本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體是一種動物組織中組胺檢測方法及試劑盒。
背景技術(shù)：
組胺是一種具有生物活性的低分子含氮有機(jī)化合物，普遍存在于各類食品如發(fā)酵制品、乳制品、酒類、水產(chǎn)品及其制品中，尤其水產(chǎn)品最為突出。組胺作為人體內(nèi)的一種化學(xué)傳導(dǎo)物質(zhì)，通過與細(xì)胞膜上的兩類受體（H1和H2）作用而發(fā)揮毒性，如食入過量組胺，輕者引起過敏反應(yīng)，重者將危機(jī)生命。一些蛋白含量較高的中上層魚類如金槍魚、鯖魚、秋刀魚等，若在其死后不加以合理控制，極易產(chǎn)生組胺，國內(nèi)外報道的組胺中毒事件多發(fā)生在此類魚中。同時，水產(chǎn)品中以鮐鰺、鯖魚等易產(chǎn)組胺的中上層魚類為原料的產(chǎn)品，因為組胺含量超標(biāo)而被禁止出口的事件近年來時有發(fā)生，給水產(chǎn)品出口貿(mào)易帶來很大影響。因此，為確保動物食品食用安全，促進(jìn)水產(chǎn)品進(jìn)出口貿(mào)易，亟需一個快速、精確、可靠的組胺檢測方法。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種動物組織中組胺檢測方法及試劑盒，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
一種動物組織中組胺檢測方法及試劑盒，包括80～200mmol/LpH8.8～9.0的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液、15～20mmol/L胺類化合物、1.0～1.5mmol/L還原型輔酶、10～20mmol/Lα-酮戊二酸和1500～3000U/L谷氨酸脫氫酶；具體檢測方法如下：（1）將動物組織樣品在冰浴下用組織搗碎機(jī)充分勻漿后，將動物組織樣品加入到帶塞頂空樣品瓶中，然后加入5倍動物組織重量的蒸餾水、用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為8.0-10.0，并加入氯化鈉固體使其含量達(dá)到30wt%；（2）將磁力攪拌吸附萃取棒加入步驟（1）的樣品瓶中，蓋上瓶蓋，在電磁攪拌器上于30-45℃萃取0.5-3h，其中電磁攪拌速度為1000-1500r/Min；（3）萃取完畢，將磁力攪拌吸附萃取棒用蒸餾水沖洗干凈，用無塵吸水紙吸去磁力攪拌吸附萃取棒上的水分后，待用；（4）組胺的分離分析氣相色譜分析條件：帶直接熱解析進(jìn)樣系統(tǒng)的氣相色譜儀Agilent6890氣相色譜儀；色譜柱：具備溫度范圍為280℃以上的鍵合固定相毛細(xì)管柱；熱解析進(jìn)樣系統(tǒng)一級熱解析溫度：280℃，時間5min，捕集溫度-20~30℃，二級熱解析溫度280℃，時間3-5min，氫火焰離子化（FID）檢測器溫度300℃；色譜柱柱溫：150℃，保持2min；然后以15℃/min的速度升溫至230℃，保留1min，再以50℃/min的速度升溫至290℃，保留2-3min；（5）標(biāo)準(zhǔn)曲線建立采用內(nèi)標(biāo)法，在樣品中加入不同濃度的組胺標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)化合物1,9-壬二醇，在步驟（4）的氣相色譜分析條件下，測出一系列不同濃度的組胺標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的組胺峰面積，并根據(jù)內(nèi)標(biāo)化合物校正峰面積后，確定組胺的含量與組胺峰面積的定量關(guān)系，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；（6）樣品測定根據(jù)上述步驟（1）-（4）獲得待測樣品的組胺峰面積，根據(jù)組胺的含量與組胺峰面積的定量關(guān)系，計算得到待測樣品中的組胺含量。
作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述的磁力攪拌吸附萃取棒表面設(shè)置有烯酸酯涂層或乙二醇硅酮涂層。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明對于確保動物食品食用安全，促進(jìn)水產(chǎn)品進(jìn)出口貿(mào)易，具有重要意義。
具體實施方式
下面對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。
本發(fā)明實施例中，一種動物組織中組胺檢測方法及試劑盒，包括80～200mmol/LpH8.8～9.0的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液、15～20mmol/L胺類化合物、1.0～1.5mmol/L還原型輔酶、10～20mmol/Lα-酮戊二酸和1500～3000U/L谷氨酸脫氫酶；具體檢測方法如下：（1）將動物組織樣品在冰浴下用組織搗碎機(jī)充分勻漿后，將動物組織樣品加入到帶塞頂空樣品瓶中，然后加入5倍動物組織重量的蒸餾水、用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為8.0-10.0，并加入氯化鈉固體使其含量達(dá)到30wt%；（2）將磁力攪拌吸附萃取棒加入步驟（1）的樣品瓶中，蓋上瓶蓋，在電磁攪拌器上于30-45℃萃取0.5-3h，其中電磁攪拌速度為1000-1500r/Min；（3）萃取完畢，將磁力攪拌吸附萃取棒用蒸餾水沖洗干凈，用無塵吸水紙吸去磁力攪拌吸附萃取棒上的水分后，待用；（4）組胺的分離分析氣相色譜分析條件：帶直接熱解析進(jìn)樣系統(tǒng)的氣相色譜儀Agilent6890氣相色譜儀；色譜柱：具備溫度范圍為280℃以上的鍵合固定相毛細(xì)管柱；熱解析進(jìn)樣系統(tǒng)一級熱解析溫度：280℃，時間5min，捕集溫度-20~30℃，二級熱解析溫度280℃，時間3-5min，氫火焰離子化（FID）檢測器溫度300℃；色譜柱柱溫：150℃，保持2min；然后以15℃/min的速度升溫至230℃，保留1min，再以50℃/min的速度升溫至290℃，保留2-3min；（5）標(biāo)準(zhǔn)曲線建立采用內(nèi)標(biāo)法，在樣品中加入不同濃度的組胺標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)化合物1,9-壬二醇，在步驟（4）的氣相色譜分析條件下，測出一系列不同濃度的組胺標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的組胺峰面積，并根據(jù)內(nèi)標(biāo)化合物校正峰面積后，確定組胺的含量與組胺峰面積的定量關(guān)系，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；（6）樣品測定根據(jù)上述步驟（1）-（4）獲得待測樣品的組胺峰面積，根據(jù)組胺的含量與組胺峰面積的定量關(guān)系，計算得到待測樣品中的組胺含量。所述的磁力攪拌吸附萃取棒表面設(shè)置有烯酸酯涂層或乙二醇硅酮涂層。
實施例1：
本發(fā)明動物組織中組胺檢測方法及試劑盒，包括80～200mmol/LpH8.8～9.0的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液、15mmol/L胺類化合物、1.0mmol/L還原型輔酶、10mmol/Lα-酮戊二酸和1500U/L谷氨酸脫氫酶；具體檢測方法如下：（1）將動物組織樣品在冰浴下用組織搗碎機(jī)充分勻漿后，將動物組織樣品加入到帶塞頂空樣品瓶中，然后加入5倍動物組織重量的蒸餾水、用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為8.0，并加入氯化鈉固體使其含量達(dá)到30wt%；（2）將磁力攪拌吸附萃取棒加入步驟（1）的樣品瓶中，蓋上瓶蓋，在電磁攪拌器上于30-45℃萃取0.5h，其中電磁攪拌速度為1000r/Min；（3）萃取完畢，將磁力攪拌吸附萃取棒用蒸餾水沖洗干凈，用無塵吸水紙吸去磁力攪拌吸附萃取棒上的水分后，待用；（4）組胺的分離分析氣相色譜分析條件：帶直接熱解析進(jìn)樣系統(tǒng)的氣相色譜儀Agilent6890氣相色譜儀；色譜柱：具備溫度范圍為280℃以上的鍵合固定相毛細(xì)管柱；熱解析進(jìn)樣系統(tǒng)一級熱解析溫度：280℃，時間5min，捕集溫度-20℃，二級熱解析溫度280℃，時間3min，氫火焰離子化（FID）檢測器溫度300℃；色譜柱柱溫：150℃，保持2min；然后以15℃/min的速度升溫至230℃，保留1min，再以50℃/min的速度升溫至290℃，保留2min；（5）標(biāo)準(zhǔn)曲線建立采用內(nèi)標(biāo)法，在樣品中加入不同濃度的組胺標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)化合物1,9-壬二醇，在步驟（4）的氣相色譜分析條件下，測出一系列不同濃度的組胺標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的組胺峰面積，并根據(jù)內(nèi)標(biāo)化合物校正峰面積后，確定組胺的含量與組胺峰面積的定量關(guān)系，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；（6）樣品測定根據(jù)上述步驟（1）-（4）獲得待測樣品的組胺峰面積，根據(jù)組胺的含量與組胺峰面積的定量關(guān)系，計算得到待測樣品中的組胺含量。所述的磁力攪拌吸附萃取棒表面設(shè)置有烯酸酯涂層或乙二醇硅酮涂層。
實施例2：
本發(fā)明動物組織中組胺檢測方法及試劑盒，包括200mmol/LpH9.0的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液、20mmol/L胺類化合物、11.5mmol/L還原型輔酶、20mmol/Lα-酮戊二酸和3000U/L谷氨酸脫氫酶；具體檢測方法如下：（1）將動物組織樣品在冰浴下用組織搗碎機(jī)充分勻漿后，將動物組織樣品加入到帶塞頂空樣品瓶中，然后加入5倍動物組織重量的蒸餾水、用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為10.0，并加入氯化鈉固體使其含量達(dá)到30wt%；（2）將磁力攪拌吸附萃取棒加入步驟（1）的樣品瓶中，蓋上瓶蓋，在電磁攪拌器上于45℃萃取3h，其中電磁攪拌速度為1500r/Min；（3）萃取完畢，將磁力攪拌吸附萃取棒用蒸餾水沖洗干凈，用無塵吸水紙吸去磁力攪拌吸附萃取棒上的水分后，待用；（4）組胺的分離分析氣相色譜分析條件：帶直接熱解析進(jìn)樣系統(tǒng)的氣相色譜儀Agilent6890氣相色譜儀；色譜柱：具備溫度范圍為280℃以上的鍵合固定相毛細(xì)管柱；熱解析進(jìn)樣系統(tǒng)一級熱解析溫度：280℃，時間5min，捕集溫度30℃，二級熱解析溫度280℃，時間5min，氫火焰離子化（FID）檢測器溫度300℃；色譜柱柱溫：150℃，保持2min；然后以15℃/min的速度升溫至230℃，保留1min，再以50℃/min的速度升溫至290℃，保留3min；（5）標(biāo)準(zhǔn)曲線建立采用內(nèi)標(biāo)法，在樣品中加入不同濃度的組胺標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)化合物1,9-壬二醇，在步驟（4）的氣相色譜分析條件下，測出一系列不同濃度的組胺標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)的組胺峰面積，并根據(jù)內(nèi)標(biāo)化合物校正峰面積后，確定組胺的含量與組胺峰面積的定量關(guān)系，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；（6）樣品測定根據(jù)上述步驟（1）-（4）獲得待測樣品的組胺峰面積，根據(jù)組胺的含量與組胺峰面積的定量關(guān)系，計算得到待測樣品中的組胺含量。所述的磁力攪拌吸附萃取棒表面設(shè)置有烯酸酯涂層或乙二醇硅酮涂層。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應(yīng)將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個整體，各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。