1.一種基于化學發光法的septin9檢測試劑盒,主要包括:
(1)包被有septin9單克隆抗體的磁微粒試劑;
(2)辣根過氧化物酶標記的septin9抗體;
(3)Septin9校準品;
(4)Septin9質控品
(5)發光底物液;
(6)樣本稀釋液;
(7)濃縮洗滌液;
(8)反應杯。
2.如權利要求1所述磁微粒試劑為含有包被有septin9單克隆抗體的磁微粒和穩定劑的溶液。
3.如權利要求1所述校準品及質控品為含有一定量septin9抗原的BSA緩沖液。所述septin9標準品溶液6瓶,0ng/ml,0.3ng/ml,0.9ng/ml,2.7ng/ml,8.1ng/ml,24.3ng/ml,1ml/瓶。
4.如權利要求1所述發光底物液為含有魯米諾、過氧化氫、對碘苯酚的Tris緩沖液。
5.如權利要求1所述濃縮清洗液為含有Tris、NaCl和表面活性劑的緩沖液。
6.如權利要求1所述樣本稀釋液為含有BSA的溶液。
7.本發明還提供一種基于化學發光法的septin9檢測試劑盒制備方法,主要包括磁微粒包被抗體、HRP標記抗體、發光底物液配制、校準品、質控品、濃縮清洗液和樣本稀釋液配制:
步驟1,磁微粒包被抗體
采用表面含有羧基的磁微粒,用EDC活化微球表面的羧基,然后加入一定量的septin9抗體偶聯,偶聯完畢加入淬滅液消除剩余的活化的羧基,然后用BSA封閉微球表面剩余的位點;
步驟2,HRP標記septin9抗體
采用改良的過碘酸鈉法偶聯HRP和septin9抗體,在低pH條件下用NaIO4氧化HRP形成醛化酶,加入septin9抗體后醛化酶與抗體的氨基相連,然后用硼氫化鈉還原生成穩定的酶標記抗體。標記完畢用含10%BSA pH 7.4的0.05M PBS作為酶結合物稀釋液,將酶結合物稀釋到所需比例;
步驟3,發光底物液的配制
將魯米諾、過氧化氫、對碘苯酚用pH 8.5 0.05M Tris溶液溶解;
步驟4,相關溶液配制
稱取一定量septin9標準品用空白血清稀釋成如下濃度0ng/ml,0.3ng/ml,0.9ng/ml,2.7ng/ml,8.1ng/ml,24.3ng/ml,分裝后2-8℃保存,濃縮清洗液為含有Tris、NaCl和Tween80的緩沖液,樣本稀釋液為含有BSA的pH7.4 0.05M PBS溶液。