9](I)建立標準曲線:
[0080]按照實施例1步驟(I)提供的方法建立標準曲線，區別在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為0.05:10:90，得到線性回歸方程為:IgMw= 7.0584-0.3123t，r = 0.996。
[0081](2)注射用胸腺肽待測樣品檢測:
[0082]將注射用胸腺肽待測樣品加流動相稀釋到lmg/mL，得到待測溶液；所述流動相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為0.05:10:90o
[0083]采用島津1Avp型高效液相色譜儀對所述待測溶液進行高效液相色譜檢測，色譜柱為TSK GEL 2005WX1型凝膠色譜柱，進樣量為20 μ L，柱溫為30 °C，流動相流速為0.7mL/min,檢測波長為214nm，得到注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖，如圖8所示，其中I為核糖核酸酶A的色譜峰，2為胰島素的色譜峰，3為胸腺肽a i的色譜峰，4為生長激素釋放抑制因子的色譜峰。
[0084]根據圖8所示的注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖與步驟(I)得到的標準曲線，得到注射用胸腺肽待測樣品中胸腺肽α ^勺含量為1.012% ;分子量大于10000的雜質的含量為0.210%。
[0085]由圖8可知，色譜圖的分離度按相鄰峰高與峰谷之比計算為10.0,5.0,1.7,22.0，未全部達到法定標準要求的3.0 ;色譜圖的理論板數按核糖核酸酶A計算為2869，低于法定標準要求的5000。
[0086]對比例2
[0087](I)建立標準曲線:
[0088]按照實施例1步驟(I)提供的方法建立標準曲線，區別在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為1.0:10:90，得到線性回歸方程為:IgMw= 6.9207-0.3147t，r = 0.996。
[0089](2)注射用胸腺肽待測樣品檢測:
[0090]將注射用胸腺肽待測樣品加流動相稀釋到lmg/mL，得到待測溶液；所述流動相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為1.0:10:90o
[0091]采用島津1Avp型高效液相色譜儀對所述待測溶液進行高效液相色譜檢測，色譜柱為TSK GEL 2005WX1型凝膠色譜柱，進樣量為20 μ L，柱溫為30 °C，流動相流速為0.7mL/min,檢測波長為214nm，得到注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖，如圖9所示，其中I為核糖核酸酶A的色譜峰，2為胰島素的色譜峰，3為胸腺肽a i的色譜峰，4為生長激素釋放抑制因子的色譜峰。
[0092]根據圖9所示的注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖與步驟(I)得到的標準曲線，得到注射用胸腺肽待測樣品中胸腺肽α ^勺含量為2.010% ;分子量大于10000的雜質的含量為0.224%。
[0093]由圖9可知，色譜圖的分離度按相鄰峰高與峰谷之比計算為6.0,6.5,6.2,5.9，均達到法定標準要求的3.0 ;色譜圖的理論板數按核糖核酸酶A計算為4506，低于法定標準要求的5000。
[0094]對比例3
[0095](I)建立標準曲線:
[0096]按照實施例1步驟(I)提供的方法建立標準曲線，區別在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為1.0:20:80，得到線性回歸方程為:IgMw= 7.7493-0.3533t，r = 0.996。
[0097](2)注射用胸腺肽待測樣品檢測:
[0098]將注射用胸腺肽待測樣品加流動相稀釋到lmg/mL，得到待測溶液；所述流動相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為1.0:20:80o
[0099]采用島津1Avp型高效液相色譜儀對所述待測溶液進行高效液相色譜檢測，色譜柱為TSK GEL 2005WX1型凝膠色譜柱，進樣量為20 μ L，柱溫為30 °C，流動相流速為0.7mL/min，檢測波長為214nm，得到注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖，如圖10所示，其中I為核糖核酸酶A的色譜峰，2為胰島素的色譜峰，3為胸腺肽α:的色譜峰，4為生長激素釋放抑制因子的色譜峰。
[0100]根據圖10所示的注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖與步驟(I)得到的標準曲線，得到注射用胸腺肽待測樣品中胸腺肽α 4勺含量為1.105% ;分子量大于10000的雜質的含量為0.386%。
[0101]由圖10可知，色譜圖的分離度按相鄰峰高與峰谷之比計算為3.2,5.2,5.1,3.1，均達到法定標準要求的3.0 ;色譜圖的理論板數按核糖核酸酶A計算為3207，低于法定標準要求的5000，且峰型較差。
[0102]對比例4
[0103](I)建立標準曲線:
[0104]按照實施例1步驟(I)提供的方法建立標準曲線，區別在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為0.05:15:85，得到線性回歸方程為:IgMw= 6.5862-0.2742t，r = 0.99。
[0105](2)注射用胸腺肽待測樣品檢測:
[0106]將注射用胸腺肽待測樣品加流動相稀釋到lmg/mL，得到待測溶液；所述流動相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為0.05:15:85o
[0107]采用島津1Avp型高效液相色譜儀對所述待測溶液進行高效液相色譜檢測，色譜柱為TSK GEL 2005WX1型凝膠色譜柱，進樣量為20 μ L，柱溫為30 °C，流動相流速為0.7mL/min，檢測波長為214nm，得到注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖，如圖11所示，其中I為核糖核酸酶A的色譜峰，2為胰島素的色譜峰，3為胸腺肽α:的色譜峰，4為生長激素釋放抑制因子的色譜峰。
[0108]根據圖11所示的注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖與步驟(I)得到的標準曲線，得到注射用胸腺肽待測樣品中胸腺肽α 4勺含量為1.025% ;分子量大于10000的雜質的含量為0.235%。
[0109]由圖11可知，色譜圖的分離度按相鄰峰高與峰谷之比計算為4.1,6.0,1.5、10.5，未全部達到法定標準要求的3.0 ;色譜圖的理論板數按核糖核酸酶A計算為2780，低于法定標準要求的5000。
[0110]所公開的實施例的上述說明，使本領域專業技術人員能夠實現或使用本發明。對這些實施例的多種修改對本領域的專業技術人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發明的精神或范圍的情況下，在其它實施例中實現。因此，本發明將不會被限制于本文所示的這些實施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點相一致的最寬的范圍。
【主權項】
1.一種注射用胸腺肽的檢測方法，其特征在于，包括: a)將注射用胸腺肽待測樣品與流動相混合后，進行液相色譜檢測，得到注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖； 所述流動相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為(0.0l ?0.5):20:80 ； b)根據標準樣品溶液液相色譜圖的保留時間與所述標準樣品的分子量關系，建立標準曲線； 根據所述注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖與所述標準曲線，得到注射用胸腺肽待測樣品中有效成分和有害物質的含量。2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為.0.05:20:80ο3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟a)中所述注射用胸腺肽待測樣品與流動相的用量比為(0.5mg?1.5mg) -1mL04.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟a)中所述液相色譜檢測的色譜柱為TSK GEL 2005WX1型凝膠色譜柱。5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟a)中所述液相色譜檢測的流動相流速為 0.5mT,/mi η ?1.0mT,/mi η η6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟a)中所述液相色譜檢測的波長為 200nm ?220nm。7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟a)中所述液相色譜檢測的柱溫為 25Γ ?35Γ。8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟a)中所述液相色譜檢測的進樣量為15 μ L?25 μ L。9.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟b)中所述標準溶液的濃度為.0.5mg/mL ?1.5mg/mL。
【專利摘要】本發明提供了一種注射用胸腺肽的檢測方法，包括：a)將注射用胸腺肽待測樣品與流動相混合后，進行液相色譜檢測，得到注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖；所述流動相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為(0.01～0.5)：20：80；b)根據標準樣品溶液液相色譜圖的保留時間與所述標準樣品的分子量關系，建立標準曲線；根據所述注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖與所述標準曲線，得到注射用胸腺肽待測樣品中有效成分和有害物質的含量。與現有技術相比，本發明提供的檢測方法能夠保證理論板數和分離度均達到法定標準要求，使檢測結果真實可靠。
【IPC分類】G01N30/02, G01N30/06
【公開號】CN105136930
【申請號】CN201510553600
【發明人】劉思川, 逯佩榮, 李佳俐, 周岳梅, 方遠征, 彭朝暉, 廖孝曙, 李全學, 程志鵬, 萬陽浴, 葛均友
【申請人】湖南科倫制藥有限公司
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年9月2日