發生特異性反應，生成金納米顆 粒-兔抗人IgM抗體-特異性的IgM抗體復合物，當樣品繼續移動到Tl~T9線時，其中有 針對感染的病原體的特異性IgM抗體會和相應的病原體的抗原發生特異性反應并被其捕 獲，形成抗原-特異性IgM抗體-兔抗人IgM抗體-膠體金的復合物，因此在該測試線處形 成一條紅色條帶，樣品繼續移動到C線處時，多余的會被二抗捕獲，因而在C線處形成一條 紅色條帶。C線顯色證明該測試的有效性，C線不顯色則視為測試無效，需重新檢測。
[0022] 本發明還提供了上述膠體金試紙條的制備方法，該方法包括以下步驟：
[0023] (1)處理兔抗人IgM抗體：取200 μ g兔抗人IgM抗體置于透析袋中對5mM Tris-HCl進行透析24h，期間每隔2h換一次水；透析完成后，將抗原取出置于離心管中，加 入三蒸水至2mL，離心后棄去沉淀雜質，得到經處理的兔抗人IgM抗體。
[0024] (2)采用檸檬酸鈉還原氯金酸法制備膠體金溶液：向燒杯中加入1000 mL三蒸水， 然后加入IOmL的1質量％的檸檬酸鈉溶液，加熱至沸騰后，再加入15mL 1質量％的氯金 酸溶液，煮沸15min后至冷卻，置于4°C保存，得到膠體金溶液，其中金顆粒直徑約為30~ 40nm ;優選地，該步驟中使用的玻璃儀器事先用洗液過夜浸泡，然后沖洗干凈。
[0025] (3)制備結合物墊：取步驟（2)制備的膠體金溶液20mL置于燒杯中，加入150 μ L 0.說的1(20)3溶液調節溶液的pH至7. 0,攪拌均勻，然后加入步驟（1)的經處理的兔抗人IgM 抗體，攪拌20min，然后加入2mL10質量％的牛血清白蛋白（BSA)溶液，進行離心，離心時間 40Min，轉速為lOOOOrpm，然后棄去上清液，再加入1質量％的BSA溶液繼續離心，棄去上清 液，對沉淀物進行恢復，恢復液的成分為：1質量％的BSA，0. 5質量％的蔗糖，0. 5質量％的 酪蛋白鈉，將其涂覆在200平方厘米大小的玻璃纖維膜上面，-45°C冷凍后，作為結合物墊 凍干備用；優選地，所述結合物墊在凍干后在室溫下避光保存備用。
[0026] (4)組裝試紙：將樣品墊、步驟（3)制備的結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊順次 彼此鄰接地貼附在聚氯乙烯底板上，得到組裝試紙；優選地，相鄰部分重疊1mm，使得液體 樣本能夠順利流動到吸水墊或吸水紙的方向。
[0027] (5)包被硝酸纖維素膜：使用劃膜儀將肺炎支原體重組抗原溶液、肺炎衣原體重 組抗原溶液、甲型流感病毒抗原溶液、乙型流感病毒抗原溶液、副流感病毒抗原溶液、嗜肺 軍團菌抗原溶液、Q熱立克次體抗原溶液、呼吸道合胞病毒抗原溶液、腺病毒抗原溶液和二 抗溶液分別包被在步驟（4)的組裝試紙的硝酸纖維素膜上作為9條檢測線和1條質控線。
[0028] (6)將步驟（5)處理后的組裝試紙切割為寬度3~5mm，優選4mm的試紙條，即得 到所述膠體金試紙條。
[0029] 根據本發明的制備方法，其中，在步驟（5)中，所述肺炎支原體重組抗原的溶液、 肺炎衣原體重組抗原溶液、甲型流感病毒抗原溶液、乙型流感病毒抗原溶液、副流感病毒抗 原溶液、嗜肺軍團菌抗原溶液、Q熱立克次體抗原溶液、呼吸道合胞病毒抗原溶液和腺病毒 抗原溶液的濃度均為〇. 5mg/mL，所述二抗溶液的濃度為0. 3mg/mL ;優選地，所述劃膜儀的 設定參數為：所述檢測線和質控線的各相鄰線的間隔為3~4mm，優選為3mm ;劃線濃度均 為I yL/cm ;更優選地，所述劃膜儀為三維平面劃膜儀。
[0030] 本發明還提供了一種檢測IgM抗體的膠體金試紙卡，所述IgM抗體為九項呼吸道 感染病原體特異性IgM抗體，所述膠體金試紙卡包括殼體和位于所述殼體中的本發明的膠 體金試紙條或按照本發明的上述方法制備的膠體金試紙條，所述殼體上設置有加樣孔和顯 色觀察窗，所述加樣孔對準所述樣品墊的位置，所述顯色觀察窗對準所述包被有9條檢測 線和1條質控線的硝酸纖維素膜的位置。
[0031] 該膠體金試紙卡的制備方法可以為：（1)制備或購買所述殼體；(2)將本發明的膠 體金試紙條裝入所述殼體內，使加樣孔對準樣品墊的位置，顯色觀察窗對準硝酸纖維素膜 的位置，以便觀察各檢測線和質控線的顯色狀態。
[0032] 本發明還提供了一種檢測IgM抗體的膠體金試劑盒，所述IgM抗體為九項呼吸道 感染病原體特異性IgM抗體，所述膠體金試劑盒包括鋁箱袋和密封在所述鋁箱袋中的干燥 劑、滴管以及本發明的膠體金試紙條或按照本發明的上述方法制備的膠體金試紙條或本發 明的膠體金試紙卡。
[0033] 該膠體金試劑盒的制備方法可以為：將本發明的膠體金試紙條或膠體金試紙卡裝 在鋁箱袋中，再裝入干燥劑和滴管，進行密封并在室溫下保存。
[0034] 本發明還提供了使用本發明的膠體金試紙條或按照本發明的上述方法制備的膠 體金試紙條或本發明的膠體金試紙卡或本發明的膠體金試劑盒進行檢測的方法，該方法包 括以下步驟：
[0035] (1)收集待測樣品：待測樣品為全血或血清；其中，當血清存在渾濁時，對其進行 高速離心并去除渾濁的雜質；
[0036] (2)將膠體金試紙條或膠體金試紙卡平放在檢測臺面上，將步驟（1)的血清10倍 稀釋后滴加在樣品墊上，在10~20分鐘內，優選10~15分鐘內，進一步優選在15分鐘時 觀察檢測線和質控線的顯色結果；20分鐘后的顯色結果和/或質控線未顯示紅色條帶，視 為檢測結果無效，需重新檢測；
[0037] (3)根據下表判斷待測樣品中九項呼吸道感染病原體特異性IgM抗體的情況，其 中" + "表示顯示紅色條帶，表示未顯示紅色條帶：
[0039]
[0040] 本發明的發明人將膠體金免疫層析技術和間接免疫法原理相結合，將測試線包被 九項呼吸道病原體所相應的重組抗原，通過免疫間接法原理，一步法就能夠快速檢測出樣 本中是否有九項呼吸道病原體相應的特異性的IgM抗體。到目前為止，沒有關于九項呼吸 道病原體特異性IgM抗體通過膠體金試紙條快速檢測的試劑盒。盡管安圖生物公司可以實 現同時檢測，但是耗時很長，大于3個小時。更具體地，本發明所提供的膠體金試紙條及相 關的試紙卡和試劑盒、制備方法和檢測方法相對于現有技術可具有下列優勢：
[0041] (1)檢測速度快、效率高。一般在10~15分鐘內即可讀取顯色結果并進行判斷， 不需要額外的樣品培養時間或反應時間。
[0042] (2)特異性強、符合率高。膠體金試紙條上的9條檢測線可以針對性地分別檢測可 能存在的九項呼吸道病原體的特異性IgM抗體，并通過可目視的顯色（例如顯紅色或不顯 色）來體現特異性IgM抗體的陰性或陽性。根據本發明對實際樣品的檢測結果來看，其對 九項呼吸道感染病原體特異性IgM抗體的檢測符合率均在95%以上。
[0043] (3)操作簡單，價格低廉，不需要專業技術人員或大型儀器設備即可實施檢測，尤 其適合在偏遠貧困地區使用。
[0044] (4)可適用于早期診斷，通過肉眼即可讀出檢測結果，從而獲取更多的相關信息， 輔助臨床醫生給予正確的醫療診斷等，早發現、早診斷、早治療、早痊愈，具有重要的臨床意 義。
【附圖說明】
[0045] 以下，結合附圖來詳細說明本發明的實施方案，其中：
[0046] 圖1示出了本發明的檢測IgM