性七肽CYSYSYS修飾
[0038] 用十二水合磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀配制pH = 7.4的10mM磷酸鹽緩沖液。用預先 脫氣的磷酸鹽緩沖液配制濃度為4mg/mL的兩親性七肽CYSYSYS溶液。將步驟2)獲得的芯片 浸入上述兩親性七肽溶液中，常溫下浸泡12h后取出。用乙醇和去離子水依次清洗3次，并用 氮氣吹干備用，即獲得兩親性七肽修飾的SPR芯片。
[0039] 4)兩親性七肽SPR芯片表面蛋白吸附量檢測
[0040] 將步驟3)獲得的兩親性七肽CYSYSYS修飾的SPR芯片用柏油貼合到SPR系統的棱鏡 上。以pH為7.4的磷酸緩沖液為流動相，流速為lOyL/min。待基線平穩后，往定量環中注入 1 OOyL lmg/mL的牛血清白蛋白或溶菌酶或β-乳球蛋白或lmg/mL蛋白濃度的血清、豆漿、牛 奶稀釋液，經流動相推動蛋白溶液到達芯片表面，由SPR系統測定共振角實時變化曲線， 20min后讀取SPR共振角變化值，如附圖2、3所示，表面非特異性吸附量分別為7.75ng/cm2、 11.78ng/cm 2、ll .61ng/cm2、106. llng/cm2、189. llng/cm2、228.86ng/cm2,遠低于裸金表面各 蛋白的非特異性吸附量，見表1。
[0041 ]表1蛋白在SPR裸金芯片表面的非特異性吸附量
[0042]
[0043] 表1SPR裸金芯片對lmg/mL的溶菌酶(Lysozyme)、牛血清蛋白（BSA)、β-乳球蛋白 (β-lactoglobulin)、血清（Blood serum)、豆楽^Soybean milk)、牛奶（Cow milk)稀釋液中 蛋白的非特異性吸附量。
[0044] 實施例3
[0045] 具體操作方法如下：
[0046] 1)裸金芯片制備
[0047]如附圖1所示，采用電子束蒸發鍍膜技術在BK7玻璃基底（1)上涂覆一層2-3nm厚鉻 層(2)和一層45-50nm厚金膜(3)，獲得了裸金芯片。
[0048] 2)裸金芯片預處理
[0049] 將步驟1)獲得的裸金芯片浸入98%濃硫酸與30 %雙氧水(體積比7 : 3)混合溶液 中，常溫下浸泡2h。然后取出用去離子水清洗3次，用氮氣吹干備用。
[0050] 3)兩親性七肽CYSYSYS修飾
[0051] 用十二水合磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀配制pH = 7.4的10mM磷酸鹽緩沖液。用預先 脫氣的磷酸鹽緩沖液配制濃度為1 〇mg/mL的兩親性七肽CYSYSYS溶液。將步驟2)獲得的芯片 浸入上述兩親性七肽溶液中，常溫下浸泡12h后取出。用乙醇和去離子水依次清洗3次，并用 氮氣吹干備用，即獲得兩親性七肽修飾的SPR芯片。
[0052] 4)兩親性七肽SPR芯片表面蛋白吸附量檢測
[0053]將步驟3)獲得的兩親性七肽CYSYSYS修飾的SPR芯片用柏油貼合到SPR系統的棱鏡 上。以pH為7.4的磷酸緩沖液為流動相，流速為lOyL/min。待基線平穩后，往定量環中注入 100yL lmg/mL的牛血清白蛋白或溶菌酶或β-乳球蛋白或lmg/mL蛋白濃度的血清、豆漿、牛 奶稀釋液，經流動相推動蛋白溶液到達芯片表面，由SPR系統測定共振角實時變化曲線， 20min后讀取SPR共振角變化值，并計算非特異性吸附量。
[0054] 實施例4
[0055]具體操作方法如下：
[0056] 1)裸金光纖制備
[0057]采用電子束蒸發鍍膜技術在光纖基底上涂覆一層2-3nm厚鉻層和一層45-50nm厚 金膜，獲得了裸金光纖。
[0058] 2)裸金光纖預處理
[0059] 將步驟1)獲得的裸金光纖浸入98%濃硫酸與30 %雙氧水（體積比7 : 3)混合溶液 中，常溫下浸泡2h。然后取出用去離子水清洗3次，用氮氣吹干。
[0060] 3)兩親性七肽CYSYSYS修飾
[0061] 用十二水合磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀配制pH = 7.4的lOmM磷酸鹽緩沖液。用預先 脫氣的磷酸鹽緩沖液配制濃度為1 Omg/mL的兩親性七肽CYSYSYS溶液。將步驟2)獲得的光纖 傳感區浸入上述兩親性七肽溶液中，常溫下浸泡12h后取出。用乙醇和去離子水依次清洗3 次，并用氮氣吹干，即獲得兩親性七肽修飾的光纖SPR傳感器。
[0062] 4)兩親性七肽光纖SPR表面蛋白吸附量檢測
[0063]將上述3)制得的光纖SPR傳感器通過SMA905等接頭安裝到SPR譜儀測控系統。設定 積分時間、平均次數、平滑度，待信號穩定后保存暗光譜;打開光源，待信號穩定后保存參考 光譜;將界面調節至反射率模式，將制備的傳感器浸入PBS緩沖液中，待信號穩定后疊加活 動光譜，得到傳感器在PBS緩沖液中的SPR反射譜圖；然后將傳感器浸入lmg/mL牛血清白蛋 白或溶菌酶或β-乳球蛋白或lmg/mL蛋白濃度的血清、豆漿、牛奶稀釋液中，得到傳感器在蛋 白溶液中的SPR反射譜圖，由反射譜圖的波長偏移量計算蛋白的非特異性吸附量。
[0064]本發明公開和提出的一種基于兩親性七肽修飾的表面等離子共振儀芯片的制備 方法，本領域技術人員可通過借鑒本文內容，適當改變條件路線等環節實現，盡管本發明的 方法和制備技術已通過較佳實施例子進行了描述，相關技術人員明顯能在不脫離本發明內 容、精神和范圍內對本文所述的方法和技術路線進行改動或重新組合，來實現最終的制備 技術。特別需要指出的是，所有相類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的， 他們都被視為包括在本發明精神、范圍和內容中。
【主權項】
1. 一種基于兩親性七肽修飾的表面等離子共振儀芯片抗污染表面制作方法，其特征 是:用十二水合磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀配制pH=7.4的10mM磷酸鹽緩沖液;用磷酸鹽緩沖 液配制濃度為1-lOmg/mL的兩親性七肽CYSYSYS溶液;將清洗干凈的SPR芯片浸入上述兩親 性七肽溶液中，常溫下浸泡5-24h后取出；用乙醇和去離子清洗使芯片表面清洗潔凈，并用 氮氣吹干即可。2. 根據權利要求1所述的方法，其特征是在金膜表面修飾兩親性七肽CYSYSYS，但同樣 適用于銀/金復合膜表面。3. 根據權利要求1所述的方法，其特征是SPR芯片清洗方法是:將芯片浸入體積比為7: 3 的98%濃硫酸與30%雙氧水混合溶液中，常溫下浸泡2h;然后取出用去離子水清洗多次，用 氮氣吹干。4. 根據權利要求1所述的方法，其特征是磷酸鹽緩沖液進行預先脫氣處理。5. 根據權利要求1所述的方法，其特征是基底為玻璃片或光纖。
【專利摘要】本發明涉及一種基于兩親性七肽CYSYSYS的表面等離子共振儀芯片的制備方法；用十二水合磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀配制pH＝7.4的10mM磷酸鹽緩沖液；用磷酸鹽緩沖液配制濃度為1-10mg/mL的兩親性七肽CYSYSYS溶液；將清洗干凈的SPR芯片浸入上述兩親性七肽溶液中，常溫下浸泡5-24h后取出；用乙醇和去離子清洗使芯片表面清洗潔凈，并用氮氣吹干即可。本發明的芯片在單一蛋白(牛血清蛋白、溶菌酶、β-乳球蛋白)，稀釋的復雜體系(1mg/mL蛋白濃度的血清、豆漿、牛奶)均具有優良的抗污染性能。本發明的芯片具有優良的抗污染性能，且制備方法簡便，原料易于合成與調控，有很好的可行性和實用性。
【IPC分類】G01N21/552
【公開號】CN105548085
【申請號】CN201510889569
【發明人】黃仁亮, 葉慧君, 蘇榮欣, 齊崴
【申請人】天津大學
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2015年12月4日