成的基于乳液的原料 制備含馬來酸茚達特羅和糠酸莫米松的本發明干粉制劑。此工藝中，晶體微粒化馬來酸茚 達特羅分散于連續相的水包油乳液。所述工藝產生包被有疏水賦形劑多孔層的晶體茚達特 羅顆粒。顆粒形態通過掃描電子顯微鏡確認（數據未顯示）。
[0260] 因此，二硬脂酰磷脂酰膽堿（DSPC)和氯化鈣分別在熱水中分散和溶解，用ULTRA TURRAX?T-25?高剪切混合器以形成多層脂質體。油相是全氟溴辛烷PF0B(法國巴黎的阿 托菲納（Atofina))。向DSPC分散液逐滴加入PF0B，同時混合產生粗（微米級）水包油乳 液。所述乳滴通過DSPC單層穩定。然后，粗乳液用AVESTIN(:-50K均質機高壓勻化，對于 3次單獨通過，壓力設置為10、10和20kpsig。這生成細（亞微米）乳滴。乳滴的中數直徑 范圍通常為0.IPm-1. 0,更常為0. 3um-0. 6um。
[0261] 馬來酸茚達特羅annex懸液還用高剪切混合器制備。DSPC作為濕潤劑納入分散 液以促進茚達特羅懸于水。DSPC分散液如下制備：通過向熱水（~70°C)加入DSPC，然后 使用高剪切混合器。DSPC分散液隨后冷凍至2-8°C，接著加入頂。對于批次IV，馬來酸鈉 緩沖溶液如下制備：加入預定量的馬來酸和NaOH以獲得pH5. 5溶液，所述溶液隨后冷凍至 2_8°C。將用于批次III和IV的額外賦形劑加入DSPC分散液，然后加入茚達特羅。茚達特 羅隨后用高剪切混合器加入冷凍DSPC-annex懸液。所有annexAPI懸液在冷加工條件下 制備以維持藥物于2-8°C(從而進一步使頂溶解最小）。
[0262] 對于批次V，糠酸莫米松（MF)annex懸液用高剪切混合器（ULTRATURRAX?T-25?) 制備以在水中分散微粒化MF。通過向維持于2-8°C的細乳液加入各annex來制備原料。所 得原料在開放式不銹鋼容器中維持于2-8°C并用橋式LIGHTN丨NK'實驗室混合器混合。通 過稀釋細乳液到5%w/v或50mg/ml目標固體濃度來制備用于供料管線B和C的載劑原料。
[0263] 用于此操作的霧化配置允許3個獨立原料流供給到噴霧干燥機。所述3個原料流 如下分開：
[0264] ? 1個原料流（供料管線A)用于噴霧干燥含茚達特羅的原料。
[0265] *2個原料流（供料管線B&C)共有同一原料（Y型管件用于平分流），其是載劑（批 次I、II、III和IV)或含莫米松的原料（批次V)。
[0266] 為維持原料比例為固定值，使用由單軸驅動的多頭蠕動泵。采用單流量計以監控 供料管線B+C的總流速。由于僅單流量計可用，通過重量來測定固定時間段中遞送的原料 A質量以確定供料管線A的流速。根據設備能力評價（霧化器和多頭原料泵）選擇噴霧干 燥條件和目標供料管線比例。表3所示組合物的體積加料速度的目標比例是約3:1 (供料 管線B+C):(供料管線A)。表5顯示目標噴霧干燥條件。
[0267] 表5 :用NIROPSD-I型噴霧干燥機制備馬來酸茚達特羅干粉制劑的噴霧干燥條件
[0268]
[0269] 實施例3_測量馬來酸茚達特羅和馬來酸茚達特羅+糠酸莫米松的噴霧混合干粉 制劑的物理性質
[0270] 此實施例中，測量實施例1中噴霧混合干粉制劑的特定理化性質，即基本粒徑、振 實密度和含水量。
[0271] 圖7A-7E是本發明實施方式的噴霧混合粉末的顯微照片，所述粉末包括茚達特 羅。所述粉末根據表3和圖7A-7E配制，對應批次I到批次V順序。所述粉末顯示基于乳 液的噴霧干燥工藝的中空、孔狀結構特征。沒有證據顯示圖7A-7E的噴霧混合制劑中有不 同類型的顆粒。
[0272] 表6顯示就這些制劑測量的物理性質。
[0273] 表6:馬來酸茚達特羅和馬來酸茚達特羅+糠酸莫米松的噴霧混合干粉制劑的物 理性質
[0274]
[0275] 噴霧干燥粉末的基本粒徑分布通過激光衍射（德國克勞斯塔爾-采勒費爾德的 SympatecGmbH)測定。SYMPATECHEL0S?粒徑分析儀裝有ASPIROS?微劑量加料器和RODOS? 干粉分散單元。將約IOmg的樣品質量引入ASPIR0S。采用約1 %的觸發光濃度（Ccipt)和 4bar的驅動壓。在10秒的測量持續時間中收集數據。粒徑分布通過儀器軟件用弗勞恩霍 夫模型（Fraunhofermodel)計算。樣品測量前，通過測量SympatecGmbH所提供碳化娃參 考標準的基本粒徑分布，評價系統的適宜性。數據用中數直徑UJ和GSD(xS4.13/x5。）表示。 GSD或幾何標準偏差是對數正態粒徑分布多分散性的量度。
[0276] 通過用微量刮勺測量填充體積已知的筒形腔（單軸模壓（UC單元））所需的粉末 質量，測定振實密度。在工作臺面上輕拍樣品架。隨著樣品體積減少，向所述單元加入更多 粉末。重復輕拍和加入粉末步驟，直到腔填充且粉末層在進一步輕拍下不再繼續鞏固。報 道的結果代表5個重復樣本的均值。
[0277] 粉末中的水或水分含量指在％w/w基礎上物質所含的水量。實施例1中各噴霧混 合粉末制劑的含水量由卡爾費休滴定法（KarlFischertitrimetry)測定。
[0278] 結果顯示粉末間的基本粒徑分布顯著一致，盡管粉末組成大相徑庭。這證明基本 粒徑分布主要由噴霧干燥條件控制，而不是組合物的差異。
[0279] 來自批次II和IV的噴霧混合粉末的物理性質顯著一致，盡管批次II的干粉是單 馬來酸茚達特羅制劑且批次IV的干粉是馬來酸茚達特羅與糠酸莫米松的固定劑量組合制 劑。批次III所見的振實密度小差異可能是向制劑加入海藻糖的結果。海藻糖與脂質相互 作用，從而略微改變表面性質并產生更高密度的顆粒。單方制劑和含磷脂與所加入海藻糖 的固定劑量組合也預期顯示等同物理性質，振實密度相當。這在非噴霧混合制劑中也得到 證實。
[0280] 結果顯示就實施例1的噴霧混合干粉制劑實現以下目標：獲得物理性質獨立于顆 粒中活性劑和賦形劑組成的噴霧干燥顆粒。
[0281] 實施例4-含馬來酸茚達特羅的噴霧混合干粉的含量均勻度
[0282] 此實施例中，測量實施例1批次II中制備的噴霧混合干粉的含量均勻度。批次II 包含晶體馬來酸茚達特羅作為唯一的活性成分。
[0283] 含來自批次II的噴霧混合茚達特羅的散裝粉末以I. 5mg填充質量填入單元劑量 箔-箔泡罩，用美國專利說明書US2004/0060265所述基于鼓的濾器。所填充泡罩的含量 均勻度通過藥物特異反相高效液相色譜（RP-HPLC)法評價。藥物內容和降解產物用Waters Alliance2695/2795HPLC系統測定，所述系統帶有Waters2487雙波長檢測器、WaterPDA 996檢測器和WatersEmpowerBuild1154軟件。對于含量和相關物質分析，使用YMCPack ODSAQ柱；對于對映體，使用DaicelChiralOJ-RH柱。分析各樣品的2個重復物。含量 結果示于下表7 :
[0284] 表7 :含馬來酸茚達特羅的填充泡罩的含量均勻度
[0285]
[0286] 每I. 5mg泡罩一個重復
[0287] 茚達特羅宣稱（名義）裝入量=4. 08%w/w
[0288] 10個重復樣本的茚達特羅含量測量相對標準偏差（RSD)僅為1. 5%。所得填充泡 罩的含量均勻度證實本發明噴霧混合工藝在單步干燥/混合過程中獲得茚達特羅顆粒與 載劑顆粒的均勻混合物的效力。數據還顯示在噴霧混合物中命中靶茚達特羅載藥量的能 力。
[0289] 實施例5-含馬來酸茚達特羅和糠酸莫米松的噴霧混合干粉的含量均勻度
[0290] 此實施例中，測量實施例1批次V中制備的噴霧混合干粉的含量均勻度。其在單 獨噴霧混合顆粒中包含馬來酸茚達特羅和糠酸莫米松作為活性成分。
[0291] 來自批次V的噴霧混合干粉以I. 5mg填充質量填入箔-箔泡罩，所述干粉包括含 馬來酸茚達特羅和糠酸莫米松的顆粒。所填充泡罩的含量均勻度通過反相高效液相色譜 (RP-HPLC)評價，如實施例4所述。結果示于下表8.
[0292] 表8 :含馬來酸茚達特羅的填充泡罩的含量均勻度
[0293]
[0294] 每I.5mg泡罩一個重復
[0295] 諱達特羅宣稱（名義）裝入量=4. 16%w/w
[0296] 莫米松宣稱（名義）裝入量=4. 61%w/w
[0297] 就2種活性成分而言所測含量值的一致性優良，如各情況中用于茚達特羅和莫米 松的10個重復樣本的RSD值分別為1. 44%和1. 61 %所示。這證實本發明噴霧混合工藝在 單步干燥/混合過程中獲得均勻混合物的效力。
[0298] 實施例6-就馬來酸茚達特羅的噴霧混合干粉而言通過RP-HPLC比較發射粉末質 量和噴射量
[0299] 此實施例中，測量實施例1批次II中制備的噴霧混合干粉的霧化性能。更特定檢 測和比較通過專門單元劑量、被動、基于泡罩的干粉吸入器所遞送粉末的發射粉末質量和 噴射量。所述粉末包含馬來酸茚達特羅作為唯一的活性成分。
[0300] 所述干粉吸入器是國際專利申請WO08/51621所述吸入器。泡罩的填充質量是 I. 5mg。霧化性能在4kPa壓降下評價,對應于35L/min流速。
[0301] 測量粉末的發射粉末質量（EPM)和噴射量（ED)且結果示于下表9。
[0302] 表9 :含馬來酸茚達特羅作為活性成分的批次II噴霧混合干粉的發射粉末質量和 噴射量
[0305] 重量法EPM測定提供粉末（含茚達特羅的噴霧干燥顆粒和噴霧干燥載劑顆粒）的 總質量量度，所述粉末從裝置中發射并在過濾器上捕獲。數據表示為名義填充質量的百分 比。
[0306] ED通過實施例4所述藥物特異HPLC法測定。ED提供離開吸入器的茚達特羅質量 的檢測，表示為泡罩中茚達特羅宣稱（名義）裝入量的百分比。
[0307] 結果顯示EPM和ED測量在本質上相同。這表明含藥物的顆粒與賦形劑/載劑顆 粒在噴霧混合過程中混合良好。此外，結果證明鼓充填過程中2種顆粒無分離。
[0308] 實施例7-就馬來酸茚達特羅和糠酸莫米松的噴霧混合干粉制劑而言通過 RP-HPLC比較發射粉末質量和噴射量
[0309] 此實施例中，測量實施例1批次V中制備的噴霧混合干粉的霧化性能。更特定檢 測和比較通過專門單元劑量、被動、基于泡罩的干粉吸入器所遞送粉末的發射粉末質量和 噴射量。所述粉末包含馬來酸茚達特羅和糠酸莫米松作為活性成分。
[0310] 所述干粉吸入器是國際專利申請WO08/51621所述吸入器。泡罩的填充質量是 I. 5mg。霧化性能在4kPa壓降下評價,對應于35L/min流速。
[0311] 測量粉末的發射粉末質量（EPM)和噴射量（ED)且結果示于下表10。
[0312] 表10:含馬來酸茚達特羅和糠酸莫米松作為活性成分的批次V噴霧混合干粉的發 射粉末質量和噴射量
[0315] 結果顯示重量分析EPM和藥物特異ED測定密切對應。這表明含量豐富的茚達特 羅顆粒與含莫米松的顆粒在噴霧混合過程中混合良好。此外，結果證明鼓充填過程中2種 顆粒無分離。
[0316] 實施例8-馬來酸茚達特羅和糠酸莫米松的噴霧混合干粉制劑的空氣動力學粒徑 分布
[0317] 此實施例中，噴霧混合干粉的霧化性能通過測量其空氣動力學粒徑分布（APSD) 測定，所述粉末在實施例1批次V中制備并經專有的單元劑量、被動、基于泡罩的干粉吸入 器遞送。
[0318] 所述干粉吸入器是國際專利申請WO08/51621所述吸入器。2種藥物的實驗測定 名義劑量是70±lmcg。泡罩的填充質量是I. 5mg。流速是35L/min，對應4kPa壓降。
[0319] APSD用NEXTGENERATION頂PACT0R?測量。對于粉末，評價茚達特羅和和莫米松 的逐級粉末質量。統計（均值，標準偏差）是基于5次重復測量。
[0320] APSD測量結果示于下表11。
[0321] 表11 :含馬來酸茚達特羅和糠酸莫米松作為活性成分的噴霧混合干粉的空氣動 力學粒徑分布
[0323] 空氣動力學粒徑分布分成不同階段組。"LPD。2"指階段0-2出現的大顆粒部分（質 量基礎）。"FPD3F"指階段3到濾器的細粒劑量，"VFPD4F"代表階段4到濾器的極細粒劑 量。NGI不同階段的茚達特羅和莫米松質量通過藥物特異HPLC法測定。
[0324] 結果顯示茚達特羅和莫米松的APSD在逐級基礎上對應非常密切。2種活性成分在 LPD、FH)和VFPD上的小差異表明粉末具有極佳混合物均勻性。此外，噴霧混合粉末在APSD 上的優良一致性表明2種粉末間的顆粒性質差異可忽略。這當然是經設計的，所述顆粒經 設計成具有核殼結構，其中表面組成和形態由疏水賦形劑（DSPC)控制，顆粒核心存在不同 API。
[0325] 2種活性成分在階段3到過濾器的總沉積代表66% -68%的所測名義劑量。基于 先前健康志愿者中的Y-閃爍掃描研究，預期體內肺遞送為~50-60%的名義劑量，患者間 變化僅為10-20%。
[0326] 實施例9-含馬來酸茚達特羅的噴霧混合干粉的化學穩定性
[0327] 此實施例中，實施例1中制備的所有噴霧混合干粉和含馬來酸茚達特羅的6種其 它噴霧混合干粉的化學穩定性用RP-HPLC測定，如實施例4所述。
[0328] 散裝粉末在加速條件（T= 60°C)下評價7天。結果示于下表12。其顯示降解產 物增加，即對映體含量和總降解產物。
[0329] 表12 :含馬來酸茚達特羅的噴霧混合制劑的化學穩定性（T= 60°C，7天）
[0330]
[0331] *噴霧混合粉末；批次VI-XI根據實施例2所述工藝制備，盡管粉末從單一原料中 噴霧干燥。
[0332] 化學穩定性根據轉化成茚達特羅S對映異構體和總雜質中的百分比定量，經HPLC 觀察。
[0333] 根據等式1所述原料組合物，計算預估％溶解。茚達特羅在水中的溶解度是 0. 2mg/ml，在20mM馬來酸鹽緩沖劑中是0. 01mg/ml。馬來酸鹽緩沖劑中的溶解度降低是平 衡移向馬來酸茚達特羅沉淀的結果，這由于加入共同離子而出現。通過比較批次I和VI， 噴霧混合對溶解部分的影響明顯。噴霧混合批次I中，總載藥量是1. 4%，而溶解部分僅為 4.9%。相反，對于單原料批次VI，藥物含量實際更高（2%)，而溶解部分接近15%。溶解 部分越高，產生的對映體水平顯著更高（7. 7%相比1. 8% )，且總雜質水平更高（4. 7%相比 2. 7% )。采用共同離子效應和噴霧混合的批次V顯示溶解部分最低且所測批次的化學穩定 性最佳。
[0334] 表12所列結果顯示噴霧干燥原料中茚達特羅的溶解部分與保存時所得茚達特羅 化學穩定性量度之間的關聯性。結果在圖4中以圖表畫出。
[0335] 圖4顯示批次I-XI的％溶解茚達特羅，其針對對映體和對映體加總雜質作圖。注 意到隨著茚達特羅的溶解含量減少，化學穩定性顯著改善。加入共同離子（馬來酸鹽）使 平衡移向鹽，顯著降低其溶解度（共同離子效應）。這也是減少茚達特羅溶解部分的方式。 溶解部分較低時，加入玻璃形成劑（如海藻糖）提供的附加益處很少，因為粉末中的非晶含 量低。
[0336] 表12和圖4所列結果共同顯示待噴霧干燥原料中溶解的茚達特羅部分與保存時 所得化學穩定性之間的關