1.一種基于CdSe/ZnS量子點納米簇的電化學發光生物傳感器,其特征是:在金電極表面修飾磁性納米金棒后連接細胞適體,然后組裝納米金-DNA引發鏈,最后固定CdSe/ZnS量子點納米簇電化學發光信號探針,構建電化學發光生物傳感器。
2.一種制備權利要求1所述的CdSe/ZnS量子點納米簇電化學發光探針的方法,其特征是它由下列步驟組成:
步驟1.NaHSe的制備:0.0950g的NaBH4加入10mL的離心管中,在離心管中加入6mL的去離子水,加入磁子攪拌溶解,通氮氣排出多余的氧氣,稱取0.0947g的Se粉快速加入體系中,在常溫下攪拌至無色透明(即Se粉完全溶解)
步驟2.CdSe量子點的制備:將0.5709g的CdCl2·2.5H2O加入100mL的三口燒瓶中,50.0mL的去離子水溶解,通氮氣排出多余的氧氣,移取400μL的巰基乙酸加到三口燒瓶中,用1M的NaOH調pH至10-11,溶液變得澄清透明,然后把制得的NaHSe溶液迅速加入到三口燒瓶中,加熱沸騰30-40min得淡黃色澄清溶液。
步驟3.CdSe@ZnS量子點的制備:將制得的CdSe量子點溶液在水浴中保持45℃,分別在5mL的去離子水中溶解0.21g NaS·9H2O和0.25gZnSO4,然后將兩溶液交替加入到CdSe量子點中,反應30min,冷卻至室溫,即得到CdSe@ZnS量子點。所得量子點于棕色瓶中避光保存備用。
步驟4.CdSe/ZnS量子點-發夾DNA信號探針的組裝(溶液b):按照使用說明,將帶有氨基的發夾DNA H1和H2溶解,再稀釋至濃度為1.0×10-5M,以備實驗使用。取100μL的CdSe@ZnS-COOH的量子點加入到1.5mL的離心管中,加入10μL的0.1mol/L的EDC和10μL的0.025mol/L的NHS溶液,室溫下活化反應30min。活化后離心管中加入100μL的H1和H2,室溫下反應16h后10000rpm下離心重新分散至100μL溶液,記為溶液b,保存備用。
3.一種采用權利要求1所述的基于CdSe/ZnS量子點納米簇信號探針的電化學發光生物傳感器,以及采用該生物傳感器檢測癌細胞的分析方法。其特征是它由下列步驟組成:
步驟1.納米金-DNA引發鏈的組裝(溶液a):取1mL的金膠溶液,按一定的比例加入P1和S1,在37℃下震蕩溫育16h,反應完全后在10000rpm下離心30min后重新分散至100μL,記為溶液a,4℃下保存備用。
步驟2.將帶有適體DNA的電極浸入到溶液a中,用鋁箔紙封好后,在37℃的條件下震蕩溫育1~2h后用pH=7.4的PBS緩沖溶液沖洗未反應的溶液,然后將此標記的電極浸入到溶液b中,同樣用鋁箔紙封好,在37℃的條件下震蕩溫育1~2h,取回電極用pH=7.4的PBS緩沖溶液沖洗未反應的溶液,制成檢測細胞的ECL的生物傳感器。
步驟3.癌細胞的電化學發光(ECL)檢測。將ECL傳感器分別與100μL含有不同濃度(例如1000個細胞每毫升)細胞的PBS溶液震蕩溫浴45~60分鐘。
將步驟3處理后的基于CdSe/ZnS量子點納米簇的電化學發光傳感器清洗,在含有0.05M K2S2O8和0.1M KCl的0.1M PBS(pH 7.4)緩沖液中,進行電化學發光的測試,發光強度與待測樣品(癌細胞)的濃度成線性關系。
4.根據權利要求3所述的癌細胞檢測方法,其特征是:所述的電化學發光測試是以修飾好的金電極(基于CdSe/ZnS量子點納米簇的電化學發光傳感器)為工作電極、Pt電極為對電極、甘汞電極為參比電極的三電極體系,用MPI-A型電致化學發光儀,在0到-1.5V進行循環伏安掃描,光電倍增管高壓設為500~700V。