本發(fā)明涉及一種測定方法，具體是一種納他霉素含量的測定方法。
背景技術：
納他霉素(Natamyin)最早發(fā)現(xiàn)于1955年，也稱匹馬菌素(Pimaricin)、游鏈霉素或海松素，是一種重要的多烯烴大環(huán)內酯類抗菌素。其生產途徑較多，可以由納塔爾鏈霉菌(StreptomycesNatalensisi)、恰塔努加鏈霉菌(Streptomyceschmanovgensis)和褐黃孢鏈霉菌(Streptomyces gilvosporeus)等多種鏈霉菌發(fā)酵產生，是一種天然的多烯烴大環(huán)內脂類生物抗菌劑和食品添加劑。在發(fā)現(xiàn)初期，納他霉素主要使用在醫(yī)藥方面，1960年以后才逐漸被納入食品防腐劑的行列。在1976年、1982年和1996年分別通過FAO/WHO、美國食品與藥品管理局(FDA)，中國允許作為食品添加劑使用，目前已有三十多個國家允許使用。雖然作為食品添加劑，納他霉素具有廣適性、高效性、低毒性的特點，可以應用于很多的食品中。然而，目前納他霉素標準品溶液及其在測定樣品中納他霉素含量中的用途仍有待改進。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種納他霉素含量的測定方法，以解決上述背景技術中提出的問題。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：
一種納他霉素含量的測定方法，所述測定方法包括如下步驟：(1)活化：分別用8～10ml甲醇、6～8ml水依次活化固相萃取小柱；(2) 食品樣品經冷凍干燥；(3)粉碎食品樣品并過篩；(4)利用緩沖溶液為溶劑，稀釋樣品至合適濃度，并使之帶正電；(5)加入EDTA-Mcllvaine和乙腈混合提取劑，漩渦混勻并超聲處理；(6)將處理后的樣本注入固相萃取小柱；(7)使用淋洗溶液進行淋洗，然后真空泵抽干固相萃取小柱；(8)使用洗脫溶液進行洗脫，然后真空泵抽干固相萃取小柱，收集洗脫液，置于棕色的進樣小瓶，備用；(9)繪制納他霉素標準曲線：稱取2-3mg納他霉素，用甲醇定容在5-8ml棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存至檢測前；然后，用50％甲醇稀釋，分別配制5、10、20、50、100μg/L的納他霉素標準溶液；通過0.45μm聚四氟乙烯過濾膜后分別注入高效液相色譜-串聯(lián)質譜HPLC-MS/MS測定，得到納他霉素標準曲線；(10)計算酒樣納他霉素含量：將步驟(8)所得溶液通過0.6μm聚四氟乙烯過濾膜后供高效液相色譜-串聯(lián)質譜HPLC-MS/MS測定，所獲得的檢驗數(shù)據(jù)通過步驟(9)所得納他霉素標準曲線計算酒樣中納他霉素含量。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述固相萃取小柱為WAX固相萃取柱小柱。
作為本發(fā)明進一步的方案：所述第(5)步加入EDTA-Mcllvaine：乙腈=1：1(體積比)的混合提取劑，漩渦混勻30s，超聲10-25min，其中混合提取劑為pH≤3.0，優(yōu)選pH=2，超聲提取時間為15min。
作為本發(fā)明再進一步的方案：所述第(3)步粉碎并過篩是后過1mm篩。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明納他霉素含量的測定方法能有效測定各種食品中的納他霉素含量，準確率高。
具體實施方式
下面對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。
本發(fā)明實施例中，一種納他霉素含量的測定方法，所述測定方法包括如下步驟：(1)活化：分別用8～10ml甲醇、6～8ml水依次活化固相萃取小柱；(2) 食品樣品經冷凍干燥；(3)粉碎食品樣品并過篩；(4)利用緩沖溶液為溶劑，稀釋樣品至合適濃度，并使之帶正電；(5)加入EDTA-Mcllvaine和乙腈混合提取劑，漩渦混勻并超聲處理；(6)將處理后的樣本注入固相萃取小柱；(7)使用淋洗溶液進行淋洗，然后真空泵抽干固相萃取小柱；(8)使用洗脫溶液進行洗脫，然后真空泵抽干固相萃取小柱，收集洗脫液，置于棕色的進樣小瓶，備用；(9)繪制納他霉素標準曲線：稱取2-3mg納他霉素，用甲醇定容在5-8ml棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存至檢測前；然后，用50％甲醇稀釋，分別配制5、10、20、50、100μg/L的納他霉素標準溶液；通過0.45μm聚四氟乙烯過濾膜后分別注入高效液相色譜-串聯(lián)質譜HPLC-MS/MS測定，得到納他霉素標準曲線；(10)計算酒樣納他霉素含量：將步驟(8)所得溶液通過0.6μm聚四氟乙烯過濾膜后供高效液相色譜-串聯(lián)質譜HPLC-MS/MS測定，所獲得的檢驗數(shù)據(jù)通過步驟(9)所得納他霉素標準曲線計算酒樣中納他霉素含量。所述固相萃取小柱為WAX固相萃取柱小柱。所述第(5)步加入EDTA-Mcllvaine：乙腈=1：1(體積比)的混合提取劑，漩渦混勻30s，超聲10-25min，其中混合提取劑為pH≤3.0，優(yōu)選pH=2，超聲提取時間為15min。所述第(3)步粉碎并過篩是后過1mm篩。
實施例1
本發(fā)明納他霉素含量的測定方法，所述測定方法包括如下步驟：(1)活化：分別用8ml甲醇、6ml水依次活化固相萃取小柱；(2) 食品樣品經冷凍干燥；(3)粉碎食品樣品并過篩；(4)利用緩沖溶液為溶劑，稀釋樣品至合適濃度，并使之帶正電；(5)加入EDTA-Mcllvaine和乙腈混合提取劑，漩渦混勻并超聲處理；(6)將處理后的樣本注入固相萃取小柱；(7)使用淋洗溶液進行淋洗，然后真空泵抽干固相萃取小柱；(8)使用洗脫溶液進行洗脫，然后真空泵抽干固相萃取小柱，收集洗脫液，置于棕色的進樣小瓶，備用；(9)繪制納他霉素標準曲線：稱取2mg納他霉素，用甲醇定容在5-8ml棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存至檢測前；然后，用50％甲醇稀釋，分別配制5、10、20、50、100μg/L的納他霉素標準溶液；通過0.45μm聚四氟乙烯過濾膜后分別注入高效液相色譜-串聯(lián)質譜HPLC-MS/MS測定，得到納他霉素標準曲線；(10)計算酒樣納他霉素含量：將步驟(8)所得溶液通過0.6μm聚四氟乙烯過濾膜后供高效液相色譜-串聯(lián)質譜HPLC-MS/MS測定，所獲得的檢驗數(shù)據(jù)通過步驟(9)所得納他霉素標準曲線計算酒樣中納他霉素含量。所述固相萃取小柱為WAX固相萃取柱小柱。所述第(5)步加入EDTA-Mcllvaine：乙腈=1：1(體積比)的混合提取劑，漩渦混勻30s，超聲20min，其中混合提取劑為pH≤3.0，優(yōu)選pH=2，超聲提取時間為15min。所述第(3)步粉碎并過篩是后過1mm篩。
實施例2
本發(fā)明納他霉素含量的測定方法，所述測定方法包括如下步驟：(1)活化：分別用10ml甲醇、8ml水依次活化固相萃取小柱；(2) 食品樣品經冷凍干燥；(3)粉碎食品樣品并過篩；(4)利用緩沖溶液為溶劑，稀釋樣品至合適濃度，并使之帶正電；(5)加入EDTA-Mcllvaine和乙腈混合提取劑，漩渦混勻并超聲處理；(6)將處理后的樣本注入固相萃取小柱；(7)使用淋洗溶液進行淋洗，然后真空泵抽干固相萃取小柱；(8)使用洗脫溶液進行洗脫，然后真空泵抽干固相萃取小柱，收集洗脫液，置于棕色的進樣小瓶，備用；(9)繪制納他霉素標準曲線：稱取2mg納他霉素，用甲醇定容在5-8ml棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存至檢測前；然后，用50％甲醇稀釋，分別配制5、10、20、50、100μg/L的納他霉素標準溶液；通過0.45μm聚四氟乙烯過濾膜后分別注入高效液相色譜-串聯(lián)質譜HPLC-MS/MS測定，得到納他霉素標準曲線；(10)計算酒樣納他霉素含量：將步驟(8)所得溶液通過0.6μm聚四氟乙烯過濾膜后供高效液相色譜-串聯(lián)質譜HPLC-MS/MS測定，所獲得的檢驗數(shù)據(jù)通過步驟(9)所得納他霉素標準曲線計算酒樣中納他霉素含量。所述固相萃取小柱為WAX固相萃取柱小柱。所述第(5)步加入EDTA-Mcllvaine：乙腈=1：1(體積比)的混合提取劑，漩渦混勻30s，超聲15min，其中混合提取劑為pH≤3.0，優(yōu)選pH=2，超聲提取時間為15min。所述第(3)步粉碎并過篩是后過1mm篩。
實施例3
本發(fā)明納他霉素含量的測定方法，所述測定方法包括如下步驟：(1)活化：分別用9ml甲醇、7ml水依次活化固相萃取小柱；(2) 食品樣品經冷凍干燥；(3)粉碎食品樣品并過篩；(4)利用緩沖溶液為溶劑，稀釋樣品至合適濃度，并使之帶正電；(5)加入EDTA-Mcllvaine和乙腈混合提取劑，漩渦混勻并超聲處理；(6)將處理后的樣本注入固相萃取小柱；(7)使用淋洗溶液進行淋洗，然后真空泵抽干固相萃取小柱；(8)使用洗脫溶液進行洗脫，然后真空泵抽干固相萃取小柱，收集洗脫液，置于棕色的進樣小瓶，備用；(9)繪制納他霉素標準曲線：稱取3mg納他霉素，用甲醇定容在5-8ml棕色容量瓶中，-20℃冰箱保存至檢測前；然后，用50％甲醇稀釋，分別配制5、10、20、50、100μg/L的納他霉素標準溶液；通過0.45μm聚四氟乙烯過濾膜后分別注入高效液相色譜-串聯(lián)質譜HPLC-MS/MS測定，得到納他霉素標準曲線；(10)計算酒樣納他霉素含量：將步驟(8)所得溶液通過0.6μm聚四氟乙烯過濾膜后供高效液相色譜-串聯(lián)質譜HPLC-MS/MS測定，所獲得的檢驗數(shù)據(jù)通過步驟(9)所得納他霉素標準曲線計算酒樣中納他霉素含量。所述固相萃取小柱為WAX固相萃取柱小柱。所述第(5)步加入EDTA-Mcllvaine：乙腈=1：1(體積比)的混合提取劑，漩渦混勻30s，超聲10min，其中混合提取劑為pH≤3.0，優(yōu)選pH=2，超聲提取時間為15min。所述第(3)步粉碎并過篩是后過1mm篩。
對于本領域技術人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和范圍內的所有變化囊括在本發(fā)明內。此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術方案也可以經適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。