測定食用香精中咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚殘留量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種基于氣相色譜一串聯質譜儀測定食用香精中咪唑、二甲苯麝香和 芝麻酚殘留量的方法，屬于食品添加劑理化指標檢測技術領域。
【背景技術】
[0002] 咪唑（分子結構式如下所示），即1，3-二氮唑，是一個五元雜環芳香性有機化合物， 化學式為C3H 4N2，分子量為68.08，CAS號為288-32-4，它也是一個生物堿，呈白色或淺黃色固 體結晶，易溶于水、乙醇、乙醚、氯仿、啦啶，微溶于苯，極微溶于石油醚，具有酸性，也具有堿 性。咪唑為平面五元環狀化合物，它的兩個氮原子間存在永久偶極，極性很強，偶極矩為 3.61D，并且分子間存在氫鍵締合，導致了咪唑具有反常高的沸點（256°C)。分子中存在一個 6電子共輒大π鍵，故具有典型的芳香性。與氫以 〇鍵相連的氮原子提供一對電子，環內其余 四個原子各提供一個電子成鍵。毒理學數據表明該物質有毒，對小鼠經口 LD50為18.80mg/ kg，注射LD50為610mg/kg，其毒性及防護方法與乙二胺相似。此外，該物質對環境可能有危 害，對水體應給予特別注意。綜合文獻結果，一般說來，咪唑并不直接當作食品添加劑使用， 很大可能是作為副產物而被引入使用。
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[0004] -τ不廝甘〈刀、子結構式如下所示），又稱2,4,6-三硝基-3,3-二甲基-5-叔丁基 苯，由間二甲苯用異丁烯烷基化后再硝化反應而得，它是單一的化合物，不同于麝香屬于天 然的多組分混合物。化學式為&2Η 15Ν306，分子量為297.27，CAS號為81-15-2，呈現淺黃色粉 狀或針狀結晶，具較粗麝香香氣，熔點為112.5-114.5°C，沸點為200-202°C，在95%乙醇中 的溶解度為7g/L(25°C)，易溶于苯甲酸芐酯和鄰苯二甲酸二乙酯，不溶于水、甘油和丙二 醇，有干甜的麝香樣動物香氣，氣勢較弱但留香長。二甲苯麝香作為高持久性、高生物蓄積 性物質，已被歐盟化學品管理署(ECHA)列為高關注度物質（Substances of Very High 0)11(^?1，3￥!1〇。歐盟"保健和環境科學委員會"致癌、致突變或致生殖毒性(011〇專家工作 組在第29次會議上將二甲苯麝香列為第3類物質。國際日化香料協會（IFRA)計劃在IFRA標 準第44次修訂稿中建議二甲苯麝香不作為日化香料成分使用。國際日化香料研究所(RIFM) 也建議二甲苯麝香不得用于唇用產品或口腔衛生用品。我國化妝品衛生規范及歐盟化妝品 規程(Council Direc2tive 76/768/EEC)中規定二甲苯麝香為化妝品組分中限用物質（不 得用于口腔衛生用品），在香精、花露水和其它產品中的限量分別為1.〇%、〇.4%和0.03%。
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[0006] 芝麻酚(分子結構式如下所示），又稱3，4-亞甲二氧基苯酚，化學式為C7H 6〇3，分子 量為138.12,043號為533-31-3，熔點為62-65°(3，沸點為113-116°(3，略溶于水，呈現白色至 淺黃色結晶性粉末或顆粒，易溶于乙醇、乙醚，芝麻酚的合成技術主要有三條:其一是從芝 麻油中提取，其二是從胡椒胺出發進行全合成，其三是從洋茉莉醛出發的半合成路線。芝麻 酚的致腫瘤數據表明：大鼠經口TDLo為874mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS標準，胃腸道-月中 瘤；小鼠經口 TDLo為1092mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS標準，胃腸道-腫瘤；大鼠經口 TD為 1092mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS標準，胃腸道-腫瘤；小鼠經口 TD為1612mg/kg/2Y-C，瘤-致癌的RTECS標準，胃腸道-腫瘤。2006年，日本厚生勞動省宣布禁用的42種食品添加劑中就 包括芝麻酚。
[0007]
[0008] 工業生產中不可或缺的化合物質，其安全性是食品總體 安全性非常重要的一個方面，而食品安全性控制的源頭，根本在于生產原料，為此，必須對 食用香精中關注的化合物質進行監控。文獻調研表明，現行檢測咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚 的方法主要有氣相色譜和液相色譜。鑒于咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚在食用香精中有可能 被用到，因此探索一種快速、準確的同時檢測咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚的方法，對食用香 精中該系列物質的殘留量進行有效控制，進而保障食用添加劑的使用安全性，就顯得非常 迫切和十分必要。
【發明內容】
[0009] 本發明旨在克服現有的技術缺陷，提供一種采用氣相色譜-串聯質譜儀測定食用 香精中咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚殘留量的方法，該方法能準確量化分析食用香精中痕量 咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚的殘留量，測定結果準確、靈敏度高，基質干擾少。
[0010] 具體來說，本發明采用了以下技術方案：
[0011] -種測定食用香精中咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚殘留量的方法，其特征在于，所述 方法包括以下步驟：
[0012] ⑴內標溶液的制備：以丙酸苯乙酯為內標物，使用乙醇為溶劑，制備內標溶液；
[0013] (2)標準工作溶液的制備：以咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚的標準品為目標物，使用 乙醇為溶劑，經逐級稀釋制備成標準儲備溶液，然后分別加入一定量的內標溶液，制備成標 準工作溶液；
[0014] (3)樣品溶液的制備:稱取一定量的食用香精樣品于離心管中，加入一定量的水， 再準確移入一定體積的內標溶液，用漩渦混合器分散均勻;接著再加入一定體積的乙醇，超 聲萃取，加入一定量的無水硫酸鈉，搖勻后靜置，之后于離心機內離心，取上層清液過有機 相濾膜，得樣品溶液；
[0015] (4)氣相色譜-串聯質譜儀分析：用氣相色譜-串聯質譜儀對標準工作溶液和樣品 溶液進行檢測分析；
[0016] (5)標準工作曲線的繪制及樣品結果的計算。
[0017]其中，步驟(1)內標溶液的制備包括：
[0018] (la)內標儲備液：稱取0.2g丙酸苯乙酯，精確至O.OOOlg，用乙醇溶解并定容至 lOOmL容量瓶中，搖勻；
[0019] (lb)內標溶液:準確移取0 · lmL內標儲備液，用乙醇定容至1 OOmL容量瓶中，搖勾。
[0020] 另外，步驟(2)標準工作溶液的制備包括：
[0021] (2a)-級標準儲備液：分別稱取咪唑、二甲苯麝香和芝麻酚各O.lg，精確至 〇.〇〇〇lg，用乙醇溶解并定容至100mL容量瓶中，搖勻；
[0022] (2b)二級標準儲備液:準確移取lmL-級標準儲備液，于100mL的容量瓶中，用乙醇 稀釋并定容至刻度；
[0023] (2c)標準工作溶液:分別準確移取二級標準儲備液20yL、50yL、100yL、200yL、500y L和1000yL至10mL的容量瓶中，再分別準確加入100yL內標溶液，用乙醇稀釋并定容至刻度， 得系列標準工作溶液。
[0024] 進一步，步驟(3)樣品溶液的制備包括:稱取0.5g樣品，精確到0.0001 g，置于50mL 離心管中，加入lmL水，準確移入100yL內標溶液，用漩渦混合器分散均勾，再加入8mL乙醇， 置于超聲波發生器內超聲萃取20min，加入0.5g無水硫酸鈉，搖勾后靜置5min，之后于離心 機內在4000r/min轉速下離心5min，取上層清液過0.45μηι有機相濾膜，得到樣品進樣溶液。 [0025] 優選地，步驟（4)GC-MS/MS分析的儀器分析條件為：采用規格為30m X 0.25mm X 0.25μπι的HP-INN0WAX毛細管色譜柱;載氣為氦氣，恒流速度為1. OmL/min;進樣方式:進樣量 為lyL，脈沖不分流進樣，進樣脈沖壓力為25psi，時間為lmin;進樣口溫度為250°C;傳輸線 溫度為260°C;升溫程序為初始溫度為100°C，以3°C/min的速率升高至240°C，保持5min;質 譜分析條件為：電離方式為EI源，正離子模式;離子源溫度:230°C;四極桿溫度:均為150°C; 碰撞氣:氮氣，流速1.5mL/min，載氣氦氣流速為2.25mL/min;多反應監測MRM模式，詳細參數 列于下表：
[0026] 目標物的MRM參數情況
[0027]
Ο
[0028] 在以上方法中，步驟(5)標準曲線繪制及結果計算如下：以標準工作溶液中目標物 與內標的濃度之比為橫坐標，以色譜圖中目標物與內標的峰面積之比為縱坐標，進行線性 回歸分析，得到標準工作曲線，將相同條件下測得的樣品溶液中目標物與內標的色譜峰面 積比，代入標準工作曲線，根據下列公式求得食用香精樣品中目標物的含量：
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[0030] _