用于治療胰腺癌的生物堿化合物及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥物技術領域，具體涉及從牛蒡的干燥成熟果實中分離得到的一種生 物堿類化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 牛蒡(Arctium IappaL.)又名白肌人參、蒡翁菜，屬菊科牛蒡屬二年生草本植物， 其果實牛蒡子被歷版中國藥典收載，為常用中藥。牛蒡子性寒、味辛苦、歸肺胃二經。具有疏 散風熱、祛痰止咳、解毒透疹、利咽消腫等功效。牛蒡營養豐富，富含菊糖、纖維素、蛋白質、 鈣、磷、鐵等礦物質和多種維生素，具有很強的保健功能。另外牛蒡根、莖、葉均可入藥。
[0003] 牛蒡子的化學成分有木脂素類、黃酮類、揮發油類、脂肪酸類、生物堿類、酚羥基化 合物等。牛蒡根除含有豐富的蛋白質、低聚糖等營養成份外，還含牛蒡酸、醛類、多炔類及揮 發油等多種小分子活性成份。牛蒡葉中含有揮發油、鞣質、粘液質、咖啡酸、綠原酸、異綠原 酸等物質。
[0004] 現代藥理學研究表明其有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗過敏、抗病毒、抗菌、提高免疫 力和降血脂等作用，對糖尿病也有一定的治療作用。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種從牛蒡的干燥成熟果實中分離得到的一種生物堿類化 合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
[0006] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0007] 具有下述結構式的化合物(I):
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將牛蒡的干燥成熟果實粉 碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a) 中乙酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個 柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃 縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、50:1、25:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為15:1、10:1 和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010] 進一步地，步驟(a)中，用75%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進一步地，所述大孔樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。
[0012] -種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的載 體。
[0013] 所述的化合物(I)在制備治療胰腺癌的藥物中的應用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療胰腺癌的藥物中的應用。
[0015] 本發明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018] 圖1為化合物(I)結構式；
[0019] 圖2為化合物⑴計算ECD和實驗ECD圖。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0021] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[0022]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學試劑有限 公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0023]實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0024] (a)牛蒡的干燥成熟果實（IOkg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取(30LX3次），合并提 取液，濃縮至無醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯(6L X 3次)和水飽和的正丁醇 (6LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(381g)和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用DlOl大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇 洗脫8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物（131g); (c)步驟(b)中 70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1 (8個柱體積）、50 :1 (8個柱體 積）、25:1 (8個柱體積）、10:1 (10個柱體積)和1:1 (8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得 到5個組分；（d)步驟(c)中組分4(27g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為15:1(8個柱 體積）、10:1(8個柱體積)和5:1(6個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步 驟(d)中組分2(18g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇 水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I) (230mg)〇
[0025] 結構確證:淺黃色油狀物;HR-ESMS顯示[M+Na]+為m/z 363.1718，結合核磁特征 可得分子式為C2qH24N2O3，不飽和度為10。核磁共振氫譜數據δ Η(ppm，DMS〇-d6，400MHz):H-3 (3.86，m)，H-5(2.78，m)，H-5(3.01，m)，H-6(1.77，dd，J=13,7)，H-6(2.85，m)，H-9(7.11，d， J = 7.5)，H-10(6.82，t，J = 7.5)，H-ll(7.06，td，J = 7.5，l)，H-12(6.74，d，J = 7.5)，H-14 (1.29，m)，H-14(1.95，dt，J=13,3)，H-15(2.03，m)，H-16(2.78，m)，H-18(1.27，d，J = 6)，H-19(3.52，m)，H-20(1.75，m)，H-21(2.21，t，J=12)，H-21(3.15，dd，J=12,4.5)，16-C〇2Me (3 · 71，s);核磁共振碳譜數據δ。(ppm，DMSO-Cl6，I OOMHz ):171.4(C，2-C)，60.3(CH，3-C)，53.2 (CH2,5-C)，42.5(CH2,6-C)，56.1(C，7-C)，134.8(C，8-C)，119.4(CH，9-C)，120.9(CH，10-C)， 127.3(CH，n-C)，109.4(CH，12-C)，143.7(C，13-C)，31.6(CH2，14-C)，29.7(CH，15-C)，42.8 (CH，16-C)，21.7(CH 3，18-C)，69.3(CH，19-C)，44.6(CH，20-C)，46.9(CH2,21-C)，168.3(C， 16<0 21^)，51.1((：!13，16-〇)216);碳原子標記參見圖1。11?光譜表明該化合物含有羥基 (3358cm-〇和酯羰基（1725cm-〇基團。 1H NMR譜顯示四個芳族共振信號(δΗ6·74,6·82,7.06， 7 · 11)，一個甲基酯基（δΗ3 · 71)，以及一個CH3CHOH側鏈(δΗΙ · 27，3 · 52) ,3C NMR譜顯示了20 個共振碳信號，包括兩個甲基，四個亞甲基，九個次甲基，三個季碳，以及與吲哚氮相連的兩 個叔碳(C-2和C-13)。四個芳香族次甲基共振碳為吲哚部分的芳族碳(C-9，C-10，C-11，C- 12)，烯屬季碳信號δ(：171.4歸屬于C-2。酯羰基碳的信號為δ(：168.3,側鏈CH3CHOH的含氧次 甲基的信號為6〇69.30!13.52)。(：〇5￥譜顯示該化合物存在叱!12(：!1(〇1〇!1〇13)〇1〇12〇1和 NCH2CH2 部分結構，后者對應于 C-5-C-6,前者對應 C-21-C-20-(C-19-C-18)-C-15-C-14-C-3。 綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物 如圖1所示，立體構型進一步通過E⑶試驗確定，理論值與實驗值基本一致(圖2)。
[0026]實施例2:化合物(I)藥理作用試驗 [0027] 一、材料和儀器
[0028]人胰腺癌MiaPaCa-2細胞由天津醫科大學附屬腫瘤醫院腫瘤研究所惠贈。化合物 (I)自制，HPLC歸一化純度大于98% ABS、胰蛋白酶-EDTA消化液購于美國Hyclone公司。PBS 粉購于天津潤泰科技發展有限公司。DMEM低糖培養液購于美國Gibco公司。MTT購于美國 Sigam公司。DMSO購于北京化工廠。注射用青霉素鈉購于哈藥集團制藥總廠。注射