本發明的實施方案，但僅通過舉例說明的方式給出，而非限制性 的。根據所述詳細描述，本發明的范圍內的各種變化和修改對于本領域技術人員來說是顯 而易見的。
[0029] 附圖簡沐
[0030] 共同地構成附圖的以下描述的圖僅用于說明目的而不是為了限制。
[0031] 圖1描述了編碼人艾杜糖-2-硫酸酯酶（I2S)蛋白的成熟形式的氨基酸序列（SEQ IDNO: 1)，并且指示了蛋白質序列內用于N連接糖基化和半胱氨酸轉化的潛在位點。
[0032] 圖2描述了用于共表達I2S和FGE的示例性構建體（即，SUMF1)設計。（A)分開 的載體上的表達單位（用于共轉染或隨后的轉染）；(B)相同載體上的表達單位（一次轉 染）：（1)分隔的順反子和（2)轉錄連接的順反子。
[0033] 圖3描述了觀察到的與甲酰甘氨酸轉化百分比相關的I2S比活性的示例性水平。
[0034] 圖4描述了相較于參考重組I2S酶，針對使用在無血清細胞培養條件下生長的 I2S-AF2D和4D細胞系產生的重組I2S酶產生的示例性聚糖特征譜。
[0035]
[0036] 為了使本發明更容易被理解，首先定義某些術語。對下列術語和其他術語的附加 定義陳述于整個說明書中。
[0037] 氨基酸：如本文中所用，術語"氨基酸"在其最廣泛意義上是指可并入多肽鏈中的 任何化合物和/或物質。在一些實施方案中，氨基酸具有一般結構H2N-C(H) (R) -COOH。 在一些實施方案中，氨基酸是天然存在的氨基酸。在一些實施方案中，氨基酸是合成氨基 酸；在一些實施方案中，氨基酸是D-氨基酸；在一些實施方案中，氨基酸是L-氨基酸。"標 準氨基酸"是指通常在天然存在的肽中發現的20種標準L-氨基酸中的任一種。"非標準 氨基酸"是指除標準氨基酸外的任何氨基酸，無論其是合成制備的還是從天然來源獲得的。 如本文中所用，"合成氨基酸"涵蓋化學修飾氨基酸，包括但不限于鹽，氨基酸衍生物（如酰 胺）和/或取代。氨基酸，包括在肽中的羧基和/或氨基末端氨基酸，可通過甲基化、酰胺 化、乙酰化、保護基團和/或利用其他化學基團的取代來進行修飾，所述其他化學基團可改 變肽的循環半衰期而不會不利地影響它們的活性。氨基酸可參與二硫鍵。氨基酸可以包含 一種或多種翻譯后修飾，例如與一種或多種化學實體（例如，甲基、乙酸酯基、乙酰基、磷酸 酯基、甲酰基部分、類異戊二烯基、硫酸酯基、聚乙二醇部分、脂質部分、碳水化合物部分、生 物素部分等的締合。在一些實施方案中，可在用于細胞培養的補充培養基中提供本發明的 氨基酸，或可將所述氨基酸用于所述補充培養基。在一些實施方案中，提供于或用于補充細 胞培養基中的氨基酸可以以鹽或水合物的形式提供。
[0038] 大致：如本文中所用，術語"大致"或"約"，如用于一個或多個目標值，意指與所述 參照值相似的值。在某些實施方案中，除非另外指出或另外地根據上下文顯而易見的（除 其中這樣的數值超過可能值的100%外），否則術語"大致"或"約"是指在任一方向（大于 或小于）上落在所述參照值的 25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、 11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少內的值的范圍。
[0039] 分批培養：如本文中所用，術語"分批培養"是指培養細胞的方法，在所述方法中在 培養過程開始時提供最終將用于培養細胞的所有組分，包括培養基（參見下文中"培養基" 的定義）以及細胞本身。通常在某一點停止分批培養，隨后收獲培養基中細胞和/或組分， 并且任選地進行純化。
[0040] 生物利用度：如本文中所用，術語"生物利用度"通常是指到達受試者的血流的施 用劑量的百分比。
[0041] 生物活性：如本文中所用，短語"生物活性"是指在生物系統（例如，細胞培養物、 生物體等）中具有活性的任何物質的特征。例如，當向生物體施用時對該生物體具有生物 作用的物質被認為是有生物活性的。生物活性還可通過體外測定（例如，體外酶促測定如 硫酸酯釋放測定法）來確定。在具體實施方案中，當蛋白質或多肽具有生物學活性時，共 有蛋白質或多肽的至少一種生物活性的該蛋白質或多肽的一部分通常稱為"生物活性"部 分。在一些實施方案中，從細胞培養系統產生和/或純化蛋白質，當向受試者施用時，所 述蛋白質顯示生物活性。在一些實施方案中，蛋白質需要進一步加工以變得具有生物活 性。在一些實施方案中，蛋白質需要翻譯后修飾，例如但不限于，糖基化（例如，唾液酸化 (sialyation))、法尼基化（farnysylation)、切割、折疊、甲酰甘氨酸轉化及其組合，以變得 具有生物活性。在一些實施方案中，作為前體（proform)形式（即未成熟的形式）產生的 蛋白質可能需要額外的修飾來變得具有生物活性。
[0042] 生物反應器：如本文所用，術語"生物反應器"是指用于宿主細胞培養物生長的容 器。生物反應器可具有任何尺寸，只要它對于哺乳動物細胞的培養是有用的。通常情況下， 生物反應器將至少為1升，并且可以是10、100、250、500、1000、2500、5000、8000、10,000、 12, 0000升或以上或其間的任何容積。生物反應器的內部條件，包括但不限于pH值、克分子 滲透壓濃度、〇)2飽和度、0 2飽和度、溫度及其組合，在培養期間通常受到控制。生物反應器 可由適合于在本發明的培養條件下在培養基中保持細胞的任何材料（包括玻璃、塑料或金 屬）組成。在一些實施方案中，生物反應器可用于進行動物細胞培養。在一些實施方案中， 生物反應器可用于進行哺乳動物細胞培養。在一些實施方案中，可將生物反應器與來源于 這樣的生物體的細胞和/或細胞系（例如但不限于哺乳動物細胞、昆蟲細胞、細菌細胞、酵 母細胞和人細胞）一起使用。在一些實施方案中，生物反應器可用于大規模細胞培養生產， 并且通常為至少 100 升，并且可以為 200、500、1000、2500、5000、8000、10, 000、12, 0000 升或 以上或其間的任何容。本領域普通技術人員將意識到，并且將能夠選擇適合的生物反應器 用于實施本發明。
[0043] 細胞培養物：如本文中所用，這些術語是指在適合于細胞群體存活和/或生長的 條件下在培養基中生長的細胞群。如對于本領域普通技術人員將很清楚的，如本文中使用 的這些術語可指包含細胞群和所述群于其中生長的培養基的組合。
[0044] 培養：如本文中所用，術語"培養"或語法等同物是指在有利于生長或存活的條件 下維持細胞的過程。術語"培養"和"細胞培養"或任何同義詞在本申請中可互換使用。
[0045] 培養皿：如本文中所用，術語"培養皿"是指可為培養細胞提供無菌環境的任何容 器。示例性培養皿包括但不限于玻璃、塑料或金屬容器。
[0046] 酶替代療法（ERT):如本文中所用，術語"酶替代療法（ERT) "指的是通過提供缺失 的酶校正酶缺乏的任何治療策略。在一些實施方案中，缺失的酶通過鞘內施用提供。在一 些實施方案中，缺失的酶通過向血流內的輸注提供。一旦施用，酶被細胞吸收并轉運至溶酶 體，在溶酶體中酶用于消除因酶缺乏而在溶酶體中積累的物質。通常情況下，為了使溶酶體 酶替代療法有效，將治療性酶遞送至其中表現貯積缺陷的靶組織中適合的細胞中的溶酶體 中。
[0047] 表達：如本文中所用，核酸序列的"表達"是指下列事件的一個或多個：（1)RNA模 板從DNA序列的產生（例如，通過轉錄）；（2)RNA轉錄物的加工（例如，通過剪接、編輯、5' 帽形成和/或3'末端形成）；（3)RNA至多肽或蛋白質的翻譯；和/或（4)多肽或蛋白質的 翻譯后修飾。
[0048] 補料分批培養：如本文所用，術語"補料分批培養"是指培養細胞的方法，在所述方 法中，在培養過程開始后的某個時間給培養物提供額外的組分。所提供的組分通常包括已 在培養過程中被耗盡的細胞的營養補充劑。通常在某個點停止補料分批培養，并且收獲培 養基中的細胞和/或組分和任選地純化其。
[0049] 片段：如本文中所用，術語"片段"是指多肽，并且被定義為給定的多肽的任何分離 的部分，所述部分對于該多肽是獨特的，或具有該多肽的特征。如本文中所用，該術語還指 給定的多肽的保留了全長多肽的至少一部分活性的任何分離的部分。優選地，保留的活性 的部分為全長多肽的活性的至少10%。更優選，保留的活性的部分為全長多肽的活性的至 少20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %或90 %。更優選，保留的活性的部分為全長多肽 的活性的至少95 %、96 %、97 %、98 %或99 %。最優選，保留的活性的部分為全長多肽的活 性的100%。如本文中所用，該術語還指包含至少在全長多肽中發現的已建立的序列元件的 給定的多肽的任何部分。優選地，序列元件跨越全長多肽的至少4-5,更優選至少約10、15、 20、25、30、35、40、45、50或更多個氨基酸。
[0050] 基因：如本文中所用，術語"基因"是指任何核苷酸序列DNA或RNA，所述核苷酸序 列的至少某一部分編碼分開的終產物，通常地（但不限于）多肽，所述產物在細胞過程的某 一方面起作用。該術語并不意味僅指編碼多肽或其它分離的終產物的編碼序列，而且還可 包括調節基礎表達水平的編碼序列之前和之后的區域，以及各個編碼區段（"外顯子"）之 間的間插序列（"內含子"）。在一些實施方案中，基因可包括調節序列（例如，啟動子、增 強子、聚腺苷酸化序列、終止序列、kozac序列、tata盒等）和/或修飾序列。在一些實施方 案中，基因可包括對不編碼蛋白質但相反地編碼功能性RNA分子例如tRNA基因、RNAi誘導 劑等的核酸的提及。
[0051] 基因產物或表達產物：如本文中所用，術語"基因產物"或"表達產物"一般是指從 基因轉錄的RNA(加工前和/或加工后）或由從基因轉錄的RNA編碼的多肽（修飾前和/ 或修飾后）。
[0052] 基因控制元件：如本文中所用，術語"基因控制元件"是指調節與其