無需配制，直接開封啟用；所述的Et試劑為膽堿酯酶和5, 5'-二硫代雙（2-硝 基苯甲酸）的混合液，兩者的重量比為1 : 0.002。
[0019] Sub試劑：在10 mL蒸餾水中加入10-60mg碘化硫代乙酰膽堿，搖勾使之溶解； 農藥提取液：在20-80mL磷酸鹽或碳酸鹽緩沖溶液中加入50-300mL丙三醇，混勻后再 加入100-300mL95wt. %乙醇溶液，混勻； 緩沖液：在500mL蒸餾水中加入5-15g磷酸氫二鈉和0. 2-0. 8g磷酸二氫鉀，混勻； (2) 檢測 樣品提取： 稱取0. 5克茶葉樣品，加入1.0 mL農藥提取液，使樣品充分浸潤并靜置10分鐘，底部溶 液即為待測液； 對照測定： 吸取Et試劑100 μ L，加入I. 5mL緩沖液，搖勻，加入200 μ L農藥提取液，搖勻，靜置10 分鐘，加入100 μ L Sub試劑，搖勻后移入0. 5cm比色皿，及時在農藥殘留測試儀上進行對照 測試； 樣品測定： 吸取Et試劑100 μ L，加入I. 5mL緩沖液，搖勻，加入200 μ L待測液，搖勻，靜置10分 鐘，加入100 μ LSub試劑，搖勻后移入0. 5cm比色皿，及時在農藥殘留測試儀上進行樣品測 試； 測定結果的判定： 當檢測結果的酶抑制率讀數超過50%時，表明樣品農藥殘留毒性可能超過安全標準， 應當確認操作步驟無誤、儀器工作正常、試劑沒有污染失效，重新進行對照測試并對此樣品 進行2次以上的重復檢測，如檢測結果重復并仍然超過50%，則需用氣相色譜作進一步的確 認。
[0020] 實施例1 一種茶葉或茶青中農藥殘留的檢測方法，茶葉或茶青中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘 留的檢測步驟： (1) 試劑的配制： Et試劑：2mg (或Iku)膽堿酯酶溶解于500ml磷酸鹽緩沖溶液(稱取磷酸氫二鈉5~15g 和磷酸二氫鉀0. 2~0. 9g于試劑瓶中加入500mL蒸餾水溶解，混勾；）中，加入2~IOg牛 血清白蛋白和3~15g海藻糖攪拌溶解；另稱取80~200mg的DTNB和0. 5~5g的牛磺膽 酸鈉加入，并攪拌至完全溶解后即成為Et試劑，將其封裝在5ml的安瓿中并置于冰箱（0~ 5°C)保存。使用時取出開封即可。
[0021] Sub試劑：在10 mL蒸餾水中加入30mg碘化硫代乙酰膽堿，搖勻使之溶解； 農藥提取液：在50mL磷酸鹽或碳酸鹽緩沖溶液中加入200mL丙三醇，混勻后再加入 200mL95%乙醇溶液，混勻； 緩沖液：在500mL蒸餾水中加入IOg磷酸氫二鈉和0. 5g磷酸二氫鉀，混勻； (2) 檢測 樣品提取： 稱取0. 5克茶葉樣品，加入1.0 mL農藥提取液，使樣品充分浸潤并靜置10分鐘，底部溶 液即為待測液； 對照測定： 吸取Et試劑100 μ L，加入I. 5mL緩沖液，搖勻，加入200 μ L農藥提取液，搖勻，靜置10 分鐘，加入100 μ L Sub試劑，搖勻后移入0. 5cm比色皿，及時在農藥殘留測試儀上進行對照 測試； 樣品測定： 吸取Et試劑100 μ L，加入I. 5mL緩沖液，搖勻，加入200 μ L待測液，搖勻，靜置10分 鐘，加入100 μ LSub試劑，搖勻后移入0. 5cm比色皿，及時在農藥殘留測試儀上進行樣品測 試； 測定結果的判定： 當檢測結果的酶抑制率讀數超過50%時，表明樣品農藥殘留毒性可能超過安全標準， 應當確認操作步驟無誤、儀器工作正常、試劑沒有污染失效，重新進行對照測試并對此樣品 進行2次以上的重復檢測，如檢測結果重復并仍然超過50%，則需用氣相色譜作進一步的確 認。
[0022] 應用上述檢測方法，在鐵觀音茶葉和實驗室栽種的無農藥的茶青進行農藥加樣測 定，得到上述方法的不同農藥的檢測靈敏度如下： CN 105181405 A 說明書 5/5 頁
以上所述僅為本發明的較佳實施例，凡依本發明申請專利范圍所做的均等變化與修 飾，皆應屬本發明的涵蓋范圍。
【主權項】
1. 一種茶葉或茶青中農藥殘留的檢測方法，其特征在于：茶葉或茶青中有機磷和氨基 甲酸酯類農藥殘留的檢測步驟： (1) 試劑的配制： Et試劑：無需配制，直接開封啟用； Sub試劑：在10mL蒸餾水中加入10-60mg碘化硫代乙酰膽堿，搖勾使之溶解； 農藥提取液：在20-80mL磷酸鹽或碳酸鹽緩沖溶液中加入50-300mL丙三醇，混勻后再 加入100-300mL95wt. %乙醇溶液，混勻； 緩沖液：在500mL蒸餾水中加入5-15g磷酸氫二鈉和0. 2-0. 8g磷酸二氫鉀，混勻； (2) 檢測 樣品提取： 稱取0. 5克茶葉或茶青樣品，加入I.OmL農藥提取液，使樣品充分浸潤并靜置10分鐘， 底部溶液即為待測液； 對照測定： 吸取Et試劑100yL，加入I. 5mL緩沖液，搖勻，加入200yL農藥提取液，搖勻，靜置10 分鐘，加入100yLSub試劑，搖勻后移入0. 5cm比色皿，放入農藥殘留檢測儀及時進行對照 測試； 樣品測定： 吸取Et試劑100yL，加入I. 5mL緩沖液，搖勻，加入200yL待測液，搖勻，靜置10分 鐘，加入100yLSub試劑，搖勻后移入0. 5cm比色皿，放入農藥殘留檢測儀及時進行樣品測 試； 測定結果的判定： 當檢測結果的酶抑制率讀數超過50%時，表明樣品農藥殘留毒性可能超過安全標準， 應當確認操作步驟無誤、儀器工作正常、試劑沒有污染失效，重新進行對照測試并對此樣品 進行2次以上的重復檢測，如檢測結果重復并仍然超過50%，則需用氣相色譜作進一步的確 認。2. 根據權利要求1所述的茶葉或茶青中農藥殘留的檢測方法，其特征在于：所述的 Et試劑為膽堿酯酶和5, 5'-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）的混合液，兩者的重量比為1 : 40-100〇
【專利摘要】本發明公開了一種茶葉或茶青中農藥殘留的檢測方法，針對茶葉或茶青樣品中的內源物質對測試產生特殊干擾，研發出一種專用于提取茶葉中的殘留農藥的農藥提取試劑，用此試劑提取茶葉中的農藥殘留，無需調節pH﹑過層析柱以及氧化過程，所用試劑安全環保且用量少。首創將膽堿酯酶與DTNB復合成Et試劑，在檢測時直接將其與樣品待測液進行酶抑制反應，使得操作過程中少加一種試劑，檢測方法更加簡便，并減少實驗器材的使用。該方法簡單快速，從樣品處理到報告檢測結果全流程20分鐘，并可實現多通道同時檢測。
【IPC分類】G01N21/01, G01N1/28, G01N30/02
【公開號】CN105181405
【申請號】CN201510422117
【發明人】黃敏, 蔡琪, 劉薇, 張青松
【申請人】福建省測試技術研究所
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年7月18日