/L的氯化鈉或者 氯化鉀溶液，所述陰極液的離子強度和所述凝膠中的背景電解質溶液的離子強度相同。
[0022] 作為優先技術方案，步驟B中，摻次乳品的總蛋白濃度(；ix是通過凱氏定氮法或 BCA法測得的。
[0023] 與現有的檢測方法相比，本發明具有如下有益效果：
[0024] 1、該方法能夠有效地檢測各類摻次乳品的摻次程度；
[0025] 2、除用于乳品檢測外，該方法還可用于檢測其他蛋白食品的摻次比例；
[0026] 3、該方法在生物分析領域內可以用于定量測定混合樣品中的蛋白質濃度比例；
[0027]4、該方法速度快，測定樣品的摻次比例只需半小時。
【附圖說明】
[0028] 通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細描述，本發明的其它特征、 目的和優點將會變得更明顯：
[0029] 圖1為本發明的MRBET示意圖；圖1-A為第一種乳品的MRBET測定；圖1-B為第二 種乳品的MRBET測定；圖1-C為摻次樣品的MRBET測定；
[0030] 圖2為本發明的原理示意圖；圖2-A為第一種乳品（純乳品）的MRBET標準曲線； 圖2-B為第二種乳品（摻入的蛋白質）的MRBET標準曲線；圖2-C為杠桿原理圖解法；
[0031] 其中：1、標準曲線 1?!^=aiCpm+b;2、標準曲線RmB,2=a2CpM,2+b;P、坐標點（Cmix， UA、坐標點（Q^aiQ^+b) ;A2、坐標點（Q^aAk+b)。
【具體實施方式】
[0032] 下面結合實施例對本發明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領域的技術人員 進一步理解本發明，但不以任何形式限制本發明。應當指出的是，對本領域的普通技術人員 來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干調整和改進。這些都屬于本發明的保 護范圍。
[0033] 在本發明的技術方案中，以牛奶中摻雜豆奶的樣品為例，先對純牛奶和純豆奶分 別進行酸式MRBET滴定（圖1-A，圖1-B)。以此得到各自的R_，建立兩條標準曲線（圖2-A， 圖2-B)。再對摻次樣品進行相同測定（圖1-C)，得到樣品的阻滯信號Rmix。并且通過已有 的方法（如凱氏定氮法、BCA法等）測得樣品的蛋白濃度(；ix，得到坐標點P(C^，Rj。由 該坐標點作垂直線，得到與兩條標準曲線的交點，得到交點4 (Cmix，RJ和點A2 (Cmix，R2)。由 點P，A1和A2所形成的杠桿，即可圖解求得牛奶中摻雜的豆奶蛋白質濃度比例（圖2-C)。
[0034] 所述的圖解法是由下述數學處理過程所得。如前文所述（WangH.，ShiY.，Yan J.，etal，2014,Anal.Chem. 86, 2888-2894. )，R_和CPM呈線性關系，那么摻次樣品中牛奶 和豆奶的標準曲線可以分別表達為：
[0035] R腿b,i-aiCpro,i+b⑴
[0036] R腿B,2-a 2Cpr〇,2+b(2)
[0037] 其中，分別為牛奶和豆奶的界面阻滯信號，單位為（s/m) ;CpM,dPCpM, 2分別為牛奶和豆奶的蛋白質濃度，單位為（mg/mL)。斜率a^~以及截距b為常數（b在給 定實驗條件下為定值，通過對牛奶和豆奶分別進行MRBET滴定，得到蛋白濃度對阻滯信號 的標準曲線，從而求得&1、&2以及截距b，見圖2-A和2-B)。由于摻次樣品為混合樣，那么在 直角坐標中，坐標點P(Cmix，Rmix) -定會在方程（1)和方程（2)兩條標準曲線之間（圖2-C)。 假設樣品中全是牛奶，那么它的R_在理論上應該為Cmix帶入到方程（1)，可以表達為：
[0038] R:=a (3)
[0039] 假設全是豆奶，即為：
[0040] Rfa^x+b⑷
[0041] 那么，由坐標點P(Cmix，Rmix)延伸出來的垂直線和兩條標準曲線的交點即為A: (Q，aiQ^+b)和A2 (Q，af^+b)(圖2-C)。根據杠桿原理，豆奶摻雜牛奶的蛋白質濃度 比即為坐標點P上下兩條線段Cip|aiCmix+b-Rmix|和PC2|Rmix-a2Cmix_b|的比值，可以寫作：
【主權項】
1. 一種定量測定乳品摻次程度的電泳滴定方法，其特征在于，所述方法包括如下步 驟： A、 分別以未摻次的純乳品和摻入的蛋白質為標準品，進行MRBET滴定，利用MRB阻滯信 號Rmkb與蛋白質濃度存在的線性關系建立兩條標準曲線，獲得所述純乳品的標準曲線斜率 %、所述蛋白質的標準曲線斜率 &2以及截距b; B、 采用與步驟A條件相同的MRBET滴定法，對摻次乳品進行MRBET滴定，獲得阻滯信號 Rmix;單位為s/m;測得摻次乳品的總蛋白濃度Cmix，單位為mg/mL; C、 根據以下方程式獲得摻次乳品中所述摻入蛋白質和純乳品蛋白的濃度比值：
Cpm,2為摻次乳品中摻入的蛋白質的濃度，單位為mg/mL。
2. 根據權利要求1所述的定量測定乳品摻次程度的電泳滴定方法，其特征在于，步驟A 中，建立標準曲線時，在蛋白質的濃度為Omg/mL到lOmg/mL之間平均間隔選擇5~9個點。
3. 根據權利要求1所述的定量測定乳品摻次程度的電泳滴定方法，其特征在于，步驟 A中，純乳品的標準曲線方程式為Ami=S1Crm^b;摻入的蛋白質的標準曲線方程式為： IV2=a2Cpro,2+b;其中，RmebJPRmeb,2分別為純乳品和摻入的蛋白質的界面阻滯信號值，單 位為s/m;CPM>1和CPM,2分別為純乳品和摻入的蛋白質的蛋白質濃度，單位為mg/mL。
4. 根據權利要求1所述的定量測定乳品摻次程度的電泳滴定方法，其特征在于，所述 MRBET滴定中施加的電場為lV/mm~5V/mm。
5. 根據權利要求1所述的定量測定乳品摻次程度的電泳滴定方法，其特征在于，所述 MRBET滴定中采用的凝膠為聚丙烯酰胺凝膠，質量體積濃度為10. 0%~20. 0%，交聯度為 3. 0%~6. 0%〇
6. 根據權利要求1所述的定量測定乳品摻次程度的電泳滴定方法，其特征在于，所述 MRBET滴定中，采用的背景電解質溶液為離子強度從20mmol/L到250mmol/L的氯化鈉或者 氯化鉀溶液。
7. 根據權利要求1所述的定量測定乳品摻次程度的電泳滴定方法，其特征在于，步驟A 中，所述MRBET滴定為酸式MRBET滴定或堿式MRBET滴定。
8. 根據權利要求7所述的定量測定乳品摻次程度的電泳滴定方法，其特征在于，在酸 式MRBET滴定中，陽極液是離子強度為20mmol/L~250mmol/L的鹽酸與氯化鈉或者氯化鉀 的混合溶液，所述陽極液的離子強度和凝膠中的背景電解質溶液的離子強度相同；陰極液 為離子強度從20mmol/L~250mmol/L的氯化鈉或者氯化鉀溶液，所述陰極液的離子強度和 所述凝膠中的背景電解質溶液的離子強度相同。
9. 根據權利要求1所述的定量測定乳品摻次程度的電泳滴定方法，其特征在于，步驟B 中，摻次乳品的總蛋白濃度Cmix是通過凱氏定氮法或BCA法測得的。
【專利摘要】本發明公開了一種定量測定乳品摻次程度的電泳滴定方法；分別以未摻次的純乳品和摻入的蛋白質為標準品，進行MRBET滴定，獲得純乳品的標準曲線斜率a1、蛋白質的標準曲線斜率a2以及截距b；再對摻次乳品進行MRBET滴定，獲得阻滯信號Rmix；測得摻次乳品的總蛋白濃度Cmix，單位為mg/mL；根據獲得摻次乳品中摻入蛋白質和純乳品的濃度比值，其中，Cpro，1為摻次乳品中純乳品的蛋白質濃度，Cpro，2為摻次乳品中摻入的蛋白質的濃度。本發明的方法能夠有效地檢測各類摻次乳品的摻次程度、摻次比例；且檢測速度快，測定樣品的摻次比例只需半小時。
【IPC分類】G01N27-42, G01N27-447
【公開號】CN104713933
【申請號】CN201510140100
【發明人】樊柳蔭, 曹毅仁, 張柳霞, 肖華, 曹成喜
【申請人】上海交通大學
【公開日】2015年6月17日
【申請日】2015年3月27日