牙周病原菌血漿或血清抗體效價檢測試劑盒的制作方法
【專利說明】
[0001] 本申請是2011年10月18日提交的題為"牙周病原菌血漿或血清抗體效價檢測試 劑盒"的PCT/JP2011/073942號發明專利申請的分案申請，原申請進入中國國家階段獲得的 國家申請號為201180067623. 5。
技術領域
[0002] 本發明涉及一種牙周病原菌血漿或血清抗體效價檢測試劑盒，更詳細地說，涉及 適合于用機器自動化檢測的包含特定的牙周病原菌抗原蛋白的牙周病原菌血漿或血清抗 體效價檢測試劑盒、該試劑盒中使用的改性多肽、以及測定血液試樣的針對牙周病原菌的 抗體效價的方法。
【背景技術】
[0003] 牙周病是因口腔細菌感染牙周組織而引發的細菌感染癥。
[0004] 在牙科臨床的現場，將臨床癥狀、口腔內照片、X光圖像或牙周組織檢查等臨床檢 查的結果綜合起來進行牙周病的診斷。這些檢查中，口腔內照片和X光圖像診察是用視覺 來評價牙周組織的形態變化，牙周組織檢查是測定牙菌斑附著狀況、牙周袋的深度、探診時 的出血或牙齒的松動度等各種臨床項目來進行評價。因此，這些檢查需要繁瑣的操作，為了 準確地診斷患者的牙周病病情，要求手術者有高超的技術。
[0005] 即，根據情況的不同，會因手術者的熟練度而導致檢查結果不同，甚至有可能導致 對患者的診斷不同。此外，上述牙科臨床檢查中，雖然牙周病是細菌感染癥，但并不是在牙 周病原菌的"感染"水平上進行評價，而是在牙周組織的"形態上的變化"的水平上進行評 價，可以說是由手術者主觀地進行檢查，一直以來對于從細菌學、免疫學的觀點來看恰當、 且不會因手術者的熟練度而導致檢查結果產生差異的客觀的牙周病檢查方法都存在需求。
[0006] 在這種狀況下，建立了以針對牙周病原菌的血清抗體效價作為牙周病檢查的指標 的牙周病檢查系統（非專利文獻1)。該牙周病檢查系統從由患者的指尖采集并分離的微量 的血液來檢查、定量針對牙周病原菌的"特異性抗體"，由此評價牙周病原菌的感染狀態和 牙周病的嚴重程度（炎癥的狀態），能通過采用免疫學方法來客觀且均一地評價牙周病的 病情。
[0007] 此外，該牙周病檢查系統中，從由指尖采集的血液中分離血漿，將血漿試樣郵遞至 檢查機構，用檢查機構測定針對牙周病原菌的IgG抗體效價，評價牙周病的嚴重程度后，通 知各患者牙周病檢查的結果（牙周病原菌血漿抗體效價檢查）。因此，能對全科醫師或家 庭的牙周病檢查實施輔助，并且通過一攬子收集并分析檢查數據，也能利用龐大的數據來 與病情進彳T關聯。
[0008] 另一方面，這種牙周病檢查系統中，由于要處理大量的試樣，因此要求自動進行高 速處理。
[0009] 這種檢查系統中，試樣（血液）中的針對作為檢查對象的抗原的抗體的種類越多， 則檢查結果與牙周病的相關性越高，越能以良好的精度檢查牙周病。此外，感染牙周病的人 中，由于牙周病原菌和人的個體差異，導致識別的牙周病原菌抗原的種類不同，從這一點來 看，也同樣是作為檢查對象的抗體的種類越多，越能以良好的精度檢查牙周病。
[0010] 然而，如果欲測定多種抗體的抗體效價，則難以進行試樣的高速處理，不適合于用 機器自動化檢測。
[0011] 現在的抗體效價測定中使用的抗原是將牙銀卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis)等牙周病原菌粉碎而配制成的溶液，是包含種類繁多的細菌蛋白（也包括 LPS、膜脂）的混合物。因此，難以用機器來自動地高速處理大量的試樣。
[0012] 現有技術文獻 非專利文獻 非專利文獻1 :工藤值英子、閃山牙學會雜志、第28卷、第1號（2009) 1-14頁。
【發明內容】
[0013] 發明要解決的技術問題 本發明的目的在于提供牙周病原菌血漿或血清抗體效價檢測試劑盒、適合用于該試劑 盒的牙周病原菌抗原蛋白、以及使用該試劑盒的檢測血液試樣的牙周病原菌血漿或血清抗 體效價的方法，該試劑盒能涵蓋由于變化的牙周病原菌的抗原性和檢查對象的多樣的免疫 反應性而產生的多樣的抗原抗體反應，能以高精度檢查具有多樣的免疫表型的廣大范圍內 的患者的牙周病，并且能用自動化的機器進行高速處理。
[0014] 用于解決技術問題的手段 基于該課題，本發明人對牙周病原菌蛋白的篩選進行了研宄，該牙周病原菌蛋白即使 種類少，也能涵蓋多樣的抗原抗體反應，能以良好的精度判定牙周病。其結果是，本發明人 發現，特定的牙周病原菌蛋白的組合與從牙周病患者中分離的血液試樣中的血漿抗體特異 性地反應，通過選擇性地使用這些細菌蛋白的組合，能涵蓋多樣的抗原抗體反應，能以良好 的精度檢測血液試樣，并且能用自動化的機器進行高速處理，從而完成了本發明。
[0015] SP，本發明提供：
[1] 牙周病原菌血漿或血清抗體效價檢測試劑盒，其包含具有序列編號：1、3、9、15、19、31、 41、43、63、65和67的氨基酸序列的一系列多肽。
[0016] [2] 上述[1]所述的牙周病原菌血漿或血清抗體效價檢測試劑盒，其進一步包含具有序列 編號：5和37的氨基酸序列的多肽。
[0017] [3] 上述[1]或[2]所述的牙周病原菌血漿或血清抗體效價檢測試劑盒，其進一步包含具 有序列編號：23、35和47的氨基酸序列的多肽。
[0018] [4] 上述[1]~[3]中任一項所述的牙周病原菌血漿或血清抗體效價檢測試劑盒，其進一 步包含具有序列編號：17的氨基酸序列的多肽。
[0019] [5] 改性多肽，其具有序列編號：63的氨基酸序列。
[0020] [6] 上述[5]所述的改性多肽，其包含由序列編號：64的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
[0021] [7] 改性多肽，其具有序列編號：65的氨基酸序列。
[0022] [8] 上述[7]所述的改性多肽，其包含由序列編號：66的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
[0023] [9] 改性多肽，其具有序列編號：67的氨基酸序列。
[0024] [10] 上述[9]所述的改性多肽，其包含由序列編號：68的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
[0025] [11] 改性多肽，其具有序列編號：141的氨基酸序列。
[0026] [12] 上述[11]所述的改性多肽，其包含由序列編號：142的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
[0027] [13] 改性多肽，其具有序列編號：145的氨基酸序列。
[0028] [14] 上述[13]所述的改性多肽，其包含由序列編號：146的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
[0029] [15] 牙周病原菌血漿或血清抗體效價檢測試劑盒，其包含具有選自序列編號：1、3、5、9、15、 17、19、23、31、35、37、41、43、47、63、65、67、141、143、145、147、151、153 和 155 中的一種或兩 種以上的氨基酸序列的多肽。
[0030] [16] 上述[15]所述的牙周病原菌血漿或血清抗體效價檢測試劑盒，其中，所述多肽是具有 選自序列編號：3、5、15、19、31、41、141和145中的一種或兩種以上的氨基酸序列的多肽。
[0031] [17] 上述[15]所述的牙周病原菌血漿或血清抗體效價檢測試劑盒，其中，所述多肽是由選 自序列編號：2、4、6、10、16、18、20、24、32、36、38、42、44、48、64、66、68、142、144、146、148、 152、154和156中的一種或兩種以上的多核苷酸序列編碼的多肽。
[0032] [18] 測定從人身體中分離的血液試樣中的針對牙周病原菌的抗體效價的方法，該方法包括 使該血液試樣與牙周病原菌抗原多肽接觸的步驟，該方法的特征在于，所述牙周病原菌抗 原多肽是具有選自序列編號：1、3、5、9、15、17、19、23、31、35、37、41、43、47、63、65、67、141、 143、145、147、151、153和155中的一種或兩種以上的氨基酸序列的多肽。
[0033] [19] 測定從人身體中分離的血液試樣中的針對牙周病原菌的抗體的存在的方法，該方法包 括使該血液試樣與牙周病原菌抗原多肽接觸的步驟，該方法的特征在于，所述牙周病原菌 抗原多肽是具有選自序列編號：3、5、15、19、31、41、141和145中的一種或兩種以上的氨基 酸序列的多肽。
[0034] [20] 上述[19]所述的方法，其中，所述多肽是由選自序列編號：4、6、16、20、32、42、142和 146中的一種或兩種以上的多核苷酸序列編碼的多肽。
[0035] [21] 牙齦卟啉單胞菌菌株的分型試劑盒，其包含具有選自序列編號：151、153和155中的一 種或兩種以上的氨基酸序列的多肽。
[0036] [22] 上述[21]所述的分型試劑盒，其中，所述多肽是由選自序列編號：152、154和156中的 一種或兩種以上的多核苷酸序列編碼的多肽。
[0037] [23] 多肽，其具有序列編號：151的氨基酸序列。
[0038] [24] 上述[23]所述的多肽，其包含由序列編號：152的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。
[0039]