一種防控腫瘤細胞的組合物及其用圖
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥技術領域，具體而言，是一種防控腫瘤細胞的組合物及其用途。
【背景技術】
[0002] 綠茶約占世界茶葉消費量的20 %，在中國、日本、韓國等亞洲國家比較受歡迎。兒 茶素占綠茶干重的10 %-15 %，表兒茶素（Epica tech in，EC)、表沒食子兒茶素 (Epigallocatechin，EGC)、表兒茶素沒食子酸酯(Epicatechingal late，ECG)和表沒食子兒 茶素沒食子酸酯(Epigal locatechingal late，EGCG)是最主要的四種兒茶素，其中EGCG是綠 茶兒茶素主要成分，占兒茶素總量的50%-75%。1987年富田勛首次報道了 EGCG對人體腫瘤 細胞具有較高體外抑制作用。隨后大量研究表明，EGCG具有抗突變，抗氧化，抗血管形成，抗 粘附，抗腫瘤浸潤，抗炎，抗病毒等一系列生物學活性。這些作用使EGCG具有非常廣闊的應 用前景和市場價值。然而，EGCG具有多酚類化學結構，與空氣接觸極易被氧化分解，并不能 真正有效的做成藥物、保健品或者其它能夠保存的產品供人類使用。
【發明內容】
[0003] 為解決現有技術中表沒食子兒茶素沒食子酸酯易分解，很難實現產品化的技術缺 陷，本發明公開了一種防控腫瘤細胞的組合物，實現能夠將表沒食子兒茶素沒食子酸酯成 分固化到產品中目的，降低分解率，使表沒食子兒茶素沒食子酸酯作為有效成分作為藥物、 保健品或其它形式的產品應用到市場中。
[0004] 實現上述目的采用的技術方案為，本發明提供的一種防控腫瘤細胞的組合物，該 組合物包括綠茶提取物、有機酸、紅甜椒粉。本發明發現，將綠茶提取物與有機酸組合，能顯 著提高EGCG的穩定性，另一方面，將綠茶提取物與紅甜椒組合，具有良好的協同作用，尤其 抗腫瘤方面效果顯著。
[0005] 優選的，綠茶提取物在組合物中的重量份數為50-100份，有機酸在組合物中的重 量份數為0.1-1份，紅甜椒粉在組合物的重量份數為1-5份。所優選的重量份數為調配充分 發揮效果、成本最低的選擇。
[0006] 進一步的，綠茶提取物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其在綠茶提取物中的質 量濃度為1〇%_98%。進一步，更優選的，本發明中沒食子兒茶素沒食子酸酯在綠茶提取物 中的質量濃度為85-95%。進一步，綠茶提取物中的沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)含量 90%效果最佳，防控腫瘤細胞的作用最強，所選擇的濃度與有機酸、紅甜椒粉混合穩定性最 強、防空腫瘤細胞的作用也是最強的。
[0007] 進一步的，有機酸包括蘋果酸、檸檬酸、維生素 C的一種或一種以上。上述有機酸與 綠茶提取物組合均可提尚綠茶提取物的穩定性。
[0008] 進一步的，該組合物還包括藥學可接受的載體，制成各種劑型的藥物組合物，可將 該組合物采用現有技術方法制備成各種劑型的混合物，方法包括如下步驟(1)配料:按配方 稱取綠茶提取物、有機酸、紅甜椒粉以及輔料，混合均勻，優選采用等量遞增混合方式進行 混合均勻；
[0009] (2)制粒：將（1)中配制好的物料用75 %乙醇溶液制軟材，濕法制粒，45~60 °C干 燥，整粒；
[0010] (3)包裝、檢驗，即得本發明含有EGCG、維生素C和紅甜椒粉的顆粒劑，也可采用現 有方法可將上述顆粒劑灌裝于空心膠囊殼中得到膠囊劑，或者將上述顆粒劑通過壓片工藝 壓制成片劑。
[0011] 本發明還公開了上述組合物的用途，作為防控乳腺腫瘤細胞、肺癌細胞、食管癌細 胞、胃癌細胞、肝癌細胞、結直腸癌細胞、胰腺癌細胞、子宮頸癌細胞、前列腺癌細胞、皮膚癌 細胞、口腔癌細胞以及白血病腫瘤細胞的組合物用途。
[0012] 綜上，本發明的有益效果為，基于綠茶提取物具有的抗腫瘤作用，開發了一種防控 腫瘤細胞的組合物，在制備過程中，加入了有機酸和紅甜椒粉。有機酸能抑制綠茶提取物氧 化，使綠茶提取物處于穩定狀態。紅甜椒中的抗癌色素與綠茶提取物具有協同作用，最大程 度的發揮其效價，增加其抗癌效果。
【具體實施方式】
[0013] 下面結合具體的實施例對本發明做進一步的詳細描述。
[0014] 實施例一:本發明公開的一種防控腫瘤細胞的組合物，包括綠茶提取物、有機酸、 紅甜椒粉。綠茶提取物中主要含有表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)，該成份具有良好防 控腫瘤細胞的作用，但是極易被氧化分解，并不能真正的做成藥物、保健品等供人類使用， 將綠茶提取物與有機酸組合，能顯著提高EGCG的穩定性，另一方面，將綠茶提取物與紅甜椒 組合，具有良好的協同作用，尤其抗腫瘤方面效果顯著。
[0015]下述試驗說明，有機酸與EGCG混合，能夠增強EGCG穩定性的作用，同時也用以說明 選擇能夠使EGCG穩定時所作的試驗選擇過程。
[0016]從有機酸中選擇抗壞血酸對EGCG的穩定性實驗：
[0017] 方法:分別吸取0.5mL EGCG儲備液于3支25mL比色管中，再加入4mL水，編號1、2、3、 4、5，1號作為對照液進行定性掃描，向2號比色管中逐滴加入0.10、0.25、0.40、0.55、0.70、 0.85mL抗壞血酸溶液(0.0Imo 1/L)，分別在80°C水浴反應Oh，Ih，2h，4h，6h后，進行HPLC檢測 EGCG含量，試驗結果如下：
[0020] 以上研究結果表明，添加維生素C后能明顯增加EGCG的熱穩定性。
[0021] 下述試驗說明，紅甜椒粉與EGCG混合，能夠協同EGCG增強防控腫瘤細胞的作用，同 時也用以說明選擇能夠使EGCG穩定時所作的試驗選擇過程。
[0022] EGCG與紅甜椒粉的組合物在抗腫瘤方面的顯著性作用試驗：
[0023]通過建立肺癌移植瘤模型，研究EGCG及其組合物對腫瘤的抑制作用。
[0024] 一、實驗動物;BALB/c裸鼠60只，5~6周齡，雄性，（20 ± 2)g，購自必凱實驗動物有 限公司【動物合格證號SCXK(滬)】。飼養于上海交通大學藥學院實驗動物中心SPF級動物房， 室溫25°C，濕度40%~70%之間，自由進食與飲水。
[0025]二、方法:人肺腺癌細胞裸鼠移植瘤模型的建立和分組:40只鼠隨機分為4組，每組 10只，分別為對照組、EGCG組、紅甜椒粉、EGCG與紅甜椒粉的組合物組。試驗第1周每天各組 小鼠灌胃藥物或生理鹽水0.2mL(對照組），1周后取人肺癌細胞H460株（I X l〇VmL)0.2mL接 種于裸鼠右腋部皮下，即完成裸鼠腫瘤接種。以后每天向各組小鼠灌胃1次〇.2mL的藥物或 生理鹽水。21d后，采血后斷頸處死荷瘤裸鼠，剝取皮下實體瘤瘤塊，剔除筋膜，測量并計算 各組瘤體積和抑瘤率，抑瘤率=(對照組瘤體積-實驗組瘤體積)/對照組瘤體積X 100%。 [0026] 對照組:注射生理鹽水；
[0027] EGCG組：按EGCG計50mg/Kg，溶解于生理鹽水；
[0028]紅甜椒粉組:按紅甜椒粉計5mg/Kg，溶解于生理鹽水；
[0029] EGCG與紅甜椒粉的組合物組：按EGCG計50mg/Kg，紅甜椒粉計5mg/Kg，溶解于生理 鹽水。
[0030] 結果如下：
[0032] 注:*，與EGCG和紅甜椒粉相比較，p〈0 · 05。
[0033]結論:本發明EGCG和紅甜椒粉的組合物在裸鼠實驗動物模型實驗中，具有顯著抑 制腫瘤生長的作用；與EGCG組、紅甜椒粉組比較，具有顯著差異(p〈0.05)，說明EGCG和紅甜 椒粉的組合物在抗腫瘤方面具有良好的協同作用。
[0034] 實施例二:本發明公開的一種防控腫瘤細胞的組合物，包括綠茶提取物、蘋果酸、 紅甜椒粉，各成分在組合物中的重量份數分別為，綠茶提取物在組合物中的重量份數為50 份，蘋果酸在組合物中的重量份數為1份，甜椒粉在組合物的重量份數為1份。
[0035] 進一步的，綠茶提取物包括表沒食子兒茶素沒食子酸酯，其在綠茶提取物中的質 量濃度為90 %。
[0036] 以下采用試驗說明本發明選擇的表沒食子兒茶素沒食子酸酯質量濃度是根據對 癌細胞抑制作用篩選出來的。
[0037]不同含量的EGCG對前列腺癌細胞株PC-3生長的抑制作用：
[0038] 1.材料與方法
[0039] 1.1材料與試劑
[0040] EGCG購自美國sigma公司；二甲基亞砜(DM S0)、四甲基偶氮噻唑鹽(MTT)、胰蛋白 酶購自上海生物工程有限公司:F12培養液購自GIBCO生物技術公司；新生牛血清購自杭州 四季青試劑公司；其余試劑均為國產分析純。
[0041] 1.2細胞及培養
[0042] 前列腺癌細胞株PC-3購自中國科學院上海細胞所。用含10%新生牛血清，lOOU/mL 青霉素/鏈霉素的Fl2培養液，置于37°C，5 %C〇2恒溫培養箱中培養，每3-4天傳代一次，消化 液為0.25 %胰蛋白酶溶液。
[0043] 1 · 3細胞存活率測定(MTI