一種注射用胸腺肽的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及藥品檢測技術領域，更具體地說，是涉及一種注射用胸腺肽的檢測方法。
【背景技術】
[0002]注射用胸腺肽是由動物臟器提取的多組分混合物，用于治療各種原發性或繼發性T細胞缺陷病、某些自身免疫性疾病、各種細胞免疫功能低下的疾病及腫瘤的輔助治療。在注射用胸腺肽中，不僅含有分子量為3108的胸腺肽α:，還含有的分子量大于10000的高分子質量蛋白以及其他復雜成分。其中，胸腺肽Ct1是注射用胸腺肽的主要活性成分，是一種針對T細胞的免疫增強劑；而高分子質量蛋白會引起過敏等安全隱患。因此，為保證藥品的質量、確保臨床用藥的安全性，對注射用胸腺肽進行檢測至關重要。
[0003]目前，《國家藥品標準》第十六冊收載的檢測胸腺肽溶液質量標準采用高效液相色譜法，以核糖核酸酶A (分子量為13700)、胰島素(分子量為5808)、胸腺肽a j (分子量為3108)和生長激素釋放抑制因子(分子量為1521)作為對照品進行檢測。在檢測過程中，為了保證所配置的色譜條件和設定的參數的適用性以及確定分析使用的色譜條件的有效性，需要對理論板數與分離度進行考察。其中，理論板數是以被分析物主峰或規定的色譜峰計算柱效，用來確定色譜峰的尖銳程度，特別在測定微量成分時尤為重要，由于核糖核酸酶A分子量大于10000且在注射用胸腺肽中的含量不超過5%，因此理論板數按核糖核酸酶A計算；而分離度是指注射用胸腺肽中各組分在高效液相色譜法中分離的程度，由于胸腺肽α ,是一種小分子多肽，化學合成的多肽中含有的部分雜質分子結構和化學性質與目標物十分相似，給其分離純化帶來很大困難，因此必須保證被測成分峰與其他色譜峰完全分離。
[0004]但是，按照現彳丁《國家藥品標準》WS1-XG-044-2000 (以下簡稱法定標準)中色譜條件進行檢測，得到的理論板數與分離度均達不到法定標準的要求，從而影響到產品的正常檢測。
【發明內容】
[0005]有鑒于此，本發明提供了一種注射用胸腺肽的檢測方法，本發明提供的檢測方法能夠保證理論板數和分離度均達到法定標準要求，使檢測結果真實可靠。
[0006]本發明提供了一種注射用胸腺肽的檢測方法，包括:
[0007]a)將注射用胸腺肽待測樣品與流動相混合后，進行液相色譜檢測，得到注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖；
[0008]所述流動相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為(0.01 ?0.5):20:80 ；
[0009]b)根據標準樣品溶液液相色譜圖的保留時間與所述標準樣品的分子量關系，建立標準曲線；
[0010]根據所述注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖與所述標準曲線，得到注射用胸腺肽待測樣品中有效成分和有害物質的含量。
[0011]優選的，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為0.05:20:80o
[0012]優選的，步驟a)中所述注射用胸腺肽待測樣品與流動相的用量比為(0.5mg?
1.5mg): ImL0
[0013]優選的，步驟a)中所述液相色譜檢測的色譜柱為TSK GEL 2005WX1型凝膠色譜柱。
[0014]優選的，步驟a)中所述液相色譜檢測的流動相流速為0.5mL/min?1.0mL/min。
[0015]優選的，步驟a)中所述液相色譜檢測的波長為200nm?220nm。
[0016]優選的，步驟a)中所述液相色譜檢測的柱溫為25°C?35°C。
[0017]優選的，步驟a)中所述液相色譜檢測的進樣量為15 μ L?25 μ L。
[0018]優選的，步驟b)中所述標準溶液的濃度為0.5mg/mL?1.5mg/mL。
[0019]本發明提供了一種注射用胸腺肽的檢測方法，包括:a)將注射用胸腺肽待測樣品與流動相混合后，進行液相色譜檢測，得到注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖；所述流動相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為(0.0l?0.5):20:80 ;b)根據標準樣品溶液液相色譜圖的保留時間與所述標準樣品的分子量關系，建立標準曲線；根據所述注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖與所述標準曲線，得到注射用胸腺肽待測樣品中有效成分和有害物質的含量。與現有技術相比，本發明提供的檢測方法能夠保證理論板數和分離度均達到法定標準要求，使檢測結果真實可靠。實驗結果表明，本發明提供的檢測方法的理論板數能夠達到8574，遠高于法定標準的5000，分離度為7.5?22.3，遠高于法定標準要求的3.0。
【附圖說明】
[0020]圖1為實施例1提供的核糖核酸酶A標準樣品溶液的高效液相色譜圖；
[0021]圖2為實施例1提供的膜島素標準樣品溶液的尚效液相色譜圖；
[0022]圖3為實施例1提供的胸腺肽ai標準樣品溶液的高效液相色譜圖；
[0023]圖4為實施例1提供的生長激素釋放抑制因子標準樣品溶液的高效液相色譜圖；
[0024]圖5為實施例1得到的注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖；
[0025]圖6為實施例2得到的注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖；
[0026]圖7為實施例3得到的注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖；
[0027]圖8為對比例I得到的注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖；
[0028]圖9為對比例2得到的注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖；
[0029]圖10為對比例3得到的注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖；
[0030]圖11為對比例4得到的注射用胸腺肽待測樣品的高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0031]下面將結合本發明實施例，對本發明的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0032]本發明提供了一種注射用胸腺肽的檢測方法，包括:
[0033]a)將注射用胸腺肽待測樣品與流動相混合后，進行液相色譜檢測，得到注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖；
[0034]所述流動相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物；所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為(0.01 ?0.5):20:80 ；
[0035]b)根據標準樣品溶液液相色譜圖的保留時間與所述標準樣品的分子量關系，建立標準曲線；
[0036]根據所述注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖與所述標準曲線，得到注射用胸腺肽待測樣品中有效成分和有害物質的含量。
[0037]在本發明中，將注射用胸腺肽待測樣品與流動相混合后，進行液相色譜檢測，得到注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖。本發明對所述注射用胸腺肽的來源沒有特殊限制，采用本領域技術人員熟知的市售商品即可。在本發明中，所述流動相為三氟醋酸、乙腈和水的混合物。本發明采用三元流動相，目的是將注射用胸腺肽中有效成分和雜質進行分離，在此基礎上為提高注射用胸腺肽檢測的準確性，需要對流動相中各組分的比例進行控制，以提高理論板數和分離度，從而提高檢測結果的準確性和可靠性。在本發明中，所述三氟醋酸、乙腈和水的體積比為(0.01?0.5):20:80，優選為為(0.02?0.1):20:80，更優選為為 0.05:20:80o
[0038]在本發明中，將注射用胸腺肽待測樣品與流動相混合，得到待測溶液。在本發明中，所述注射用胸腺肽待測樣品與流動相的用量比優選為(0.5mg?1.5mg):lmL，更優選為Img:lmL。本發明對所述混合的方式沒有特殊限制，采用本領域技術人員熟知的人工攪拌或機械攪拌即可，目的是將注射用胸腺肽待測樣品溶解在所述流動相中得到待測溶液。
[0039]得到所述待測溶液后，本發明將所述待測溶液進行液相色譜檢測，得到注射用胸腺肽待測樣品的液相色譜圖。在本發明中，所述液相色譜檢測優選為高效液相色譜檢測；本發明對所述高效液相色譜檢測的儀器沒有特殊限制，采用本領域技術人員熟知的高效液相色譜儀即可。
[0040]在本發明中，所述液相色譜檢測的色譜柱優選為TSK GEL 2005WX1型凝膠色譜柱。在本發明中，所述TSK GEL 2005WX1型凝膠色譜柱的尺寸為:長X寬=300mmX7.8mm，內徑=5μπι。本發明對所述色譜柱的來源沒有特殊限制，采用本領域技術人員熟知的上述TSKGEL 2005WX1型凝膠色譜柱的市售商品即可。在本發明中，所述色譜柱對實現待測溶液中各成分的分離有重要作用，色譜柱與流動相的相互作用，對注射用胸腺肽檢測的準確性有重要影響。
[0041]在本發明中，所述液相色譜檢測的進樣量優選為15 μ L?25 μ L，更優選為20 μ L0在本發明中，選擇適合的進樣量能夠避免壓力突然上升而造成的色譜柱破壞，從而提高色譜柱的使用壽命。
[0042]在本發明中，所述液相色譜檢測的柱溫優選為25°C?35°C，更優選為30°C。在本發明中，選擇合適的柱溫對色譜柱與流動相的相互作用起到積極效果。
[0043]在本發明中，所述液相色譜檢測的流動相流速優選為0.5mL/min?1.0mL/min,更優選為0.7mL/min。在本發明中，選擇合適的流動相流速能夠避免由于流動相的突然變化造成柱壓增加過大對色譜柱和儀器系統的損壞。
[0044]在本發明中，所述液相色譜檢測優選采用紫外檢測器進行檢測