一種茶葉或茶青中農藥殘留的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于分析化學領域，具體涉及一種茶葉或茶青中農藥殘留的檢測方法。
【背景技術】
[0002] 目前可查閱的茶葉中的農藥快速檢測方法有以下兩種，但都存在著檢測步驟煩 瑣，耗時長，及所用試劑有毒有害的問題，因此無法在基層實驗室和種植、生產、銷售現場推 廣應用。下面簡單介紹兩種方法的操作步驟加以說明： 1. 2002年發布了一個推薦性國家標準《茶中有機磷及氨基甲酸酯農藥殘留量的簡易 檢驗方法酶抑制法》GB/T18625-2002,但因為茶葉樣品會對測試產生特殊的干擾，分析方 法中仍無法避免冗長繁雜、并且耗費大量有機試劑的提取、凈化等前處理步驟，其分析操作 時間甚至不會少于在實驗室儀器分析方法。因此這個分析方法并不能很好解決實際應用中 的問題。
[0003] 其分析步驟是： (1)樣品提取：〇. 5g茶加5ml丙酮浸泡5分鐘再加0. 2g碳酸鈣。
[0004] (2)氧化：取0. 5mL丙酮提取液于5mL燒杯中，吹干后加入0. 3mL緩沖液溶解。加 入氧化劑(預先配制）〇. lmL，搖勾后放置lOmin，再加入還原劑(預先配制）0. 3mL搖勾。
[0005] (3)酶解：加入酶液(預先制備）0. 2mL搖勾，放置lOmin，再加入底物0. 2mL，顯色 劑(預先配制）〇. lmL，放置5min后測定。
[0006] (4)測定：在分光光度計波長調至600nm測定，當測定值在I. 0以下時，為未檢出。 當測定值在I. 〇~1. 3之間時，為可能檢出，但殘留量較低。當測定值為1. 3以上時，為檢 出。測定值越高，說明農藥殘留量越高。
[0007] 2、另有資料顯示使用農藥速測卡測定茶葉中的農藥殘留 操作作步驟如下： (1)樣品處理 綠茶樣品：取2g綠茶適當剪碎，放入帶蓋瓶中，加入IOmL純凈水，充分搖勻后，靜止 15min〇
[0008] 鐵觀音、茉莉花、烏龍、普洱、紅茶樣品：取2g茶葉適當剪碎，放入帶蓋瓶中，加入 IOmL純凈水，加入5滴試劑A充分搖勻，靜止15min。
[0009] (2)預反應 綠茶樣品：取3mL浸泡液加入反應管中，搖勻；直接過濾(或4000rpm離心3min)，取ImL 濾液或上清液于小燒杯中，用酸性調節劑調節PH值為4~5之間。
[0010] 鐵觀音、茉莉花、烏龍、普洱、紅茶樣品：取3mL浸泡液加入反應管中，搖勻；靜置 3min，取ImL上清液或濾液于小燒杯中，用酸性調節劑調節pH值為4~5之間。
[0011] (3)過柱 先取ImL純凈水加入層析柱中，用針管加壓排空后，再取ImL上述處理液加入層析柱 中，用針管緩慢加壓，（棄去第一滴）收集無色澄清濾液即為待測液。滴2滴（SOul)待測液 于速測卡白色藥片上。
[0012] (4)反應 將速測卡置于40°C恒溫裝置中放置IOmin進行預反應，預反應后恒溫裝置恒溫3min， 使紅色藥片與白色藥片疊合發生反應，根據白色藥片的顏色變化判斷結果。每批測定應設 一個純凈水或蒸餾水的空白對照卡。
[0013] 以上兩種方法在具體操作時步驟煩瑣，國標法使用的試劑繁多，既有有機溶劑，又 有氧化劑和還原劑。許多試劑還須預先配制。而用農藥速測卡時其操作要過濾樣品提取液， 還須用酸調節待測液的PH，并且要經過層析柱處理。因此在實際應用中不能達到快速簡便 的目的。
【發明內容】
[0014] 本發明的目的在于提供一種茶葉或茶青中農藥殘留的檢測方法，針對茶葉或茶青 樣品中的內源物質對測試產生特殊干擾，研發出一種專用于提取茶葉中的殘留農藥的農藥 提取試劑，用此試劑提取茶葉中的農藥殘留，無需調節PH、過層析柱以及氧化過程，所用 試劑安全環保且用量少。首創將膽堿酯酶與DTNB復合成Et試劑，在檢測時直接將其與樣 品待測液進行酶抑制反應，使得操作過程中少加一種試劑，檢測方法更加簡便，并減少實驗 器材的使用。該方法簡單快速，從樣品處理到報告檢測結果全流程20分鐘，并可實現多通 道同時檢測。
[0015] 為實現上述目的，本發明采用如下技術方案： 一種茶葉或茶青中農藥殘留的檢測方法，茶葉或茶青中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘 留的檢測步驟： (1) 試劑的配制： Et試劑：無需配制，直接開封啟用； Sub試劑：在10 mL蒸餾水中加入10-60mg碘化硫代乙酰膽堿，搖勾使之溶解； 農藥提取液：在20-80mL磷酸鹽或碳酸鹽緩沖溶液中加入50-300mL丙三醇，混勻后再 加入100-300mL95wt. %乙醇溶液，混勻； 緩沖液：在500mL蒸餾水中加入5-15g磷酸氫二鈉和0. 2-0. 8g磷酸二氫鉀，混勻； (2) 檢測 樣品提取： 稱取0. 5克茶葉樣品，加入1.0 mL農藥提取液，使樣品充分浸潤并靜置10分鐘，底部溶 液即為待測液； 對照測定： 吸取Et試劑100 μ L，加入I. 5mL緩沖液，搖勻，加入200 μ L農藥提取液，搖勻，靜置10 分鐘，加入100 μ L Sub試劑，搖勻后移入0. 5cm比色皿，及時放在農藥殘留測試儀上進行對 照測試； 樣品測定： 吸取Et試劑100 μ L，加入I. 5mL緩沖液，搖勻，加入200 μ L待測液，搖勻，靜置10分 鐘，加入100 μ LSub試劑，搖勻后移入0. 5cm比色皿，及時放在農藥殘留測試儀上進行樣品 測試； 測定結果的判定： 當檢測結果的酶抑制率讀數超過50%時，表明樣品農藥殘留毒性可能超過安全標準， 應當確認操作步驟無誤、儀器工作正常、試劑沒有污染失效，重新進行對照測試并對此樣品 進行2次以上的重復檢測，如檢測結果重復并仍然超過50%，則需用氣相色譜作進一步的確 認。
[0016] 所述的Et試劑為膽堿酯酶和5, 5'-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）的混合液，兩者的 重量比為1 : 40~100。
[0017] 本發明的顯著優點在于：針對茶葉或茶青樣品中的內源物質對測試產生特殊干 擾，研發出一種專用于提取茶葉中的殘留農藥的農藥提取試劑，用此試劑提取茶葉中的農 藥殘留，無需調節pH、過層析柱以及氧化過程，所用試劑安全環保且用量少。首創將膽堿 酯酶與DTNB復合成Et試劑，在檢測時直接將其與樣品待測液進行酶抑制反應，使得操作過 程中少加一種試劑，檢測方法更加簡便，并減少實驗器材的使用。該方法簡單快速，從樣品 處理到報告檢測結果全流程20分鐘，并可實現多通道同時檢測。以3~8通道為例，每樣品 平均檢測時間只有3-8分鐘。
【具體實施方式】
[0018] -種茶葉或茶青中農藥殘留的檢測方法，茶葉或茶青中有機磷和氨基甲酸酯類農 藥殘留的檢測步驟： (1) 試劑的配制： Et試劑：