可實(shí)現(xiàn)牛血清白蛋白鑒定及絕對(duì)定量的試劑盒及測(cè)定方法與流程

技術(shù)特征：

1.一種可實(shí)現(xiàn)牛血清白蛋白鑒定及絕對(duì)定量的試劑盒，其特征在于：包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)包括特征肽段及其內(nèi)標(biāo)肽段，肽段序列為：

組合方式如下：

(1)、所述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特征肽段單獨(dú)使用或者與其他特征肽段配成兩種混合特征肽段使用；

(2)、內(nèi)標(biāo)肽段單獨(dú)使用，或與其他特征肽段配成兩種或多種混合內(nèi)標(biāo)物質(zhì)使用；

(3)、所述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特征肽段與其內(nèi)標(biāo)肽段配成的單一內(nèi)標(biāo)物質(zhì)單獨(dú)使用，或與另外一種單一內(nèi)標(biāo)物質(zhì)同時(shí)使用；

(4)、內(nèi)標(biāo)肽段與其他內(nèi)標(biāo)肽段混合使用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可實(shí)現(xiàn)牛血清白蛋白鑒定及絕對(duì)定量的試劑盒，其特征在于：該試劑盒還包括反應(yīng)試劑：

反應(yīng)試劑，由以下成分組成：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述可實(shí)現(xiàn)牛血清白蛋白鑒定及絕對(duì)定量的試劑盒，其特征在于：

1)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

①用以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是標(biāo)準(zhǔn)特征肽段，是單一標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，或配成雙混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，使用其中的一種或多種；

單一標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)I

特征肽段1 DAFLGSFLYEYSR

單一標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)II

特征肽段2 AEFVEVTK

雙混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

特征肽段1 DAFLGSFLYEYSR

特征肽段2 AEFVEVTK

②用以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明試劑盒的內(nèi)標(biāo)肽段，是單一內(nèi)標(biāo)肽段，或配成雙混合內(nèi)標(biāo)肽段，可使用其中的一種或多種；

單一內(nèi)標(biāo)肽段I

內(nèi)標(biāo)肽段1 DAFLGSFLYEYSR

單一內(nèi)標(biāo)肽段II

內(nèi)標(biāo)肽段2 AEFVEVTK

雙混合內(nèi)標(biāo)肽段

內(nèi)標(biāo)肽段1 DAFLGSFLYEYSR

內(nèi)標(biāo)肽段2 AEFVEVTK

③將上述特征肽段與其內(nèi)標(biāo)肽段聯(lián)合使用，是單一內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，或配成混合內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，使用其中的一種或多種；

單一內(nèi)標(biāo)物質(zhì)I

特征肽段1 DAFLGSFLYEYSR

內(nèi)標(biāo)肽段1 DAFLGSFLYEYSR

單一內(nèi)標(biāo)物質(zhì)II

特征肽段2 AEFVEVTK

內(nèi)標(biāo)肽段2 AEFVEVTK

混合內(nèi)標(biāo)物質(zhì)I

特征肽段1 DAFLGSFLYEYSR

特征肽段2 AEFVEVTK

內(nèi)標(biāo)肽段1 DAFLGSFLYEYSR

混合內(nèi)標(biāo)物質(zhì)II

特征肽段1 DAFLGSFLYEYSR

特征肽段2 AEFVEVTK

內(nèi)標(biāo)肽段2 AEFVEVTK

混合內(nèi)標(biāo)物質(zhì)III

④用以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明方法的牛血清白蛋白檢測(cè)試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是單劑、或是雙劑或多劑，根據(jù)上述方法自由組合或選擇其中的一種或多種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述可實(shí)現(xiàn)牛血清白蛋白鑒定及絕對(duì)定量的試劑盒，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的內(nèi)標(biāo)肽段是特征肽段中任一、二或多個(gè)氨基酸上的C、H、O、N被同位素標(biāo)記后的肽段，其中，一個(gè)氨基酸上的C、H、O、N四個(gè)元素可同時(shí)被標(biāo)記，或任意1～3個(gè)元素被標(biāo)記。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述可實(shí)現(xiàn)牛血清白蛋白鑒定及絕對(duì)定量的試劑盒，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配成單劑、雙劑或多劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述可實(shí)現(xiàn)牛血清白蛋白鑒定及絕對(duì)定量的試劑盒，其特征在于：所述胰蛋白酶為序列級(jí)胰蛋白酶、胰蛋白酶中的至少一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述可實(shí)現(xiàn)牛血清白蛋白鑒定及絕對(duì)定量的試劑盒，其特征在于：所述反應(yīng)試劑配成單劑。

8.利用權(quán)利要求1所述的可實(shí)現(xiàn)牛血清白蛋白鑒定及絕對(duì)定量的試劑盒所實(shí)施的牛血清白蛋白含量測(cè)定方法，其特征在于：該方法步驟如下：

(1)將待測(cè)樣品加入碳酸氫銨，渦旋，加入二硫蘇糖醇，溫育振蕩，再加入碘乙酰胺，溫育振蕩，放置至室溫后，再加入胰蛋白酶，溫育振蕩，最后加入甲酸終止反應(yīng)。

(2)將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和(1)步驟中最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀中檢測(cè)，或?qū)?nèi)標(biāo)物質(zhì)和(1)步驟中含內(nèi)標(biāo)肽段的最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測(cè)，檢測(cè)后通過母離子和子離子的質(zhì)荷比(m/z)及特征肽段的保留時(shí)間(t_R)進(jìn)行定性鑒別，色譜峰峰面積變化測(cè)算出牛血清白蛋白的絕對(duì)含量；

溫度控制在25～60℃范圍，溫育時(shí)間控制在0.5～12h，振蕩頻率控制在800～2500rmp，渦旋時(shí)間控制在2～10min，室溫控制在18-22℃范圍；

被測(cè)牛血清白蛋白樣品與反應(yīng)試劑的比例控制在1/1到1/100(v/v)。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述牛血清白蛋白含量測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟(2)為：將特征肽段和(1)步驟中最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀中檢測(cè)，或?qū)⒒旌蟽?nèi)標(biāo)物質(zhì)和(1)步驟中含內(nèi)標(biāo)肽段的最終酶解產(chǎn)物分別注入(超)高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀中檢測(cè)，通過m/z和t_R進(jìn)行定性，色譜峰峰面積變化測(cè)算出牛血清白蛋白的含量。