池B (17)，通過預混合通道(18)混合均勻，如圖4所示。
[0026]本發明采用的標記方法包含化學交聯或生物分子間特異性作用將抗BNP抗體連接到酶或磁顆粒表面，得到抗體標記的酶或抗體標記的磁顆粒。
[0027]本發明中所述化學交聯為:當磁顆粒或酶表面有活性基團，可與抗體或質控分子直接反應時，不需用化學交聯劑，反之用化學交聯劑把抗體修飾到磁顆粒表面或酶上。
[0028]在本發明的實施例中采用化學交聯法對磁顆粒或酶進行抗體修飾的方法為:利用1-乙基-3-(3- 二甲基胺丙基)碳化二亞胺(EDC)/N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、戊二醛等交聯劑將磁顆粒表面的官能團(如羧基、氨基)與抗體表面的官能團(如氨基、羧基、醛基等)連接。
[0029]作為優選，在本發明的一個實施例中，采用EDC/NHS交聯法對磁顆粒進行修飾，一般步驟為:將磁顆粒溶液與EDC和NHS混合，然后加入一定量的抗體，以緩沖液為反應介質，反應充分后加入L-甘氨酸封閉，磁鐵吸附富集純化，從而得到抗體修飾的磁顆粒。
[0030]本發明中所述生物分子間特異性作用包括生物素-親和素系統和抗原-抗體系統。作為優選，在本發明的另一個實施例中，采用生物素-親和素系統結合方式對BNP抗體進行磁顆粒修飾，該結合方式具有放大信號的作用，具體為:以EDC將鏈霉親和素連接到磁顆粒表面，生物素連接到蛋白質分子表面，通過親和素-生物素間的相互作用，把蛋白質分子連接到磁顆粒表面。
[0031]本發明的BNP抗體包含單克隆抗體和多克隆抗體。該抗體可與BNP結合。其中酶或發光劑標記的抗體與磁顆粒標記的抗體可相同或不同。
[0032]本發明的酶或發光劑標記抗體溶液和磁顆粒標記抗體溶液均包含緩沖液、蛋白質、表面活性劑和防腐劑，且磁顆粒標記抗體溶液還包含糖類。其中HRP標記的配體，緩沖體系中不能含有NaN35ALP標記配體，緩沖體系不能是磷酸體系。
[0033]本發明的微流控芯片如圖2所示，微流控芯片由頂部膠帶(12)、芯片基板(I)和底部膠帶(15)構成，其中芯片基板成型材料為聚合物，包含但不限于聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、環氧樹脂等。如圖1所述，芯片基板包含過濾區(2)、磁顆粒標記BNP抗體包被區
(3)、標記BNP抗體存儲池(4)、反應區(5)、清洗區(6)、檢測區(7)、液體釋放通道(8)、清洗液存儲池(9)、發光基底液存儲池(10)和廢液池(11)。
[0034]本發明的存儲池為液體密封池，所用密封材料包含玻璃、塑料、橡膠、鋁箔和高阻隔薄膜，其中密封材料可為同種材料組成，也可為多種材料組合而成。在物理擠壓下，存儲池可局部破裂，從而把密封的液體釋放出來。其中酶標配體存儲池、清洗液存儲池、發光基底液存儲池可采用相同或不同材料和方法制作。在本發明的一個實施例中，酶標配體存儲池、清洗液存儲池、發光基底液存儲池均采用塑料和彈性橡膠密封而成。本發明的另一個實施例中，酶標配體存儲池采用塑料和彈性橡膠密封而成，而清洗液存儲池、發光基底液存儲池采用高阻隔薄膜密封而成。
[0035]本發明的過濾區包含濾血膜，其中濾血膜可通過物理孔徑或生物/化學試劑使液體與細胞分離，實現血漿與紅細胞分離，血漿流到磁顆粒包被區，而紅細胞停留在濾血膜上，從而減少紅細胞對試驗結果的干擾。其中所述生物/化學試劑包含凝血劑等，可使紅細胞間連接，形成凝塊，增大尺寸，更容易被濾血膜的網狀結構阻擋。
[0036]本發明的微流控芯片，當存在發光基底液存儲池A(16)和發光基底液存儲池B (17)，應在底板上增加發光基底液預混合通道(18)，該預混合通道可為蛇形通道或上下結構混合通道，如圖4所示。
[0037]本發明的微流控芯片，當發光基底液由發光底物和發光增強液組成，且不能混合并并長時間保存時，可分別注入水泡中，并在底板上增加發光底物液和發光增強液預混合通道(18)，該預混合通道可為蛇形通道或上下結構混合通道，如圖4所示。
[0038]本發明的清洗液，用于清洗磁顆粒，去除非特異性吸附的BNP、酶標記物及其他影響檢測結果的物質。清洗液主要包含緩沖體系、蛋白質和表面活性劑，其中緩沖體系包含但不限于硼酸鹽、磷酸鹽、Tris-HCl和醋酸鹽等。清洗液pH 6.0?10.0，當檢測樣本為強酸或強堿性時，PH范圍可放寬。其中蛋白質包含但不限于牛血清白蛋白、酪蛋白等。其中表面活性包含但不限于可包括吐溫20、吐溫80、曲拉通X-100、聚乙二醇和聚乙烯基吡咯烷酮等。
[0039]作為優選，本發明一個實施例中，清洗液為包含牛血清白蛋白、曲拉通X-100和Proclin300的pH7.0硼酸緩沖液。另一個實施例中，清洗液為牛血清白蛋白、吐溫20、曲拉通X-100和Proclin300的ρΗ7.4磷酸鹽緩沖液。
[0040]在一個實施例中，標記BNP抗體存儲池(4)封入HRP標記抗體，包被區包被磁顆粒標記抗體，以酶促化學發光法檢測ΒΝΡ。另一個實施例中，標記BNP抗體存儲池(4)封入吖啶酯標記抗體，包被區包被磁顆粒標記抗體，以直接化學發光法檢測ΒΝΡ。
[0041]本發明的微流控芯片為快速檢測，檢測時間應小于30分鐘，作為優選，實施例中采用15分鐘。
[0042]本發明的抗體儀器包含擠壓氣栗、存儲池和水泡，磁鐵移動，發光檢測系統等功能，應可包含擠壓裝置、磁鐵及移動裝置、檢測系統、控制分析模塊和軟件系統。
[0043]本發明所述微流控芯片按照以下方法制備:
[0044]步驟I)酶或發光劑標記抗BNP抗體，磁顆粒標記抗BNP抗體，這兩種抗體可相同或不同；
[0045]步驟2)將酶或發光劑標記BNP抗體溶液放入標記BNP抗體存儲池中，密封，將磁顆粒標記BNP抗體溶液放入磁顆粒標記BNP抗體包被區中，干燥，將清洗液和發光基底液分別注入清洗液存儲池和發光基底液存儲池中，密封，組裝成微流控芯片。
[0046]本發明涉及一種定量檢測全血中腦鈉肽的磁微粒化學發光微流控芯片，其測試流程包括:
[0047]步驟I)將微流控芯片放入配套儀器，把全血樣本滴入加樣口(13)后，開始測試，樣本經過濾區后，到達包被區，溶解磁顆粒標記配體，磁鐵加速樣本中分析物與磁顆粒標記配體反應，磁鐵收集磁顆粒，標記抗體存儲池釋放溶液，磁鐵將磁顆粒移至反應區，磁鐵攪拌加速反應，充分反應后收集磁顆粒；
[0048]步驟2)清洗液存儲池釋放溶液，磁顆粒清洗后，被移至檢測區，發光基底液存儲池釋放溶液，檢測區產生化學發光信號，儀器檢測系統檢測發光信號強度，進而實現分析物的定量檢測。
[0049]本發明可廣泛應用于病原體、重大疾病(如腫瘤、心血管疾病等)、違禁藥品、毒品檢測、食品安全等多種BNP的定量檢測。
[0050]本發明的核心是采用磁微粒化學發光免疫檢測技術在微流控芯片實現全血中BNP的快速、高靈敏度、準確定量檢測。
[0051]微流控芯片技術是把生物、化學、醫學分析過程的樣品制備、反應、分離、檢測等基本操作單元集成到一塊微米尺度的芯片上，自動完成分析全過程。
[0052]本發明在微流控芯片將檢測過程所需的所有試劑組分(酶標抗體、磁顆粒標記抗體、清洗液、發光基底液等)均集成、內置到微流控芯片中，并通過巧妙溝道設計，在配套儀器的操作下，實現微流控芯片的一鍵式檢測(只需按開始鍵就能實現檢測，無需復雜操作)，實現全血分離、免疫反應、清洗分離、化學發光檢測，從而避免了現有微流控芯片中結構設計簡單、檢測時操作復雜等不足和缺陷。還克服了傳統化學發光儀只能進行血清或血漿檢測，而不能對全血樣本進行檢測的缺點。
[0053]由于磁顆粒易沉淀，傳統化學發光儀采用手工混合，并以持續振蕩維持磁顆粒的懸浮狀態，但微流控芯片內磁顆粒混均操作難以在小型便攜儀器中實現。
[0054]本發明將磁顆粒包被、干燥于微流控芯片溝道中，并設計了磁鐵主動驅動磁顆粒(而傳統微流控芯片一般采用流體驅動或電驅動)，從而使磁顆粒復溶，并在微流控芯片不同區域實現免疫反應、清洗、發光。此設計不僅解決了磁顆粒應用于微流控芯片時易沉淀、重復性差等問題，還實現了更可控的免疫反應和物理清洗，提高了靈敏度和重復性。其中磁鐵磁性和磁顆粒尺寸對檢測效果了明顯影響，本發明選擇磁鐵磁感應強度為500?30000高斯，優選1000-8000高斯；磁顆粒尺寸為0