一種運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定氨糖含量的方法與流程

技術(shù)特征：

1.一種運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定氨糖含量的方法，其特征在于，其包括以下步驟：

步驟一，對(duì)照品溶液的配制；

步驟二，樣品處理；

步驟三，確定液相色譜條件；

所述，步驟一包括以下步驟：

步驟十一，采用USP 標(biāo)準(zhǔn)品作為氨糖對(duì)照品，精密稱定適量的D-氨基葡萄糖鹽酸鹽對(duì)照品置一容量瓶中，加入醋酸鈉溶液，超聲溶解；

步驟十二，用醋酸鈉溶液稀釋至刻度，混勻作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；吸取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至另一容量瓶中，加異硫氰酸苯酯，再加甲醇，超聲溶解，加甲醇/水至刻度，混勻，水浴中加熱，冷卻至室溫；

步驟十三，轉(zhuǎn)移上述溶液適量至離心管中，加入庚烷，振搖，將甲醇層轉(zhuǎn)移至HPLC瓶中，進(jìn)樣；

所述，步驟二包括以下步驟：

步驟二十一，精密稱取一定量的供試品置一容量瓶中，加入適量醋酸鈉溶液，超聲溶解；

步驟二十二，用醋酸鈉溶液稀釋至刻度，混勻；

步驟二十三，吸取適量上述溶液至另一容量瓶中，加異硫氰酸苯酯，再加甲醇，超聲溶解，加甲醇/水至刻度，混勻，水浴中加熱，冷卻至室溫；

步驟二十四，轉(zhuǎn)移上述溶液適量至離心管中，加入庚烷，振搖，將甲醇層轉(zhuǎn)移至HPLC瓶中，進(jìn)樣；

所述，步驟三包括以下步驟：

步驟三十一，選擇高效液相色譜儀和帶紫外檢測(cè)器；

步驟三十二， 選擇產(chǎn)品參數(shù)為C18，50mm×4.6mm，2.7μm的色譜柱；

步驟三十三，設(shè)定流速為 1.0mL/min；

步驟三十四，設(shè)定第一流動(dòng)相為磷酸溶液；第二流動(dòng)相為乙腈；梯度如下表所示：

步驟三十五，設(shè)定檢測(cè)波長(zhǎng)為UV240nm；

步驟三十六，設(shè)定柱溫為25℃；

步驟三十七，設(shè)定進(jìn)樣量為2μL。

2.如權(quán)利要求1所述的一種運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定氨糖含量的方法，其特征在于，所述步驟十一中氨糖的含量的計(jì)算公式如下式所示：

其中：A_對(duì)、A_樣分別為對(duì)照品、樣品的峰面積；

W_對(duì)為對(duì)照品的重量，mg；

W_樣為樣品的重量，g；

C_對(duì)為對(duì)照品的含量。

3.如權(quán)利要求1所述的一種運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定氨糖含量的方法，其特征在于，所述步驟十二中的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制為：精密稱定適量的D-氨基葡萄糖鹽酸鹽對(duì)照品置一容量瓶中，加入0.1mol/L醋酸鈉溶液，超聲溶解，用0.1mol/L醋酸鈉溶液稀釋至刻度，混勻作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，其濃度為1.0mg/ml。

4.如權(quán)利要求1所述的一種運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定氨糖含量的方法，其特征在于，所述步驟一中的溶液的配制為：吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量至另一容量瓶中，加350μl異硫氰酸苯酯，再加10ml甲醇，超聲溶解，加甲醇/水至刻度，混勻，80℃水浴中加熱10min，冷卻至室溫；轉(zhuǎn)移上述溶液5ml溶液至離心管中，加入5ml庚烷，振搖2min，將甲醇層轉(zhuǎn)移至HPLC瓶中，進(jìn)樣。

5.如權(quán)利要求1所述的一種運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定氨糖含量的方法，其特征在于，所述步驟二中的樣品處理為：稱取一定量的供試品置一容量瓶中，加入0.1mol/L醋酸鈉溶液，超聲溶解；用0.1mol/L醋酸鈉溶液稀釋至刻度，混勻；吸取上述溶液至另一容量瓶中，加350μl異硫氰酸苯酯，再加10ml甲醇，超聲溶解，加甲醇/水至刻度，混勻，80℃水浴中加熱10min，冷卻至室溫；轉(zhuǎn)移上述溶液5ml溶液至離心管中，加入5ml庚烷，振搖2min，將甲醇層轉(zhuǎn)移至HPLC瓶中，進(jìn)樣。