ti)
[0044] 取對數生長期細胞，接種于96孔板，每孔190yL，細胞密度約為105個/孔，設平行培 養液對照，培養48h后，每孔加入不同濃度EGCG溶液I OyL，對照孔加入IOyL培養液。每種藥物 濃度設6個重復。加入藥物后繼續培養48h，取出后每孔加入20yL MTT，放入CO2培養箱繼續 培養4h。取出96孔板，棄孔內液體，每孔加入150yL DMSO，迅速用水平振蕩器搖動，使孔內紫 色結晶物充分溶解，30min內用酶標儀讀取492nm的吸光度值。每孔的吸光度值減去并列平 行孔的吸光度值，得到絕對吸光度值，陽性對照減去陰性對照吸光度值，為正常細胞的絕對 吸光度值，將正常細胞存活率設為100 %，各孔絕對吸光度值與正常細胞絕對吸光度值之比 為各自的細胞存活率。
[0045] 2.實驗結果 [0046] MTT實驗結果如下：
[0049]研究表明，EGCG作用48小時，PC-3細胞的生長受到抑制，變化曲線呈劑量依賴性， 隨著EGCG含量的增加，顯現較好的抑制生長效果，細胞存活率呈直線下降趨勢，其中綠茶提 取物中EGCG含量90 %效果最佳。
[0050] 實施例三:本發明公開的一種防控腫瘤細胞的組合物，包括綠茶提取物、檸檬酸、 紅甜椒粉，各成分在組合物中的重量份數分別為，綠茶提取物在組合物中的重量份數為100 份，檸檬酸在組合物中的重量份數為〇. 1份，甜椒粉在組合物的重量份數為5份。
[0051] 進一步的，綠茶提取物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其在綠茶提取物中的質 量濃度為95 %。
[0052]可將該組合與藥學可接受的載體混合制備而成的任何藥劑形式，例如，可將該組 合物制成片劑、膠囊、顆粒或粉末形式制備組合物，則可使用賦形劑如乳糖、蔗糖、葡萄糖、 淀粉、糊精和/或麥芽糖糊精、硫酸鈣、碳酸鈣、磷酸鈣和/或磷酸氫鈣、微晶纖維素作為運載 體;粘合劑如水、乙醇、淀粉和/或經水解的淀粉溶液、明膠溶液、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖 維素、甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑如干淀粉、交聯羧甲纖維素、羧甲 基淀粉鈉、低取代羥丙基甲基纖維素和交聯聚乙烯吡咯烷酮；潤滑劑如硬脂酸鎂、微粉硅 膠、純化的滑石粉、氫化植物油、聚乙二醇和月桂醇硫酸鎂等。
[0053]其制備方法可采用現有的方法，例如：
[0054] (1)配料:按配方稱取綠茶提取物、有機酸、紅甜椒粉以及輔料，混合均勻，優選采 用等量遞增混合方式進行混合均勻；
[0055] (2)制粒：將（1)中配制好的物料用75 %乙醇溶液制軟材，濕法制粒，45~60 °C干 燥，整粒；
[0056] (3)包裝、檢驗，即得本發明含有EGCG、維生素C和紅甜椒粉的顆粒劑，也可采用現 有方法可將上述顆粒劑灌裝于空心膠囊殼中得到膠囊劑，或者將上述顆粒劑通過壓片工藝 壓制成片劑。
[0057] 采用本發明的組合物對肺癌細胞、食管癌細胞、胃癌細胞、肝癌細胞、結直腸癌細 胞、胰腺癌細胞、子宮頸癌細胞、前列腺癌細胞、皮膚癌細胞、口腔癌細以及白血病腫瘤細胞 都具有防控作用，可采用下述方法對防控作用進行測驗。
[0058] 本組合物對不同腫瘤細胞株生長的抑制作用：
[0059] 1.材料與方法
[0060] 1 · 1材料與試劑
[00611 EGCG購自美國sigma公司；二甲基亞砜(DMS0)、四甲基偶氮噻唑鹽(MTT)、胰蛋白酶 購自上海生物工程有限公司；DMEM培養基和RPMI 1640培養基粉劑購自GIBCO公司；新生牛 血清購自杭州四季青試劑公司；其余試劑均為國產分析純。
[0062] 1.2細胞及培養
[0063] 腫瘤細胞株購自中國科學院上海細胞所。EC109細胞，HepG2細胞，MCF7細胞， MIAPaCa-2細胞，A431細胞，MGC803細胞，人口腔癌細胞HB均用DMEM完全培養基培養，A549細 胞，Hela細胞，SWl 16細胞，HL-60人急性早幼粒細胞白血病細胞用RPMI 1640完全培養基培 養，置于37 °C，5 % C02恒溫培養箱中培養，每3-4天傳代一次，消化液為0.25 %胰蛋白酶溶 液。
[0064] 1 · 3細胞存活率測定(MTIti)
[0065]取對數生長期細胞，接種于96孔板，每孔190yL，細胞密度約為IO5個/孔，設平行培 養液對照，培養48h后，每孔加入不同濃度本組合物溶液10yL，對照孔加入IOyL培養液。每種 藥物濃度設6個重復。加入藥物后繼續培養48h，取出后每孔加入20yL MTT，放入⑶2培養箱 繼續培養4h。取出96孔板，棄孔內液體，每孔加入150yL完全培養基，迅速用水平振蕩器搖 動，使孔內紫色結晶物充分溶解，30min內用酶標儀讀取492nm的吸光度值。每孔的吸光度值 減去并列平行孔的吸光度值，得到絕對吸光度值，陽性對照減去陰性對照吸光度值，為正常 細胞的絕對吸光度值，將正常細胞存活率設為100 %，各孔絕對吸光度值與正常細胞絕對吸 光度值之比為各自的細胞存活率。
[0066] 2.實驗結果
[0067] MTT實驗結果如下：
[0070] 研究表明，本組合物作用不同腫瘤細胞48小時時，各腫瘤細胞的生長受到抑制效 果明顯。
[0071] 實施例四：本發明公開的一種防控腫瘤細胞的組合物，包括綠茶提取物、檸檬酸、 紅甜椒粉，各成分在組合物中的重量份數分別為，綠茶提取物在組合物中的重量份數為70 份，檸檬酸在組合物中的重量份數為〇. 5份，甜椒粉在組合物的重量份數為3份。
[0072] 進一步的，綠茶提取物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其在綠茶提取物中的質 量濃度為10 %。
[0073] 實施例五:本發明公開的一種防控腫瘤細胞的組合物，包括綠茶提取物、檸檬酸、 紅甜椒粉，各成分在組合物中的重量份數分別為，綠茶提取物在組合物中的重量份數為60 份，檸檬酸在組合物中的重量份數為〇. 7份，甜椒粉在組合物的重量份數為2.5份。
[0074] 進一步的，綠茶提取物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其在綠茶提取物中的質 量濃度為98 %。
[0075] 實施例六:本發明公開的一種防控腫瘤細胞的組合物，包括綠茶提取物、檸檬酸、 紅甜椒粉，各成分在組合物中的重量份數分別為，綠茶提取物在組合物中的重量份數為85 份，檸檬酸在組合物中的重量份數為〇. 3份，甜椒粉在組合物的重量份數為4份。
[0076] 進一步的，綠茶提取物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其在綠茶提取物中的質 量濃度為20 %。
[0077] 實施例七:本發明公開的一種防控腫瘤細胞的組合物，包括綠茶提取物、檸檬酸、 紅甜椒粉，各成分在組合物中的重量份數分別為，綠茶提取物在組合物中的重量份數為78 份，檸檬酸在組合物中的重量份數為〇. 6份，甜椒粉在組合物的重量份數為2份。
[0078] 進一步的，綠茶提取物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其在綠茶提取物中的質 量濃度為50 %。
[0079] 以上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明，對于本領域的技 術人員來說，本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修 改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種防控腫瘤細胞的組合物，其特征在于，該組合物包括綠茶提取物、有機酸、紅甜 椒粉。2. 根據權利要求1所述防控腫瘤細胞的組合物，其特征在于，綠茶提取物在組合物中的 重量份數為50-100份，有機酸在組合物中的重量份數為0.1-1份，紅甜椒粉在組合物的重量 份數為1 _5份。3. 根據權利要求1所述的防控腫瘤細胞的組合物，其特征在于，綠茶提取物包括表沒食 子兒茶素沒食子酸酯，其在綠茶提取物中的質量濃度為1〇%_98%。4. 根據權利要求1所述防控腫瘤細胞的組合物，其特征在于，有機酸包括蘋果酸、檸檬 酸、維生素 C的一種或一種以上。5. 根據權利要求1所述防控腫瘤細胞的組合物，其特征在于，該組合物還包括藥學可接 受的載體。6. 權利要求1所述防控腫瘤細胞組合物的用途，其特征在于，作為防控乳腺腫瘤細胞、 肺癌細胞、食管癌細胞、胃癌細胞、肝癌細胞、結直腸癌細胞、胰腺癌細胞、子宮頸癌細胞、前 列腺癌細胞、皮膚癌細胞、口腔癌細以及白血病腫瘤細胞的組合物用途。
【專利摘要】本發明公開了一種防控腫瘤細胞的組合物，該組合物包括綠茶提取物、有機酸、紅甜椒粉。本發明的優點在于，有機酸能抑制綠茶提取物氧化，使綠茶提取物處于穩定狀態。紅甜椒中的抗癌色素與綠茶提取物具有協同作用，最大程度的發揮其效價，增加其抗癌效果。
【IPC分類】A61K36/82, A61K31/353, A61P35/00, A61K47/12, A61P35/02, A61K47/22, A61K36/81
【公開號】CN105641218
【申請號】
【發明人】叢峰松
【申請人】上海金葦子生物技術有限公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年2月1日