]步驟一，將待測樣本加到所述樣品墊上，通過層析作用所述待測樣本會依次經過量子點標記結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；
[0031]步驟二，待層析結束結果穩定后，用手持式熒光免疫層析芯片檢測儀進行檢測，根據檢測線和質控線的熒光信號的強弱以及標準曲線來判定檢測結果，實現腫瘤標記物CA72-4的定性定量檢測。
[0032]進一步地，所述應用方法，其特征在于:
[0033]步驟一，將50 μ I血清樣本加到所述樣品墊上，通過層析作用所述血清樣本會依次經過量子點標記結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙；
[0034]步驟二，待層析結束后，反應10?20分鐘，用手持式熒光免疫層析芯片檢測儀進行檢測，根據檢測線和質控線的熒光信號的強弱以及標準曲線來判定檢測結果，實現腫瘤標記物CA72-4的定性定量檢測。
[0035]將上述方法制備的試紙條用于腫瘤標記物CA72-4檢測，記錄特定激發光下形成的發射熒光信號，并根據標準曲線，準確計算出樣本中CA72-4的檢測含量。
[0036]量子點檢測技術是近些年新興的檢測技術，采用量子點納米材料，通過檢測量子點納米材料發出的熒光信號實現檢測。量子點納米材料又可稱為納米晶，是一種由II 一 VI族或III 一 V族元素組成的納米顆粒。量子點的粒徑一般介于I?1nm之間，由于電子和空穴被量子限域，連續的能帶結構變成具有分子特性的分立能級結構，受外界光激發后可以發射熒光。不同粒徑大小的量子點，在同一激發光下，可以發射不同的波長的熒光，也就是不同的顏色，比如從綠色到紅色。量子點較其他現有熒光檢測技術具有多項優勢:發射光譜隨尺寸大小和組成成分改變；具有很好的光強和穩定性；具有寬的激發譜和窄的發射譜；具有較大的斯托克斯位移；經修飾后生物相容性好；熒光壽命長等。
[0037]本發明所述基于量子點的CA72-4的快速檢測試紙條除了具備上述量子點技術的優點外，與CA72-4的酶聯免疫檢測及化學發光檢測技術相比，還具備檢測快速，操作簡便，可床邊及時快速檢測的優點。
【附圖說明】
[0038]圖1是本發明所述的檢測腫瘤標記物CA72-4的熒光免疫試紙條的結構示意圖。
[0039]其中:1-樣品墊、2-檢測線、3-質控線、4-吸水紙、5-量子點標記結合墊、6_硝酸纖維素膜、7-底板。
【具體實施方式】
[0040]下面結合附圖和實施例對本發明做進一步的描述。
[0041]本發明提供一種檢測腫瘤標記物CA72-4的熒光免疫試紙條，如圖1所示，包括樣品墊1、量子點標記結合墊5、硝酸纖維素膜6、吸水紙4和底板7，所用的免疫層析法的類型為雙抗夾心法，所述量子點標記結合墊5、硝酸纖維素膜6、吸水紙4依次相互重疊0.5?2mm粘貼在所述底板7上；所述量子點標記結合墊5上設置有量子點標記的抗CA72-4單克隆抗體CC49涂層；所述硝酸纖維素膜6上設置有檢測線2和質控線3，所述檢測線2上設置有抗CA72-4單克隆抗體B72.3，所述質控線3上設置有羊抗鼠Ig。所述樣品墊I是玻璃纖維素膜，所述結合墊2是玻璃纖維素膜，所述硝酸纖維素膜6是商品化的pall vividl70,所述底板7是PVC底板。
[0042]實施例一:量子點偶聯抗體的方法:
[0043]1.量子點預處理:
[0044]將0.0lM MES(pH 6.0)加入至10ul量子點(激發波長是365nm，發射波長是620nm)后，將上述混合物于振蕩器振蕩5秒后，于離心機中14000 — 20000rpm離心5分鐘，
棄上清。
[0045]2.量子點抗體偶聯:
[0046]I)試劑準備:
[0047]1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺(簡稱EDC)，N-羥基琥珀酰亞胺(簡稱NHS)，牛血清白蛋白(簡稱BSA)，抗CA72-4單克隆抗體CC49。
[0048]2)量子點抗體偶聯:
[0049]將量子點按照摩爾比n(QDs):n(EDC) = 1:4000，加入0.0lM MES(pH 6.0)于旋轉混合器上避光反應15分鐘，離心機離心(14000-20000rmp，2min)，棄上清，然后按照摩爾比n(QDs):n(NHS) = 1:2000，加入10ul 0.02M PBS緩沖液(pH 7.2)旋轉混合器上避光反應15分鐘，離心機離心(14000 — 20000rmp, 2min)，棄上清，按照摩爾比n (QDs):n (CC49)=1:8，加入10ul 0.02M PBS緩沖液(pH 7.2)，室溫避光反應3小時；而后置于17°C過夜(16-20小時);于離心機中14000rpm離心2分鐘，棄上清;10ul 1.5% BSA PBS pH = 7.4重懸上述沉淀，靜置封閉30min。
[0050]實施例二:量子點標記結合墊及樣品墊的處理
[0051]I)量子點標記結合墊處理方法:
[0052]將玻璃纖維素膜置于超純水浸泡15分鐘后，再置于無水乙醇浸泡15分鐘后，于干燥箱50°C條件下干燥將經過上述條件處理后的量子點結合墊置于結合墊處理液(含質量百分比5%蔗糖，質量百分比2%海藻糖，pH 7.4的0.0211 BST)中浸泡30分鐘后，于干燥箱37°C條件下干燥過夜(16-20小時)。
[0053]2)樣品墊處理方法:
[0054]將玻璃纖維素膜置于超純水浸泡15分鐘后，再置于無水乙醇浸泡15分鐘后，于50°C干燥箱條件下干燥；將經過上述條件處理后的樣品墊置于樣品墊處理液(含質量百分比2% NaCl，質量百分比0.2% PVP，質量百分比0.1% Tween-20，質量百分比0.5% BSA,pH
7.4的0.02MBS中浸泡30分鐘后，于干燥箱37°C條件下干燥過夜(16-20小時)。
[0055]實施例三:量子點標記結合墊的制備
[0056]將量子點標記好的抗體用移液槍吸取5ul，均勻的滴在預先處理好的結合墊上，并置于有干燥劑且避光的干凈的塑料桶內，待其干燥即得到量子點標記的結合墊。
[0057]實施例四:制備帶有相應抗體的檢測線和質控線
[0058]用B1DOT噴膜儀在商品化的pall vivid 170硝酸纖維素膜上分別用羊抗鼠IgG (濃度為lmg/ml，含I %的蔗糖)和抗CA72-4單克隆抗體B72.3 (濃度2mg/ml，含I %的蔗糖)噴膜出質控線及檢測線，置于37°C恒溫烘箱中烘干。
[0059]實施例五:試紙條的制備
[0060]將實施例二中處理好的樣品墊、實施例三中得到的量子點標記結合墊、實施例四得到的噴膜有相應抗體的pall vivid 170硝酸纖維素膜、吸水紙依次貼于低背景PVC藍光底板(規格3*2*3)上，相互重疊約0.5-2mm ;然后置于試紙條裁切機上，切成寬度為3cm的試紙條。將試紙條置于有干燥劑的干凈的塑料筒內，待使用時取出。
[0061]實施例六:帶有相應抗體的檢測線和質控線的制備以及試紙條的制備
[0062]將商品化的pall vivid 170硝酸纖維素膜貼于低背景PVC藍光底板(規格3*2*3)的中間，寬度為2cm，再將吸水紙貼于該底板上，相互重疊約0.5_2mm，用B1DOT噴膜儀在pall vivid 170硝酸纖維素膜上分別用羊抗鼠IgG(濃度為lmg/ml，含1%的鹿糖)和抗CA72-4單克隆抗體B72.3(濃度2mg/ml，含1%的蔗糖)噴膜出質控線及檢測線。將噴膜好線的pall vivid 170硝酸纖維素膜室溫晾干后，置于試紙條裁切機上，切成寬度為3cm的試紙條，置于37°C恒溫烘箱中烘干；待其烘干后將實施例二中處理好的樣品墊、實施例三中得到的量子點標記結合墊依次粘貼于PVC底板上，互相重疊約0.5-2mm，使得PVC底板上依次重疊粘貼的是樣品墊、量子點標記結合墊、pall vivid 170硝酸纖維素膜、吸水紙；再用試紙條裁切機將多出的樣品墊與量子點標記結合墊裁出，得到試紙條。將試紙條置于有干燥劑的干凈的塑