一種豬皮小肽螯合物及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種豬皮小肽螯合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 豬皮始載于《湯液本草》，從古至今，豬皮一直應用于各種相關疾病的治療，現代臨 床多用于外科皮膚損傷的治療。豬皮中的蛋白質含量高達33%，其中膠原蛋白含量為87.8%。 豬皮與人體皮膚結構相似，含有豐富的I型和m型膠原，且與人之間的同源性較牛、鼠好，潛 在疾病源少，加之我國是產豬大國，擁有豐富的質優價廉的豬皮資源，人們對從豬皮中提取 膠原的研究越來越深入，現以豬皮為原料制備膠原的研究越來越多。
[0003] 豬皮為常食之物，但作為藥物，早有記載。豬皮藥用名為豬膚，味甘性涼，有活血止 血、補益精血、滋潤肌膚、光澤頭發、減少皺紋、延緩衰老的作用，因為豬皮中含有大量的膠 原蛋白，能減慢機體細胞老化，尤其對陰虛內熱，出現咽喉疼痛、低熱等癥的患者食用更佳。 豬膚可以加工煎煉成動物膠，如今市售的"新阿膠"就是用豬皮代替驢皮熬膠而成的"阿 膠"。我國最早用豬皮美容與治病的是東漢醫圣張仲景，他在《傷寒論》中創制了 "豬膚湯"， 治少陰病，下利、咽痛、胸滿、心煩:豬膚1斤，以水一斗，煮取五升，去滓，加白蜜一升，白粉五 合，熬香和合得，溫分六服;并且指出，豬膚功能"和血脈，潤肌膚"，并有養陰、生津、止渴的 功效。
[0004] 藥理研究表明，由豬皮制取的新阿膠有促進骨髓造血功能的作用，另有報道，新阿 膠對6()C〇照射所致造血功能損害小鼠，使其外周血中血紅素含量，白細胞數和骨髓有核細胞 數均顯著高于對照組，其療效優于阿膠；由新鮮豬皮制取的膠原，在小鼠燒傷后立即局部涂 抹，能夠促進皮膚粘膜損傷愈合，創面愈合率明顯高于對照組，光鏡檢查，新生上皮下纖維 組織的增生現象，成纖維細胞向纖維細胞分化及膠原化的趨勢均明顯強于對照組，對創而 愈合有明顯促進作用。
[0005] 豬皮小肽是運用生物工程和酶解技術從豬皮中提取出來的小分子肽類，其相對分 子質量在3KD以下，易透皮吸收，活性更強，溶解性和消化利用率高，安全無副作用、無依賴 性。
[0006] 微量元素與人體健康息息相關，中國微量元素科學研究會會長陳祥友教授指出： "人是由元素組成的，人的生、老、病、死無不與元素平衡有關，當今世界威協人類健康長壽 的疑難雜癥的突破，有待于元素平衡醫學的發展"。微量元素已成功應用于疾病的治療，研 究表明，缺鐵會引起貧血，缺銅引起貧血、骨質疏松、冠心病，缺鉆會引起巨細胞性貧血、白 血病、白內障、口腔潰瘍等，缺鉻會引起糖尿病、冠心病，缺鉬會出現心血管疾病，如心肌壞 死冠心病、心絞痛等。
[0007] 鋅是人體必需的微量元素之一，在人體生長發育、生殖遺傳、免疫、內分泌等重要 生理過程中起著極其重要的作用，被人們冠以"生命之花"、"婚姻和諧素"的美稱。鋅存在于 眾多的酶系中，如碳酸酐酶、呼吸酶、乳酸脫氫酸、超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶、DNA和RNA 聚中酶等中，是核酸、蛋白質、碳水化合物的合成和維生素 A利用的必需物質，具有促進生長 發育，改善味覺的作用。鋅主要存在于動物性食品中，中國家庭中多以植物性食物為主，而 且植物性食品中的草酸、植酸、纖維素等嚴重干擾鋅的吸收。近代科學研究證明，缺鋅會引 發各種病癥:比如，鋅對生長發育有著促進作用，鋅通過參與酶的形成而促進核酸蛋白質合 成，影響細胞的生長和分裂，所以，嚴重缺鋅的兒童就會表現為發育遲緩，矮小癥，營養不 良，瘦弱，貧血，頭發黃。嚴重缺鋅的孕婦由于染色體變形，會導致流產概率的增加，造成習 慣性流產;鋅可以增強創傷組織再生能力，缺鋅就會導致創傷表皮及愈合組織中膠原量減 少，創傷不易愈合，所以，鋅可以輔助治療口腔潰瘍、胃潰瘍、燒傷、創傷以及青春期痤瘡、下 肢潰爛、褥瘡等病癥;鋅是維持腦的正常生長和腦功能發育不可缺少的微量元素，缺鋅影響 腦DNA、RND、蛋白質的形成，就會導致小腦發育遲緩，行為偏離，智力落后，所以，缺鋅是導致 腦癱的最主要原因，這一點對孕婦尤其重要；鋅還是促進男性睪丸酮分泌及精子形成的重 要元素，所以，缺鋅也是男性不孕癥、性功能障礙的主要原因。以上種種表明，鋅元素對人體 的重要，應引起各個人群的重視。
[0008] 銅元素是一種金屬化學元素，也是人體所必須的一種微量元素。人體缺乏銅會引 起貧血，毛發異常，骨和動脈異常，以至腦障礙。銅與人體健康關系密切。人體每天都要攝入 各種微量元素，銅是人體不能缺少的金屬元素之一。成年人體內，1千克體重中，銅含量大約 為1.4mg~2. lmg;血液中銅的含量約為1 .Omg~1.5mg。這一數量雖小，但它對于維持身體健 康和器官的正常運行卻不可缺少。這是因為銅元素在機體運行中具有特殊的作用。銅是機 體內蛋白質和酶的重要組成部分，許多重要的酶需要微量銅的參與和活化。例如，銅可以催 化血紅蛋白的合成。研究表明，缺銅會導致血漿膽固醇升高，增加動脈粥樣硬化的危險，因 而是引發冠狀動脈心臟病的重要因素。科學家還發現，營養性貧血、白癲風、骨質疏松癥、胃 癌及食道癌等疾病的產生也都與人體缺銅有關。嚴重缺銅和長期邊緣性缺銅，還會引發小 兒發育不良和一些地方病。銅是人體健康不可缺少的微量營養素，對于血液、中樞神經和免 疫系統，頭發、皮膚和骨骼組織以及腦子和肝、心等內臟的發育和功能有重要影響。銅主要 從日常飲食中攝入。世界衛生組織建議，為了維持健康，成人每公斤體重每天應攝入0.03毫 克銅。孕婦和嬰幼兒應加倍。缺銅會引起各種疾病，可以服用含銅補劑和藥丸來加以補充。 銅對人體的潛在毒性很輕，只有當攝入量大大超過了正常值時，方會引起胃腸紊亂等不良 反應。研究結果表明，當成年男子和女子每天攝入量分別超過12mg和10mg時，會對人體生物 化學過程產生輕微的影響。鑒于銅的潛在毒性較低，相反地它卻是人體健康不可缺少的元 素，世界衛生組織的專家組已作出結論，缺銅的危害遠比銅的毒性大得多。除了某些罕見的 遺傳外，人們主要防止的是缺銅。
[0009] 某些金屬物質是膠原合成所必須得，如銅，當皮膚細胞內銅的含量升高時，膠原蛋 白合成增加。不過，銅是一種有毒的金屬，而銅肽不僅沒有了毒性，而且可促進膠原合成，傷 口愈合，有效的撫平皺紋。銅肽(GHK-Cu)，又名三勝肽、藍銅勝肽、甘氨酰-L-組氨酰-L-賴氨 酸與銅的絡合物，銅肽最初于1973年從人的血漿中分離得到，并于1985年發現其具有傷口 修復功能，1999年研究者認為銅肽及其銅復合物可以作為組織重塑的激活劑，其也是一個 信號肽，促進傷疤外部大量膠原蛋白集聚物的降解，皮膚正常膠原蛋白的合成、彈力蛋白、 蛋白聚糖和葡萄胺聚糖的生成、不同細胞類型的生長速度和迀移、抗炎、抗氧化反應。賓夕 法尼亞大學皮膚學教授和該校的強生皮膚研究中心研究表明，將銅肽用于皮膚護理和化妝 品中對改善皮膚老化現象很有幫助，含有銅肽的產品可以快速改善皮膚問題，包括減少細 紋、皺紋、粗糙、發黃、皮膚松弛和色素沉淀(褐斑）。
[0010] 豬皮小肽螯合物不僅能更進一步提高小肽的功效，還能提高鋅、銅等微量元素的 吸收率，而且還能使人體攝入兩類物質（小肽和微量元素），各自并協同發揮促進創口愈合 和美容保濕的作用。
【發明內容】
[0011] 本發明的第一目的在于提供一種豬皮小肽螯合物，本發明的第二目的是提供該豬 皮小肽螯合物在制備用于促創口愈合及美容祛皺的食品、保健食品、藥品及化妝品中的應 用。
[0012] 本發明目的第一目的是這樣實現的： 一種豬皮小肽螯合物，其特征在于采用以下工藝步驟制備： (1)豬皮小肽的制備:將鮮豬皮切塊，加8-12倍量1-3%碳酸鈉溶液浸泡6小時，棄去堿 液，以水沖洗至近中性，加8-12倍量水勻漿，加水煮沸，待冷至約35~45°C，調節pH值1.0~ 3.0，加入0.5~2%胃蛋白酶，保溫1~3小時，調節pH值7.0~9.0，加入0.5~2%胰蛋白酶，保 溫3~5小時，煮沸10~15分鐘，離心，上清液通過相對分子質量為3KD的超濾膜超濾，透過液 加于DA2(U-C大孔吸附樹脂柱上，以水洗脫，棄去水洗液，再以60~90%乙醇洗脫，收集乙醇 洗脫液，減壓回收乙醇并繼續濃縮至60°C相對密度為1.10~1.15的清膏，噴霧干燥(進風溫 度為180~200°C，出風溫度為90~100°C)，得到豬皮小肽提取物。豬皮小肽提取物中含有 Gln-Pr〇-Gly-Gly-Gly-Lys-Ala-Ser-Gly-Ala-Gly-Asn-Asp-Ala-Leu-Ser-Gly-Ile-Trp> Val-Ser-Gly-Gly-Leu-Pr〇-Gly-Leu-Pr〇-Gly-Ala-Asp-A