2-二氧環 丁燒-納鹽（AMPPD)，2 -氣-甲氧基螺[1，2 - -氧環丁燒_3,2'-(5' -氣）二環 [3.3.1.13,7]癸燒]-4-基}苯基憐酸二納鹽(00?_3〖&1?)，3-{4-甲氧基螺[1，2-二氧環丁 烷-3,2'-(5'_氯)三環[3.3.1.13,7]癸烷]-4-基}苯基磷酸二鈉鹽(CSPD?)和[10-甲基-9 (10H)-吖啶叉基]苯氧甲基磷酸二鈉鹽(Lumigen? APS-5)。
[0151] 在酶是β-D-半乳糖苷酶的情況下，β-D-半乳糖苷酶活性可以通過，例如，分光光度 法（比色法），發光測量法或熒光分光光度法測量。通過分光光度法（比色法)測量β-D-半乳 糖苷酶活性的方法的例子包括使用鄰硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷的方法。通過發光測量 法測量β-D-半乳糖苷酶活性的方法的例子包括一種方法，該方法包括使β-D-半乳糖苷酶與 其底物反應，及通過發光強度計，發光多孔板讀數器等測量反應溶液的發光。β-D-半乳糖苷 酶的底物的例子包括Galacton-Plus(由Applied Biosystems生產)及其類似物。通過焚光 分光光度法測量β-D-半乳糖苷酶活性的方法的例子包括一種方法，該方法包括使β-D-半乳 糖苷酶與其底物反應，及通過熒光分光光度計，熒光多孔板讀數器等測量反應溶液的熒光。 β-D-半乳糖苷酶的底物的例子包括4-甲基傘形酮-β基-D-吡喃半乳糖苷。
[0152] 在酶是螢光素酶的情況下，螢光素酶活性可以通過，例如，發光測量法來測量。通 過發光測量法測量螢光素酶活性的方法的例子包括一種方法，該方法包括使螢光素酶與其 底物反應，及通過發光強度計，發光多孔板讀數器等測量反應溶液的發光。螢光素酶的底物 的例子包括螢光素和腔腸素。
[0153] 在標記物是除熒光物質，發光物質，放射性同位素或酶之外的其它標記物的情況 下，可以根據一種方法進行檢測，該方法包括:使其中能與標記物特異性結合的物質被熒光 物質，發光物質，放射性同位素，酶等標記的被標記物與構成免疫復合物的標記抗體或標記 競爭性物質的標記物結合;通過使用上文所述標記能與標記物結合的物質的熒光物質，發 光物質，放射性同位素或酶進行測量。能與標記物特異性結合的物質的例子包括能與標記 物特異性結合的抗體，能與生物素(標記物)特異性結合的物質即親和素或鏈親和素。此外， 還可以根據包括以下步驟的方法進行檢測:使能與標記物特異性結合的物質，如能與標記 物特異性結合的抗體和親和素或鏈親和素與免疫復合物的標記物結合;然后使標記抗體與 標記物結合，其中標記抗體通過用熒光物質，發光物質，放射性同位素，酶等標記能與物質 結合的抗體來形成，所述物質能與標記物(抗體的例子包括能與抗體的恒定區特異性結合 的抗體，和能與親和素或鏈親和素特異性結合的抗體)特異性結合;和通過使用上文所述熒 光物質，發光物質，放射性同位素或酶進行測量。
[0154] 這種檢測中所用抗體，能與親和素或鏈親和素或標記物特異性結合的抗體，能與 抗體的恒定區特異性結合的抗體，能與親和素或鏈親和素特異性結合的抗體可以是多克隆 或單克隆抗體，或其中Fc部分已被去除的抗體片段，如Fab，通過胃蛋白酶處理得到的F (ab '）2和通過胃蛋白酶處理及還原處理得到的Fab '。
[0155] (13)待測組分的測定
[0156] 對于待測組分的測定，必需用標準品，即，已知濃度組分的溶液制備顯示組分濃度 與測得值（由標記產生的信息的量)之間關系的校正曲線。組分的濃度可以如下法測定：制 備校正曲線；用樣品進行測量;和將所得測定值與預先產生的校正曲線關聯起來。
[0157] (14)水性介質及其它共存物質
[0158] 用于本發明的免疫測定方法的水性介質的例子包括去離子水，蒸餾水和緩沖液， 優選緩沖液。用于制備緩沖液的緩沖劑不受特別限制，只要其具有緩沖能力即可。緩沖液的 例子包括pH為1-11的緩沖液，如乳酸鹽緩沖液，檸檬酸鹽緩沖液，醋酸鹽緩沖液，琥珀酸鹽 緩沖液，鄰苯二甲酸鹽緩沖液，磷酸鹽緩沖液，三乙醇胺緩沖液，二乙醇胺緩沖液，賴氨酸緩 沖液，巴比妥酸鹽緩沖液，咪唑緩沖液，蘋果酸鹽緩沖液，草酸鹽緩沖液，甘氨酸緩沖液，硼 酸鹽緩沖液，碳酸鹽緩沖液，甘氨酸緩沖液或Good ' s緩沖液。
[0159] Good's緩沖液的例子包括2-嗎啉基乙磺酸(MES)緩沖液，雙(2-羥乙基）亞氨基三 (羥甲基）甲烷(Bis-Tris)緩沖液，三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)緩沖液，N-(2-乙酰胺基）亞 氨基二乙酸(ADA)緩沖液，哌嗪-N，N ' -雙(2-乙磺酸）（PIPES)緩沖液，2- [ N- (2-乙酰胺基)氨 基]乙磺酸(ACES)緩沖液，3-嗎啉基-2-羥基丙磺酸(M0PS0)緩沖液，2-[N，N-雙(2-羥乙基） 氨基]乙磺酸(BES)緩沖液，3-嗎啉基丙磺酸(MOPS)緩沖液，2-{N-[三(羥甲基）甲基]氨基} 乙磺酸(TES)緩沖液，N- (2-羥乙基)-N ' - (2-磺乙基)哌嗪(HEPES)緩沖液，3- [N，N-雙(2-羥 乙基)氨基]-2-羥基丙磺酸(DIPSO)緩沖液，2-羥基-3-{[N-三(羥甲基）甲基]氨基}丙磺酸 (TAPS0)緩沖液，哌嗪-N，N' -雙（2-羥基丙烷-3-磺酸）（P0PS0)緩沖液，N-( 2-羥乙基)-N' -(2-羥基-3-磺丙基）哌嗪(HEPPS0)緩沖液，N- (2-羥乙基)-N ' - (3-磺丙基）哌嗪(EPPS)緩沖 液，tricine [N-三(羥甲基）甲基甘氨酸]緩沖液，vicine [N，N-雙(2-羥乙基)甘氨酸]緩沖 液，3-[N-三(羥甲基）甲基]氨基丙磺酸(TAPS)緩沖液，2-(N-環己基氨基）乙磺酸(CHES)緩 沖液，3-(N-環己基氨基)-2-羥基丙磺酸(CAPS0)緩沖液和3-(N-環己基氨基)丙磺酸(CAPS) 緩沖液。
[0160] 緩沖液的濃度不受特別限制，只要其是適于測量的濃度即可，優選為0.001-2 · 0mol/L，更優選0 · 005-1 · 0mol/L，尤其優選0 · 01-0 · lmol/L〇
[0161] 在本發明的免疫測定方法中，金屬離子，鹽，糖，表面活性劑，防腐劑，蛋白，蛋白穩 定劑等可以一起出現。
[0162] 金屬離子的例子包括鎂離子，錳離子和鋅離子。
[0163] 鹽的例子包括氯化鈉和氯化鉀。
[0164] 糖的例子包括甘露醇和山梨醇。
[0165] 防腐劑的例子包括疊氮鈉，抗生素（鏈霉素，青霉素，慶大霉素等），BioAce， Proclin 300和Proxel GXL〇
[0166] 蛋白的例子包括牛血清白蛋白（BSA)，胎牛血清（FBS)，酪蛋白和BlockAce(由 Dainippon Pharmaceutical Co·,Ltd.生產）。
[0167] 蛋白穩定劑的例子包括過氧化物酶穩定緩沖液（由DakoCytomation生產）。
[0168] (15)免疫測定試劑
[0169] 本發明的免疫測定試劑可以用于本發明的免疫測定方法，其包括上文提及的（3) 的膽汁酸衍生物，必要時還包括聚氧乙烯非離子型表面活性劑。本發明的免疫測定試劑的 例子包括一種試劑，該試劑包括選自以下（i)-(iii)的組分，（3)的膽汁酸衍生物，必要時還 包括聚氧乙烯非離子型表面活性劑：
[0170] (i)能結合組分的第一抗體和能結合組分的標記第二抗體；
[0171] (ii)標記競爭性物質和既能結合組分又能結合競爭性物質的抗體;以及
[0172] (iii)競爭性物質和既能結合組分又能結合競爭性物質的標記抗體。
[0173] 本發明的免疫測定試劑的形式不受特別限制，只要其為促成本發明的免疫測定方 法的形式即可。試劑的形式的例子包括液體形式，凍干形式等。在使用凍干形式的試劑的情 況下，先將試劑溶解于前述水性介質等之中后，再將試劑用于測量。
[0174] 關于本發明的免疫測定試劑中所使用的膽汁酸衍生物，能結合組分的抗體，競爭 性物質，能結合組分的標記抗體和標記競爭性物質，前述膽汁酸衍生物，前述能結合組分的 抗體，前述競爭性物質，前述能結合組分的標記抗體和前述標記競爭性物質可以分別使用。 此外，本發明的免疫測定試劑必要時可以包括前述水性介質，前述金屬離子，前述鹽，前述 糖，前述表面活性劑，前述防腐劑，前述蛋白，前述蛋白穩定劑等。
[0175] 此外，本發明的免疫測定試劑可以試劑盒的形式儲存和分發。試劑盒的例子包括 由兩種試劑組成的試劑盒和由三種試劑組成的試劑盒，構成試劑盒的試劑中的組成可以由 本領域技術人員適當選擇。例如，通過將膽汁酸衍生物溶解在水性介質中制得的溶液可以 作為樣品的稀釋用溶液組成試劑盒，其可以是構成試劑盒的試劑之一。
[0176] (16)抑制樣品中的血紅蛋白干擾的方法
[0177] 本發明提供了在免疫測定含血紅蛋白樣品中的待測組分的方法中抑制血紅蛋白 干擾的方法。在免疫測定待測組分的方法中，血紅蛋白的干擾可以通過與樣品中所固有的 膽汁酸衍生物不同的膽汁酸衍生物的共存來抑制。與樣品中所固有的膽汁酸衍生物不同的 膽汁酸衍生物的共存抑制了樣品中血紅蛋白的干擾，從而產生了準確的測量。
【具體實施方式】
[0178] 在下文中，將參照實施例對本發明進行具體描述，其不應被解釋為限制本發明的 范圍。
[0179] [實施例1]
[0180] [1]抗MxA蛋白單克隆抗體的制備
[0181] 產生單克隆抗體KM1124的雜交瘤細胞系KM1124(FERM BP-4729)和產生單克隆抗 體KM1135的雜交瘤細胞系KM1135(FERM BP-4731)各自以5-20X 106細胞/動物的量向經降 植燒化1^8七3116)處理的8周齡雌性裸鼠〇^113/(3)腹膜內注射。10-21天后，雜交瘤細胞在小 鼠腹水中癌化，收集小鼠腹水。將收集到的腹水以3000rpm離心5分鐘，以除去固體內容物， 收集上清液。通過辛酸沉淀法(抗體-實驗室手冊(Antibodies-A Laboratory Manual)， Cold Spring Harbor Laboratory,1988)從上清液中純化單克隆抗體，分別得到單克隆抗 體KM1124和KM1135。
[0182] KM1124是能與從人MxA蛋白的氨基末端開始計數的第220-297個殘基中的表位結 合的小鼠單克隆抗體，KM1135是能與從人MxA蛋白的氨基末端開始計數的第10-220個殘基 中的表位結合的小鼠單克隆抗體。
[0183] [2]重組MxA蛋白的制備
[0184] 用通過在pET-14b載體（由Novagen，EMDBiosciences生產）的NdeI和BamHI之間插 入含有編碼人MxA蛋白的cDNA的Ndel-BamHI片段而產生的人MxA蛋白表達載體pET14b-MxA (Nucleic Acids Res.，32,643-652,2004)轉化大腸桿菌BL21(DE3)pLysS菌株。該轉化體表 達已加入N末端His標簽的MxA蛋白。
[0185] 將所得轉化體接種入5mL含氨芐西林的LB培養基中，在37°C振蕩培養細胞，直至 600nm處的光密度(0D600)達到0.5。將該培養液接種入250mL含氨芐西林的LB培養基中，在 37 °C振蕩培養細胞，直至600nm處的光密度達到0.3-0.5。向該培養物中加入異丙基硫代半 乳糖苷（IPTG)，使最終濃度為0.4mmol/L，隨后再在37°C振蕩培養2小時，之后結束培養。將 培養液在4°C以3000rpm離心10分鐘，以收集細菌細胞。在-80°C儲存細菌細胞，直至制備MxA 蛋白。
[0186] 由于MxA蛋白以包涵體的形式存在于細菌細胞中，因此將細菌細胞在冰上融化，加 入20mL冰冷的結合緩沖液(5mmol/L咪唑，0.5mol/L氯化鈉，20mmol/L Tris-HCl，pH 7.9)， 得到懸浮液。將細菌細胞懸浮液超聲處理5次，每次30秒，以使細胞破裂，然后在4°C以 4000rpm離心10分鐘。除去上清液，沉淀懸浮在加入的20mL冰冷的結合緩沖液中。同樣再次 進行超聲處理和離心。除去上清液，向沉淀中加入20mL含有6mol/L尿素的結合緩沖液，得到 懸浮液。進行類似的超聲處理后，混合物在冰上放置30分鐘，使包涵體溶解，然后在4°C以 10，OOOrpm離心30分鐘。收集上清液，然后經0.45nm微孔濾膜過濾。
[0187] 向所得溶液中加入0 · 5mL Ni-NTA His · Bind樹脂（由Novagen，EMD Biosciences 生產），然后在4°C全部旋轉混合2小時，使MxA蛋白經His標簽與樹脂結合。該混合物在4°C以 3000rpm離心2分鐘，以回收樹脂。向樹脂中加入10mL含有6