LISA試劑盒，均購于南京迪兆生物 技術有限公司，批號：20130801A。
[0162] 2?試驗方法及結果
[0163] 稱取上述大鼠附睪周圍脂肪組織100mg，按照RANiso Plus (Total RNA提取試劑） 的步驟提取RNA。用紫外分光光度儀檢測260/280的比值。以EasyScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix試劑盒將RNA逆轉錄成cDNA，于_70°C保存。之后用Thermo Scientific Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix(2X)試劑盒，進行實時定量基因擴 增熒光檢測（qPCR)檢測，以2- A A Ct法計算脂肪組織中IL-6 (白細胞介素-6)、MCP_1 (巨 噬細胞趨化蛋白-1)基因表達量。
[0164] 實驗數據均以平均值土標準差（mean土SD)表示，采用Student' s-two tailed-t 檢驗或單因素方差分析（One-way AN0VA)結合 Newman-Keuls Multiple Comparison post-hoc檢驗比較組間差異。p < 0. 05表不顯著差異。實驗結果見表11。
[0165] 表11.給藥5周后大鼠脂肪因子基因表達（:S±SI3,n = 4)
[0166]
[0167] 注：#p < 0? 05vs空白對照，*p < 0? 05vs模型對照
[0168] 實驗結果表明：該中藥組合物2、4、8g/kg劑量均可明顯降低IL_6(白細胞介 素-6)、MCP-I (巨噬細胞趨化蛋白-1)炎性因子的濃度及基因表達（與模型組比較，p < 0. 05)，揭示該組合物有調節脂肪因子紊亂的作用。
[0169] 試驗例8本藥物組合物灌胃給藥對大鼠脂肪IKK P和骨骼肌組織AMPK及胰島素 信號的影響。
[0170] 1 ?試驗材料
[0171] SD清潔級大鼠62只，雄性，208±10克，購自揚州大學比較醫學中心，許可證號 SCXK (蘇）2012-0004。動物分籠飼養于，20±2°C的動物房內，自由攝食和飲水，12h光照/ 黑暗循環。
[0172] 本中藥組合物、陽性藥物二甲雙胍片（商品名：格華止），上海施貴寶制藥有限公 司，批號：1302079,臨用前配成10mg/ml。
[0173] 2?試驗方法及結果
[0174] 利用免疫印跡法檢測大鼠脂肪IKKbeta磷酸化水平及骨骼肌AMPK活化及胰島素 信號激活水平。
[0175] 實驗數據均以平均值土標準差（mean土SD)表示，采用Student' s-two tailed-t 檢驗或單因素方差分析（One-way AN0VA)結合 Newman-Keuls Multiple Comparison post-hoc檢驗比較組間差異。p < 0. 05表不顯著差異。實驗結果見表12和表13。
[0176] 表12?大鼠附睪周圍脂肪蛋白IKKPwestern( X士SD,n= 3)
[0177]
[0178] 注：*p < 0? 05vs 模型，#p < 0? 05vs 空白
[0179] 表13?大鼠蛋白 western blot 光密度值（x士SD, n = 3)
[0180]
[0181] 注：*p < 0? 05vs 模型組，#p < 0? 05vs 空白 2
[0182]實驗結果表明：該中藥組合物4、8g/kg劑量均可明顯降低大鼠脂肪IKKbeta和骨 骼肌AMPK這兩種炎性因子的濃度，高劑量作用強度與陽性藥效果相當。在骨骼肌組織，模 型大鼠AMPK磷酸化程度與空白組比較明顯降低，該中藥組合物呈現明顯量效關系對抗作 用。與此相反，模型組IRS-I絲氨酸位點磷酸化增強，而酪氨酸殘基磷酸化減弱，相應地使 胰島素IRS-I下游的Akt磷酸化水平降低，揭示這些病理改變可以被該組合物部分逆轉。
[0183] 試驗例9本發明中藥組合物灌胃給藥對大鼠體重、食耗率及內臟脂肪系數的影響
[0184] 1 ?試驗材料
[0185] SD清潔級大鼠60只，雄性，209±10克，購自揚州大學比較醫學中心，許可證號 SCXK (蘇）2012-0004。動物分籠飼養于，20±2°C的動物房內，自由攝食和飲水，12h光照/ 黑暗循環。
[0186] 本中藥組合物、陽性藥物二甲雙胍片（商品名：格華止），上海施貴寶制藥有限公 司，批號：1302079,臨用前配成10mg/ml。
[0187] 2.試驗方法及結果
[0188] 大鼠從造模前開始至實驗結束，每周1天及第7d將飼料稱重，第7d將大鼠禁食 S-IOh后稱大鼠體重（g/只），計算每籠大鼠食耗量（g/只/周）和大鼠食耗率（g/g/周）。
[0191] 實驗數據均以平均值土標準差（mean土SD)表示，采用Student's-two tailed-t 檢驗或單因素方差分析（One-way AN0VA)結合 Newman-Keuls Multiple Comparison post-hoc檢驗比較組間差異。p < 0. 05表不顯著差異。實驗結果見表14、表15和表16。
[0192] 表14?大鼠體重（g/只）變化Cf ±S?).
[0193]
[0194] 注：*P < 0? 05vs 空白，#p < 0? 05vs 模型?
[0195] 表15.大鼠食耗率（g飼料/g體重/周）變化(S±SI3).
[0196]
[0199] 注 #p <0? 05vs Blank，*p <0? 05vs Control
[0200] 實驗結果表明：灌胃給藥本發明中藥組合物后，空白與模型組大鼠體重并無明顯 差異，與模型組比較，陽性藥組大鼠體重有明顯增長，4g/kg劑量該組合物也顯示出一定程 度增加，但該組合物組及陽性藥對大鼠食耗率無影響，給藥5周后，本發明中藥組合物4g/ kg劑量能顯著降低脂肪系數。
[0201 ] 試驗例9本藥物組合物灌胃給藥對大鼠肝臟形態及胰島數目的影響
[0202] 1 ?試驗材料
[0203] SD清潔級大鼠60只，雄性，209± 10克，購自揚州大學比較醫學中心，許可證號 SCXK (蘇）2012-0004。動物分籠飼養于，20±2°C的動物房內，自由攝食和飲水，12h光照/ 黑暗循環。
[0204] 本藥物組合物、陽性藥二甲雙胍片（商品名：格華止），上海施貴寶制藥有限公司， 批號：1302079,臨用前配成10mg/ml。
[0205] 2.試驗方法及結果
[0206] 大鼠麻醉取血后，分別分離出胰腺和肝組織置于4%多聚甲醛溶液中固定48h以 上。梯度酒精脫水，透明，石蠟包埋后切片，進行染色鏡下觀察。
[0207] 實驗結果見附圖圖12-1和圖12-2。
[0208] 實驗結果表明：HE染色后果糖模型組可見大鼠肝細胞脂變明顯，胰腺內分泌部胰 島細胞數量減少，胰島形態不規則，胰島細胞顆粒脫失，核大小不等，胰島細胞被增生血管 纖維所分隔，服用本發明中藥組合物后能減少肝細胞脂變，并增加胰島數目，且呈明顯的量 效關系。
[0209] 結論：上述實驗結果表明：本發明中藥組合物能降低空腹血糖、降低胰島素水平、 降低素抵抗指數、降低糖化血紅蛋白（HbAlc)水平；能顯著降低血清中的總膽固醇（TC)、甘 油三脂（TG)、游離脂肪酸（FFA)，提高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C)含量、降低高密度脂蛋 白膽固醇（LDL-C)含量；能顯著降低血清炎性細胞因子C-反應蛋白（CRP)、TNF-a濃度、 MCP-1、IL-6脂肪因子基因表達水平、提高脂聯素水平；能顯著降低內臟脂肪系數、增加胰 島數目及減少肝細胞脂變，說明本發明中藥組合物對糖脂代謝疾病表現出較為全面的治療 作用。并能抑制炎性反應和對抗炎性反應激活AMPK活性，改善胰島素IRS-1/PI3K/Akt途 徑信號轉導從而對抗胰島素抵抗，證明本發明中藥組合物對胰島素途徑或非胰島素途徑調 節糖穩態具有積極意義，對臨床上早期和持續干預糖耐量低減可能具有積極意義。
【主權項】
1. 一種已知中藥組合物（養陰口香合劑）在制備用于治療糖脂代謝障礙疾病的藥物中 的用途。2. 按照權利要求1所述的用途，其特征在于所述藥物組合包括：鮮石斛30-400份、朱 砂根1-20份、黃精30-200份、生地黃30-200份、龍膽10-100份、黃芩30-200份、藍布正 30-200份、麥冬30-200份、天冬30-200份、枇杷葉30-200份、茵陳30-200份、枳殼30-200 份以上份數均為重量份。3. 按照權利要求2所述的用途，其特征在于所述藥物組合包括：鮮石斛100-300份、朱 砂根3-10份、黃精50-100份、生地黃50-100份、龍膽20-100份、黃芩50-100份、藍布正 50-100份、麥冬50-100份、天冬50-100份、枇杷葉50-100份、茵陳50-100份、枳殼50-100 份以上份數均為重量份。4. 按照權利要求3所述的用途，其特征在于所述藥物組合物包括：鮮石斛200份、朱砂 根5. 0份、黃精83. 3份、生地黃83. 3份、龍膽33. 3份、黃芩83. 3份、藍布正83. 3份、麥冬 83. 3份、天冬83. 3份、枇杷葉83. 3份、茵陳83. 3份、枳殼83. 3份以上份數均為重量份。5. 根據權利要求1所述的用途，其特征在于所述的組合物至少與一種輔料制備成液體 劑型，固體制劑或半固體制劑。6. 根據權利要求所述的用途，其特征在于所述的組合物可制備成合劑。
【專利摘要】本發明涉及一種已知中藥組合物(養陰口香合劑)新的醫藥用途，具體的說是涉及一種已知中藥組合物在制備治療糖脂代謝疾病藥物中的應用。實驗證明，本發明所述中藥組合物對糖脂代謝疾病的療效顯著。現有技術中本發明所述中藥組合物已經被研制開發成治療口臭，口舌生瘡，齒齦腫痛，咽干口苦，胃灼熱痛，腸燥便秘用途的養陰口香合劑，療效顯著，且副作用小。現在本發明為該中藥組合物提供了一種新的醫藥用途。
【IPC分類】A61P3/10, A61P3/06, A61K36/8984
【公開號】CN105079496
【申請號】CN201510484091
【發明人】吳筑華
【申請人】吳筑華, 吳霜, 吳超
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年8月3日