步驟（1) 中，向標準品溶液和待測樣品中加入的"N-冊Ak-"C為1化mol，i5N-冊A〇-"C為10化mol。
[0050] 在上述方法中，步驟（3)中，所述"從步驟似的檢測結果中獲得所述待測樣品中 糖化血紅蛋白化bAj含量"的方法與國際臨床化學組織（IFCC)推薦的檢測方法大體一致， 即先根據步驟（2)所得的所述待上機標準品的檢測結果，繪制標準曲線，再將步驟（2)所得 的所述待上機待測樣品的檢測結果代入所述標準曲線，進而得到所述待測樣品中糖化血紅 蛋白化bAj的含量。
[0051] 在本發明的一個實施例中，步驟（3)中，所述"從步驟（2)的檢測結果中獲得所述 待測樣品中糖化血紅蛋白化bAj含量"的方法，具體包括如下步驟：
[00閲 （a)標準曲線的繪制：包括如下（曰1)-(曰如：
[0053] (al)將所述標準品（所述系列溶液酶解前）各自的"A1C/(A1C+A0)折合化質量百 分含量"X100后的數值代入公式（I)，替代"化Ai。％ "，從而計算出所述標準品各自的rconc 值；
[0054] HbAic% =lOOXrconc/Q甘cone) 公式（I)
[00巧]式中，化Alc%等于"化Alc折合成血紅蛋白的質量/OlbAic折合成血紅蛋白的質量 +冊A0折合成血紅蛋白的質量）X100 "。
[0056] (曰2)根據所述步驟（2)上機檢測得到的所述標準品溶液質譜圖中化Ai。、化A0、所 述"N-冊Ak-"C和所述i5n-冊A〇-"C的質荷比和信號強度，按照公式（Π)計算所述標準品 溶液中化Ai。與化A0的校正后信號強度比值（rsig);
[0057] rsig(信號比率）=10X師Ale信號強度ΓΝ-冊Ak-"C信號強度）/師AO信號 強度ΓΝ-冊A〇-"C信號強度） 公式（II)
[005引（曰扣W步驟姐）計算所得所述標準品溶液中化Ai。與化A0的校正后信號強度比 值（rsig)為橫坐標，W步驟（al)中計算得到的所述標準品的rconc值為縱坐標，繪制標準 曲線；
[005引 化）待測樣品中化Ale含量的計算；包括如下化1)和化。：
[0060] 化1)根據所述步驟似上機檢測得到的所述待上機待測樣品質譜圖中化Ai。、HbAO、所述i5N-冊Ak-"C和所述"N-冊A〇-"C的信號強度，按照公式（II)計算所述待上機待 測樣品中化Ai。與化A0的校正后信號強度比值（rsig);
[00川rsig(信號比率）=10X師Ale信號強度ΓΝ-冊Aic-"C信號強度V師A0信號強 度Γν-冊A0-"C信號強度） 公式（II)
[006引 化。將步驟化1)上機檢測得到的所述待上機待測樣品中化Ai。與化A0的校正 后信號強度比值（rsig)代入步驟（a)所繪制的標準曲線中，計算所述待測樣品的rconc 值；再將所述rconc值代入公式（I)，計算得到"化Ai。％ "，所述"化Ai。％ "即可表示待測樣 品中化Ai。含量。也可接著將所得"化Ale% "【即化Ai。折合成血紅蛋白的質量/OlbAi。折 合成血紅蛋白的質量+冊A0折合成血紅蛋白的質量）X 100】轉化為"化Ai。折合成血紅蛋 白的摩爾數/化bAi。折合成血紅蛋白的摩爾數+冊A0折合成血紅蛋白的摩爾數）"【可記作 "A1C/(A1C+A0)折合化的摩爾比"】，并用單位mmol/mol表示，該表示方法與IFCC最終結 果表示方法一致，即"IFCC-冊Aic(毫摩爾/摩爾）"。兩者之間的轉化關系為；"化Ak%" = 10X。IFCC-HbAiE(毫摩爾 / 摩爾）"。
[0063] 在上述方法中，在步驟（1)中過所述固相萃取柱后，還包括用真空離必壓縮機抽 干后用0. 1% (0.lg/100血）甲酸水溶液復溶的步驟。
[0064] 本發明通過對糖化血紅蛋白測定的樣品前處理、質譜條件、定量方法等過程進行 詳細研究，在國內首次同時使用穩定同位素1?和"C標記人工合成的糖化血紅蛋白膚段，經 液相色譜串聯質譜技術，建立了準確測定糖化血紅蛋白的分析方法。該方法操作簡單快速， 對工作人員技術要求低，優點是加入同位素稀釋劑達到平衡W后的實驗處理過程中的損失 對分析結果無影響，該法由于是根據同位素比值的測定來求含量，而比值的測定很少受到 基本效應和儀器條件變化的影響，因而該法是一種準確度和精度高的方法，比IFCC推薦的 質譜的方法更加準確、精密，具有良好的特異性和靈敏度，有望成為糖化血紅蛋白測定的決 定性參考方法。
【附圖說明】
[0065] 圖1為利用同位素稀釋液相色譜串聯質譜法測定糖化血紅蛋白色譜圖的提取。 其中，A表示同位素稀釋法化A0的色譜峰（質荷比為348. 2,峰面積為7. 92e+006counts， 峰高為3. 94e+006cps，保留時間為2. 49min) ;B表示同位素稀釋法化Ale的色譜峰（質荷 比為 429. 2,峰面積為 6. 53e+005counts，峰高為 2. 19e+005cps，保留時間為 2. 49min); C表示同位素稀釋法穩定同位素"N-冊A〇-"C的色譜峰（質荷比為351. 7，峰面積為 1. 95e+005counts,峰高為9. 89e+004cps,保留時間為2. 49min) ;D表示同位素稀釋法穩 定同位素"N-冊Aic-"C的色譜峰（質荷比為432. 7,峰面積為2. 38e+005counts，峰高為 9. 75e+004cps，保留時間為2. 49min)。A-D中，橫坐標為對應質荷比的出峰時間；縱坐標為 對應質荷比的相對豐度。
[0066] 圖2為利用同位素稀釋液相色譜串聯質譜法測定糖化血紅蛋白的標準曲線。
【具體實施方式】
[0067] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0068] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0069]儀器：
[0070] l.Milli-Q凈化水裝置，密理博中國有限公司。用于實驗室去離子水的制備。
[0071] 2.瑞±梅特勒十萬分之一天平。用于標準物質、膽備液、血清樣品的準確加入；容 量瓶等的內校。北京市計量局每年一次強檢，每天使用前自檢。
[0072] 3.Eppendcxrfreference移液器。每年送生產廠家校準1次，每月1次內校。
[007引 4.液相色譜串聯質譜儀具體為AB公司的生產的API3200。
[0074] 5.ZLNS-1真空離必壓縮機，上海青浦儀表廠。
[00巧]6.MICR017R低溫高速離必機，ThermoScinetific公司。
[0076] 7.P服-3EPH計，上海精科儀表廠。
[0077] 8.所有玻璃器皿：如移液管；容量瓶等均符合國家A級標準。所有與試劑、水、稀 釋液或樣本接觸的玻璃或塑料表面做如下清洗：
[0078] (1)使用常規清洗程序（含去污劑的熱水浸泡，自來水沖洗）。
[007引 似在30 %硝酸中浸泡過夜，自來水沖洗。
[0080] (3)去離子水沖洗5~6min。
[0081] (4)無塵環境中倒置自然干燥。
[00礎 試劑：
[008引 1.用于清潔及除鹽的oasis HLB固相萃取柱，購買自沃特世waters公司。
[0084]2.國際有證標準物質IRMM/IFCC467化bAO)，購買自比利時的參考物質與測量研 究所（Insti1:uteforReferenceMaterialsandMeasurements,IRMM)。隨產品附帶的國 際認定證書中記載；國際有證標準物質IRMM/IFCC467化bAO,非糖化血紅蛋白）的純度為 > 99% (實際使用時可按純品計算），化A0濃度為〉976mmol/mol(即將該物質折合成血紅 蛋白后，可折合成Imol血紅蛋白的該物質中，平均含有可W折合成〉976mmol血紅蛋白的 HbAO,W及可W折合成<24mmol血紅蛋白的HbAj，IRMM/IFCC466HbAi。標準物質總血紅蛋 白119. 7 + 3. 7mg/g(即Ig該物質折合成血紅蛋白后的質量為119. 7mg)。在下述實施例中， IRMM/IFCC467均按照純品計算。
[0085] 3.中華人民共和國國家一級糖化血紅蛋白標準物質（GBW09181，GBW09182， GBW09183)，購自衛生部臨床檢驗中必。隨產品附帶的認定證書中記載；GBW0181中化Ai。認 定值為38. 42 + 1. 6mmol/mol(即將該物質折合成血紅蛋白后，可折合成Imol血紅蛋白的 該物質中，平均含有可W折合成38. 42mmol血紅蛋白的化Ai。，W及可W折合成961. 58mmol 血紅蛋白的化AO) ;GBW0182中化Ale的認定值為52. 68 + 2. 2mmol/mol(即將該物質折合 成血紅蛋白后，可折合成Imol血紅蛋白的該物質中，平均含有可W折合成52. 68mmol血紅 蛋白的化Ale,W及可W折合成947. 32mmol血紅蛋白的化A0) ;GBW09183中化Ale的認定值 88. 74 + 3. 65mmol/mol(即將該物質折合成血紅蛋白后，可折合成Imol血紅蛋白的該物質 中，平均含有可W折合成88. 74mmol血紅蛋白的化Ai。，W及可W折合成911. 26mmol血紅蛋 白的化A0)。對于GBW09181、GBW09182和GBW09183，"化Ale折合成血紅蛋白的質量/OlbAic折 合成血紅蛋白的質量+冊A0折合成血紅蛋白的質量）X100% "依次為3. 842% (GBW09181)、 5.268% (GBW09182).8. 874% (GBW09183) 〇
[008引 4.胞內蛋白酶（endoproteinaseGLU-C)為測序等級，購自羅氏診斷，其產品目錄 號為EC3. 4. 21. 19。
[0087]5.超純去離子水18. 2MΩ.cm)，要有充足的水，足夠用于試劑溶液配置和對所 有玻璃器具的沖洗。
[0088] 6.有機化學試劑均為HPLC等級，購自默克公司；
[0089] 下述實施例中標準物質的運輸、保存和使用嚴格按照產品說明書所列要求進行。 用干冰包裝運輸，-2(TC膽存條件下可W保存一周，長時間膽存須置于-7(TCW下。分析時 按說明書要求于室溫解凍，取樣前緩慢顛倒至少5次。打開后盡快使用。
[0090] 下述實施