、16g/kg，陽性藥組給予200mg/kg二甲雙胍，空白組和模型 組則給予中藥組合物的賦形劑，灌胃體積均為0. 2ml/10g。30min后，依次給6組小鼠按體 重灌胃葡萄糖溶液2g/kg，在灌胃葡萄糖溶液后30min時間點快速將小鼠摘眼球取血。待血 液靜置15min后，于3000rpm、4°C，離心15min。按葡萄糖測定試劑盒中的方法檢測血清葡 萄糖吸收度值（OD 5ffinni)。
[0070] 實驗數據均以平均值土標準差（mean土SD)表示，采用Student' s-two tailed-t 檢驗或單因素方差分析（One-way AN0VA)結合 Newman-Keuls Multiple Comparison post-hoc檢驗比較組間差異。p < 0. 05表不顯著差異。實驗結果見表1。
[0071] 表1.中藥組合物對胰島素抵抗小鼠糖耐量的影響（（:S土SD，n= 10)
[0072]
[0073] 注：#p < 0? 05vs 空白，*p < 0? 05vs 模型組
[0074] 實驗結果表明：糖負荷后0. 5h及Ih小鼠血糖達到峰值，模型組與空白組比較血糖 明顯升高，而血糖值回落顯著延遲；且已知中藥組合物組血糖明顯降低（與模型組比較，P < 〇. 05)，且呈明顯的量效關系。葡萄糖曲線下面積數據也證實該組合物能明顯降低血糖， 表現出改善糖耐量的有效作用。
[0075] 試驗例2本發明所述中藥組合物灌胃給藥對小鼠脂肪組織炎癥信號的影響
[0076] 1 ?試驗材料
[0077] ICR清潔級小鼠200只，雄性，20±2克，購自揚州大學比較醫學中心，許可證號 SCXK (蘇）2012-0004。
[0078] 本發明中藥組合物、陽性藥物二甲雙胍片（商品名：格華止），上海施貴寶制藥有 限公司，批號：1302079,臨用前配成lOmg/mL ;葡萄糖，分析純，南京化學試劑有限公司，批 號：11041820340,臨用前以蒸餾水配成0. 2g/mL ;葡萄糖測定試劑盒，南京建成生物工程研 究所，批號：20130101147 ;脂多糖，Sigma公司，批號：L-2880。
[0079] 2?試驗方法與結果
[0080] 小鼠隨機分為7組，完全空白組（不灌胃糖），空白組（Blank，灌胃糖），模型 組（Control)，中藥組合物（低、中、高劑量組），陽性藥二甲雙胍（Metformin)，每組10 只。禁食不禁水12h后，受試藥組小鼠分別灌胃給予中藥組合物4、8、16g/kg，陽性藥 組給予200mg/kg二甲雙胍，空白組和模型組則給予中藥組合物的賦形劑，灌胃體積均 為0.2ml/10g。用Western Blot法檢測脂肪組織中磷酸化IKKP的表達，肌肉蛋白中的 IRS-1 (S307, Tyrosine residues)、Akt、AMPK 蛋白的磷酸化水平。
[0081] 實驗數據均以平均值土標準差（mean土SD)表示，采用Student' s-two tailed-t 檢驗或單因素方差分析（One-way AN0VA)結合 Newman-Keuls Multiple Comparison post-hoc檢驗比較組間差異。p < 0. 05表不顯著差異。實驗結果見表2。
[0082] 表 2 小鼠附睪脂肪蛋白 IKKP western( X士SD，n = 3)
[0083]
[0084] 注：*p < 0? 05vs 模型，#p < 0? 05vs 空白
[0085] 實驗結果表明：模型小鼠脂肪組織IKKP磷酸化水平明顯增強，提示其可能激活 了 IKK 0 /NF- K 3炎癥信號通路，該組合物對抗炎性刺激有效抑制了 IIKK P的磷酸化活化 (與模型組比較，P < 0. 05)且呈明顯的量效關系，其中高劑量的抑制強度與陽性藥效果相 似。
[0086] 試驗例3本發明所述中藥組合物灌胃給藥對小鼠脂肪因子基因表達的影響
[0087] 1 ?試驗材料
[0088] ICR清潔級小鼠250只，雄性，22±2克，購自揚州大學比較醫學中心，許可證號 SCXK (蘇）2012-0004。
[0089] 本發明中藥組合物、陽性藥物二甲雙胍片（商品名：格華止），上海施貴寶制藥有 限公司，批號：1302079,臨用前配成lOmg/mL ;葡萄糖，分析純，南京化學試劑有限公司，批 號：11041820340,臨用前以蒸餾水配成0. 2g/mL ;葡萄糖測定試劑盒，南京建成生物工程研 究所，批號：20130101147 ;脂多糖，Sigma公司，批號：L-2880 ;小鼠胰島素ELISA測試盒，購 于南京迪兆生物技術有限公司。
[0090] 2?試驗方法與結果
[0091] 稱取上述小鼠附睪周圍脂肪組織100mg，按照RANiso Plus (Total RNA提取試劑） 的步驟提取RNA。用紫外分光光度儀檢測260/280的比值。以EasyScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix試劑盒將RNA逆轉錄成cDNA，于_70°C保存。之后用Thermo Scientific Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix(2X)試劑盒，進行實時定量基因擴 增熒光檢測（qPCR)檢測，以2-A ACt法計算脂肪組織中TNF-a、IL_6 了（白細胞介素-6)、 MCP-I (巨噬細胞趨化蛋白-I)、adiponectin (脂聯素）基因表達量。
[0092] 實驗數據均以平均值土標準差（mean 土 SD)表示，采用Student' s-two tailed-t 檢驗或單因素方差分析（One-way AN0VA)結合 Newman-Keuls Multiple Comparisonpost-hoc檢驗比較組間差異。p < 0? 05表不顯著差異。實驗結果見表3。
[0093] 表3.本發明中藥組合物對糖負荷30min后小鼠內臟脂肪因子mRNA表達的影響 (^ ±SD, n = 4)
[0094]
[0095] 注：*p < 0? 05vs 模型，#p < 0? 05vs 空白
[0096]實驗結果表明：灌胃該中藥組合物后，有效下調了小鼠脂肪TNF-a、IL-6、MCP-I 的mRNA表達，并同時恢復了脂聯素的表達，（與模型組比較，p < 0. 05)，揭示該中藥組合物 能明顯改善脂肪因子表達紊亂。
[0097] 試驗例4本發明所述中藥組合物灌胃給藥對小鼠骨骼肌AMPK磷酸化及胰島素信 號的影響
[0098] 1.試驗材料
[0099] ICR清潔級小鼠255只，雄性，20±2克，購自揚州大學比較醫學中心，許可證號 SCXK (蘇）2012-0004。
[0100] 本發明中藥組合物、陽性藥物二甲雙胍片（商品名：格華止），上海施貴寶制藥有 限公司，批號：1302079,臨用前配成lOmg/mL ;葡萄糖，分析純，南京化學試劑有限公司，批 號：11041820340,臨用前以蒸餾水配成0. 2g/mL :葡萄糖測定試劑盒，南京建成生物工程研 究所，批號：20130101147 ;脂多糖，Sigma公司，批號：L-2880 ;高糖DMEM培養基，Gibco公司 產品，批號：1216629,購于南京偉沃生物科技有限公司
[0101] 2.試驗方法與結果
[0102] 小鼠隨機分為7組，完全空白組（不灌胃糖），空白組（Blank，灌胃糖），模型 組（Control)，中藥組合物組（低、中、高劑量組），陽性藥二甲雙胍組（Metformin)，每組 10只。禁食不禁水12h后，受試藥組小鼠分別灌胃給予中藥組合物4、8、16g/kg，陽性藥 組給予200mg/kg二甲雙胍，空白組和模型組則給予中藥組合物的賦形劑，灌胃體積均為 0. 2ml/10g。灌胃葡萄糖溶液30min脫頸椎處死，快速取出小鼠的腓腸肌與附睪周圍的脂肪 組織，分別稱取小鼠肌肉與脂肪組織IOOmg在冰上進行勻漿研磨，加4倍體積的細胞裂解液 (裂解液：PMSF= 100 : 1)。冰上裂解45min，12000rpm，4°C，20min進行離心。吸取上清， 并用BCA蛋白定量試劑盒進行蛋白定量。加入1/2體積的3倍的上樣緩沖液，沸水中煮沸 15min，使蛋白充分變性，并于-70°C保存。用Western Blot法檢測脂肪組織中磷酸化IKK 0 的表達，肌肉蛋白中的IRS-1 (S307, Tyrosine residues)、Akt、AMPK蛋白的磷酸化水平。
[0103] 實驗數據均以平均值土標準差（mean土SD)表示，采用Student' s-two tailed-t 檢驗或單因素方差分析（One-way AN0VA)結合 Newman-Keuls Multiple Comparison post-hoc檢驗比較組間差異。p < 0. 05表不顯著差異。實驗結果見表4。
[0104] 表4.小鼠肌肉蛋白western blot光密度值（X土SD，n = 3)
[0105]
[0106] 注：*p < 0? 05vs 模型組，#p < 0? 05vs 空白 2
[0107] 實驗結果表明：小鼠口服本發明中藥組合物后，可有效提高AMPK磷酸化活化水 平。同時抑制了胰島素受體底物-1上絲氨酸磷酸化，并有效恢復了胰島素作用下胰島素受 體底物-1上酪氨酸磷酸化水平，表現出保護胰島素受體底物功能的積極作用，因而有效恢 復了胰島素下游信號Akt的活化。
[0108] 試驗例5本發明所述中藥組合物灌胃給藥對大鼠糖耐量、空腹血糖、胰島素水平、 胰島素抵抗指數、糖化血紅蛋白（HbAlc)水平的影響
[0109] 1 ?試驗材料
[0110] SD清潔級大鼠62只，雄性，208±10克，購自揚州大學比較醫學中心，許可證號 SCXK (蘇）2012-0004。
[0111] 本發明中藥組合物，陽性藥物二甲雙胍片（商品名：格華止），上海施貴寶制藥有 限公司，批號：1302079,臨用前配成lOmg/ml ;葡萄糖，分析純，南京化學試劑有限公司，批 號：11041820340,臨用前以蒸餾水配成0. 2g/ml ;葡萄糖測定試劑盒，南京建成生物工程研 究所，批號：20130101147 ;果糖，Amresco公司產品，批號：3368B037 ;大鼠糖化血紅蛋白測 試盒，南京建成生物工程研究所，批號=20130717。
[0112] 試