一種副溶血弧菌—無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條的制作方法
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及一種體外診斷類醫療器械，尤其涉及一種副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條，屬于生物工程技術領域。
【背景技術】
[0002]副溶血弧菌(Vibr1 parahaemoIyticus)，又稱為腸炎弧菌，屬于弧菌科，弧菌屬，革蘭氏陰性菌。副溶血弧菌常在海洋及河口環境生存，存在于魚、蝦、貝類等海水養殖動物的體表或腸道內，是海產動物的條件致病菌，主要引起魚類敗血癥、對蝦紅腿病等海產動物疾病。除了感染海產動物外，副溶血弧菌也是一種常見的引起食源性疾病的病原菌。進食含有該菌的食物，如魚、蝦、蟹、貝類和海藻等海產品可致食物中毒。近年來，全球所有已被確診的腹瀉性腸胃炎病例中，有50%-70%的感染者是由于食用未煮熟的海產品而導致的，臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。目前，全球對水產品安全性越來越關注，及時的對副溶血弧菌進行鑒定，對實現生產預防和治療由該菌引起的疾病都具有重要意義。
[0003]無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)亦稱為13組鏈球菌，為兼性厭氧革蘭氏陽性的鏈狀球菌，在自然界廣泛存在，是人類的重要病原之一，也是魚類的重要病原菌。無乳鏈球菌所引起的水產動物疾病通常在26°C以上水溫發生，對水產動物感染性很強，可引起羅非魚、虹鱒、海鯉和鯔魚等魚類敗血癥和腦膜炎，具有較高的致病率和致死率。近年來，由無乳鏈球菌引起的羅非魚爆發性疾病時有發生，且爆發范圍廣，死亡率極高，常造成嚴重的經濟損失，危害著水產養殖業的健康發展。
[0004]目前副溶血弧菌、無乳鏈球菌的檢測方法主要有以下兩種:
[0005]1、傳統微生物學方法，采用微生物學分離、培養和生化試驗等進行鑒定，耗時長，不利于臨床快速診斷;操作過程繁雜，易出現交叉污染，造成結果的不準確；
[0006]2、分子生物學方法，該法較傳統微生物學方法特異性更高、靈敏度強，但需要專業的操作人員及設備，成本較高、耗時較長。
【發明內容】
[0007]為了克服現有副溶血弧菌和無乳鏈球菌檢測方法中只能進行單一成分檢測，無法實現兩種致病原菌的同時檢測的不足，本發明提供了一種新型副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條，該試劑條可通過一次試驗檢測副溶血弧菌、無乳鏈球菌兩種病菌，且操作簡單，普通人員閱讀說明書后即可完成操作;不需要匹配專業的儀器設備;耗時短，20分鐘內可完成檢測;其檢測特異性和靈敏度均高于傳統微生物鑒別方法，結果準確。
[0008]為解決上述缺陷本實用新型提供的技術方案是:
[0009]—種副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條，包括塑料基板、吸收墊、硝酸纖維素膜、膠體金墊和樣本墊各層狀結構，所述吸收墊固定在塑料基板的上端部，硝酸纖維素膜固定在吸收墊的下部、塑料基板的中間部分，其特征在于:硝酸纖維素膜分為質控區和檢測區，在硝酸纖維素膜上質控區設有質控C線，檢測區設有檢測Tl線、檢測T2線，質控C線上包被羊抗鼠多抗，檢測Tl線上包被有副溶血弧菌抗體，檢測Τ2線上包被有無乳鏈球菌抗體;所述樣本墊包括樣本墊M2、Μ3兩層結構;膠體金墊固定在塑料基板的下端部、硝酸纖維素膜下部，與硝酸纖維素膜緊靠但不重疊;樣本墊M2位于膠體金墊外層中下部，下端部長于膠體金墊至塑料基板下端;樣本墊M3位于樣本墊M2的外層，箭頭指示膠下端位于樣本墊M3外層、并且一直到達塑料基板最下端，其上端黏附于硝酸纖維素膜的下端。本實用新型提供的副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條在硝酸纖維素膜上設有質控C線、檢測Tl線、檢測Τ2線三條線，質控C線上包被羊抗鼠多抗，檢測Tl線上包被有副溶血弧菌抗體，檢測Τ2線上包被有無乳鏈球菌抗體。
[0010]本實用新型提供的副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條樣本墊為兩層，提高了試劑條的層析速度，縮短反應時間。
[0011]進一步的，本實用新型提供的副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條，其特征在于:樣本墊M2上端與膠體金墊平齊，下端長于膠體金墊但略短于塑料基板下端，樣本墊M3上端距離膠體金墊上端0.5-1 cm，樣本墊M3下端與塑料基板下端平齊。
[0012]進一步的，為了增強纖維素膜的性能，本實用新型提供的副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條，其特征在于:所述硝酸纖維素膜為高蛋白親和性的高分子纖維素膜。
[0013]進一步的，為了增強膠體金墊的吸附能力，本實用新型提供的副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條，其特征在于:所述膠體金墊為無紡布。
[0014]進一步的，為了增強樣本墊的吸水能力，本實用新型提供的副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條，其特征在于:所述樣本墊為無紡布或玻璃纖維。
[0015]進一步的，為了增強吸收墊的吸收剩余樣本的能力，本實用新型提供的副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條，其特征在于:所述吸收墊為高吸水性吸水紙。
[0016]進一步的，為了將本申請試劑條的各層狀結構固定牢固，本實用新型提供的副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條，其特征在于:所述塑料基板、吸收墊、硝酸纖維素膜、膠體金墊和樣本墊Μ2、Μ3各層狀結構之間通過雙面膠帶固定。
[0017]本申請副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條由以下結構部分組成:
[0018]硝酸纖維素膜:高蛋白親和性的高分子纖維素膜，經預處理后包被抗特異性副溶血弧菌抗體，制備為反應膜用來作為系統反應的載體和顯示反應結果。
[0019]M2，Μ3:樣本墊，選用有較強吸水能力的玻璃纖維、無紡布，經特殊處理后，為反應系統提供適合的反應條件，并幫助吸取樣本。
[0020]膠體金墊:吸附力較強的無紡布，作為膠體金標記抗體的固相載體。
[0021]吸收墊:吸收檢測后的樣本。
[0022]塑料基板:作為反應體系的支撐物。
[0023]雙面膠帶:用于固定各反應膜和吸水材料于塑料基板上
[0024]箭頭指示膠:固定和保護樣本墊和膠體金墊
[0025]本實用新型通過將抗體噴于膠體金墊6上，包被于硝酸纖維素膜8上，通過增加樣本墊層數，由傳統的I層加厚為樣本墊Μ2、Μ3兩層，提高了樣本的爬行速度和反應時間。
[0026]本申請的核心組件是硝酸纖維素膜和膠體金墊，為免疫反應發生的主要反映材料。
[0027]硝酸纖維素膜:使用高分子纖維膜作為固相載體。該高分子纖維膜具有很強的蛋白吸附功能，副溶血弧菌抗體、無乳鏈球菌抗體包被于膜并經干燥處理后即作為固相，可與液相中的相應抗原-膠體金標記抗體復合物快速結合。本發明將反應膜硝酸纖維素膜分為質控區和檢測區。在質控區包被羊抗鼠IgG形成質控C線，在檢測區分別包被副溶血弧菌抗體、無乳鏈球菌抗體形成反應檢測線Tl和檢測線T2。
[0028]膠體金墊:使用無紡布作為固相載體，膠體金顆粒標記的副溶血弧菌單抗、無乳鏈球菌單抗溶液吸附在無紡布表面。膠體金標記，是蛋白質(抗體)大分子被吸附到膠體金顆粒表面的過程。吸附機理是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合，屬于物理吸附。膠體金標記抗體通過高度特異的抗原抗體反應(雙抗體夾心法:抗體一抗原一抗體)，實現對轉基因產物的特異檢測。在濕潤狀態下，液相中的抗原-膠體金標記抗體復合物可因“燈芯引流現象”作快速定向泳動并與固相膜上的特異抗體結合，形成特異的金標記抗體一抗原一抗體沉積線。
[0029]本實用新型的有益效果是，可一次操作實現副溶血弧菌一無乳鏈球菌兩種細菌的快速檢測。
【附圖說明】
[0030]下面結合附圖和實施例對本實用新型進一步說明:
[0031]圖1是本實用新型副溶血弧菌一無乳鏈球菌聯合快速檢測試劑條示意圖
[0032]圖中標記為:1.質控C線，2-1.檢測Tl線，2-2.檢測T2線，3.塑料基板，4.樣本墊M2,5.樣本墊M3，6.膠體金墊，7.箭頭指示膠，8.硝酸纖維素膜，9.吸收墊。
【具體實施方式】
[0033]如圖1所示，本實用新型包括塑料基板3、吸收墊9、硝酸纖維素膜8、膠體金墊6和樣本墊4、5的層狀結構，各結構由上到下，由左到右的具體裝配如下所述:
[0034]所述吸收墊9，長度22mm，通過雙面膠帶固定在塑料基板3的上端部，與塑料基板3的上端對齊;硝酸纖維素膜8，長度18mm，通過雙面膠帶固定在吸收墊9的下部、塑料基板3的中間部分，硝酸纖維素膜8的上端與吸收墊9的下端相交1mm。
[0035]膠體金墊6，長度10mm，固定在塑料基板3的下端部、硝酸纖維素膜8下部，與硝酸纖維素膜8緊靠但不重疊。
[0036]樣本墊包括樣本墊M2 4、樣本墊M3 5兩層結構，可以提高樣本的爬行速度和反應時間。
[0037]樣本墊M2 4位于膠體金墊6外層中下部，下端部長于膠體金墊6。
[0038]優選的，樣本墊M24上端與膠體金墊6平齊，其下端長于膠體金墊6但略短于塑料基板3下端。
[0039]樣本墊M3 5位于樣本墊M2 4的外層，樣本墊M3 5上端距離膠體金墊6上端0.5_lcm，樣本墊M3 5下端與塑料基板5下端平齊。
[0040]箭頭指示膠7下部位于樣本墊M35外層、一直到