檢測IgM抗體的膠體金試紙條及試紙卡、制備和檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種試紙條，具體涉及一種檢測九項呼吸道感染病原體特異性IgM抗 體的膠體金試紙條，以及包括該膠體金試紙條的膠體金試紙卡及膠體金試劑盒，該膠體金 試紙條的制備方法，和使用該膠體金試紙條、膠體金試紙卡或膠體金試劑盒進行檢測的方 法。
【背景技術】
[0002] 目前通過免疫熒光試劑盒檢測樣品中的九項呼吸道病原體的特異性IgM抗體是 一種成熟的技術，但是所需時間較長。例如，安圖生物公司九項呼吸道感染病原體IgM抗體 檢測試劑盒采用間接免疫熒光法原理，在載玻片上（10孔/片）分別包被：1孔包被嗜肺軍 團菌血清I型，2孔包被McCoy細胞中的肺炎支原體，3孔包被Q熱立克次體II相，4孔包被 肺炎衣原體（原生小體），5孔包被HEp-2細胞中的腺病毒，6孔包被HEp-2細胞中的呼吸道 合胞病毒，7孔包被LLC-MK2細胞中的甲型流感病毒，8孔包被LLC-MK2細胞中的乙型流感 病毒，9孔包被LLC-MK2細胞中的副流感病毒1，2和3型，10孔為質控孔。除嗜肺軍團菌， 載玻片中所有抗原都是從細胞培養物中獲得。簡單步驟為：稀釋血清樣本（5min)-加入抗 人IgG吸附劑處理血清樣本，并離心，（20min)-在載玻片中加入所檢測血清樣本，并37°C 孵育90min -清洗并晾干15min -加兔抗人IgM-FITC結合物，并7°C孵育30min -清洗并 瞭干15min-加入封閉介質并置于顯微鏡下觀察結果15min，所以檢測時間需要約3小時以 上。
[0003] 現有技術中還有其他的檢測呼吸道病原體的試劑盒，但這些試劑盒及相關檢測方 法常需要擴增樣品的核酸片段，有的需培養或制備相應的探針溶液，有的還需使用大型儀 器設備，如質譜儀、GeXP遺傳分析儀等進行檢測。這會付出額外的培養時間和反應時間，并 且要求有專業人員和昂貴的專業設備相配合才能得以實施，因而檢測成本高且效率較低。
[0004] 膠體金試紙條作為一種快速現場檢測技術，操作簡便，一般15分鐘內即可肉眼讀 出結果。然而，目前還未見在一個膠體金試紙條上同時檢測九項呼吸道病原體的特異性IgM 抗體的報道。
【發明內容】
[0005] 因此，本發明的目的在于克服現有技術中的上述缺陷，提供了一種特異性強、檢測 便捷、價格低廉的檢測九項呼吸道感染病原體特異性IgM抗體的膠體金試紙條，還提供了 包括該膠體金試紙條的膠體金試紙卡及膠體金試劑盒，以及該膠體金試紙條的制備方法和 使用該膠體金試紙條、試紙卡或試劑盒進行檢測的方法。
[0006] 為實現上述目的，本發明提供了一種檢測IgM抗體的膠體金試紙條，所述IgM抗 體為九項呼吸道感染病原體特異性IgM抗體，所述膠體金試紙條包括在聚氯乙烯（PVC)底 板上依次貼附的樣品墊、結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；所述結合物墊為包覆有兔抗人 IgM抗體-膠體金結合物的玻璃纖維膜；所述硝酸纖維素膜依次包被有9條檢測線和1條 質控線，所述9條檢測線分別為肺炎支原體重組抗原、肺炎衣原體重組抗原、甲型流感病毒 抗原、乙型流感病毒抗原、副流感病毒抗原、嗜肺軍團菌抗原、Q熱立克次體抗原、呼吸道合 胞病毒抗原和腺病毒抗原（下文中可分別簡稱為Tl~T9線），所述質控線為二抗（下文中 可簡稱為C線）。以上9條檢測線可以以任意順序排列而不影響檢測結果。
[0007] 本發明涉及的呼吸道感染病原體的相關介紹如下：
[0008] 肺炎支原體：肺炎支原體引起的肺炎在兒童和青少年中最為常見，可在呼吸道粘 膜上皮內潛伏，部分患者無明顯癥狀，但大部分患者為顯性感染，在3歲以下兒童呼吸道感 染多見，成人以肺炎表現為主。肺炎支原體肺炎潛伏期為14~21天，起病緩慢，IgM抗體 一般在感染后1周出現，3~4周達高峰期，可持續3~6個月。
[0009] 肺炎衣原體：肺炎衣原體極易造成呼吸系統感染，特別是支氣管炎和肺炎，在老年 人中發病率較高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%，肺炎衣原體所感染所致的肺炎， 癥狀和體征無特異性，多數起病緩慢，潛伏期一般為30天左右，IgM抗體在發病2~3周出 現，一般來說可持續存在2~6個月。
[0010] 流感病毒：它是流感的病原體，在具有潛在病理學的患者中會產生嚴重的并發癥。 由于它易與其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期間臨床診斷很困難，因此實驗室診斷顯得 非常重要。流感病毒感染的潛伏期一般為1~7天，IgM抗體在發病1周左右出現，可持續 2~3個月。
[0011]副流感：副流感病毒在2~4歲兒童中能引起喉氣管支氣管炎，潛伏期一般為2~ 7天，IgM抗體在發病1周左右出現，可持續2~3個月。
[0012] 嗜肺軍團菌：人最易感染嗜肺軍團菌1型，非典型性肺炎常伴隨有全身癥狀。10% 的肺炎是由嗜肺軍團菌1型所引起的，潛伏期一般為2~10天，IgM抗體存在感染后1周 出現，并可持續3~6個月。
[0013] Q熱立克次體：Q熱是由Q熱立克次體引起的全身疾病，會造成發熱，非典型肺炎， 肝炎或者心內膜炎，潛伏期為2~38天，通常為12~19天，IgM抗體一般在感染后2周出 現，4~8周達高峰，可持續存在3~4個月。
[0014] 呼吸道合胞病毒：是兩歲以下幼兒呼吸道感染的主要病原體，在冬季爆發流行。潛 伏期為3~7天，IgM抗體在發病1周左右出現。
[0015] 腺病毒：腺病毒是一種重要的呼吸道病原體，能引起上呼吸道疾病，伴隨有急驟發 熱和輕度呼吸道感染。腺病毒感染的潛伏期為2~14天，IgM抗體在發病1周左右出現。 可持續2~3個月。
[0016] 免疫球蛋白M(IgM)是人類或者動物體內最重要的一種免疫球蛋白。當機體感染 病原體后，在體內，最早出現的是該病原體的特異性的IgM抗體，之后IgM濃度降低，特異性 的IgG抗體升高。因此，通過檢測機體內病原體特異性的IgM抗體的存在與否，可以診斷人 或者動物對該病原體是否有早期感染的可能。血清內若檢測出病原體的特異性的IgM抗 體，證明該機體有近期感染的發生，如果能夠實現早診斷、早診療，無疑對臨床醫生和患者 都是具有重要的意義。
[0017] 根據本發明的膠體金試紙條，其中，所述樣品墊為玻璃纖維膜。優選地，所述吸水 墊為吸水紙。
[0018] 根據本發明的膠體金試紙條，其中，所述檢測線和質控線的各相鄰線的間隔為 3~4mm，優選為3mm ;優選地，所述膠體金試紙條的寬度為3~5mm，優選為4mm。
[0019] 根據本發明的膠體金試紙條，其中，所述樣品墊與結合物墊之間重疊1~2_，優 選為1mm，所述結合物墊與硝酸纖維素膜之間重疊1~2mm，優選為1mm，所述硝酸纖維素膜 與吸水墊之間重疊1~2mm，優選為1mm 0
[0020] 根據本發明的膠體金試紙條，其中，選用的二抗為羊抗兔IgG抗體。
[0021] 該膠體金試紙條的檢測原理大體為：在樣品墊滴加入待測樣品后，通過毛細作用， 待測樣品將結合物墊中的兔抗人IgM抗體-膠體金結合物溶解釋放出來并向吸水墊一端 的方向移動。如果被檢測樣品中含有針對肺炎支原體、衣原體、甲型流感、乙型流感、副流 感、嗜肺軍團菌、Q熱立克次體、呼吸道合胞病毒、腺病毒中的任何一種或者多種病原體對應 的特異性的IgM抗體，則與金納米顆粒-兔抗人IgM抗體