腫瘤抗原肽的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及可用作癌癥的預防和/或治療劑的來源于0R7C1的腫瘤抗原膚等。
【背景技術】
[0002] 生物體對腫瘤細胞和病毒感染細胞等的排斥中，細胞免疫、特別是細胞毒性T淋己 細胞(稱為CTL)起到重要的作用。腫瘤細胞排斥的情況下，CTL識別腫瘤細胞上的抗原膚(月中 瘤抗原膚）與MHC(主要組織相容性復合物，Major Histocompatibility Complex)的復合 物，對腫瘤細胞進行攻擊和破壞。即，腫瘤抗原膚是通過腫瘤特有的蛋白質、即腫瘤抗原蛋 白質在細胞內合成后由蛋白酶在細胞內分解而生成。生成的腫瘤抗原膚在內質網內與MHCI 類抗原化LAI類抗原）結合而形成復合物，并被運送至細胞表面進行抗原遞呈。腫瘤特異性 CTL識別該設及抗原遞呈的復合物，通過細胞毒性作用和淋己因子的產生而顯示抗腫瘤效 果。隨著運一系列作用的掲示，不斷地開發出通過將腫瘤抗原蛋白質或腫瘤抗原膚用作所 謂的癌癥免疫療法制劑(癌癥疫苗)來使癌癥患者體內的癌癥特異性CTL增強的治療法。
[0003] 0R7C1(嗅覺受體家族7亞家族C成員UOlfactory rec邱tor,family 7,subfamily C,member 1))是屬于嗅覺受體家族的G蛋白質偶聯受體(G-protein-coupled receptors， GPCR)。0R7C1已知是在作為人結腸癌細胞株的SW480細胞、HCT15細胞和HT29細胞、作為人肺 癌細胞株的LHK2細胞的SP(側群，Side Population)細胞中表達的基因（專利文獻1)dSP細 胞被認為是含大量癌癥干細胞的組分，被報道具有高致腫瘤性。
[0004] 癌癥干細胞被認為是癌癥的復發和轉移的主要原因，近年來指出了癌癥治療中W 癌癥干細胞為祀來抑制其增殖、遷移的重要性。實際對SW480細胞株轉染針對0R7C1的siRNA 后，SP細胞組分的比例和致腫瘤性顯著減少，所W0R7C1被認為在癌癥干細胞的機能中承擔 必不可少的角色。
[0005] 另外，0R7C1在正常組織中僅于睪丸內表達，所W被分類為"癌睪丸抗原"。癌睪丸 抗原被廣泛認為是有希望用于癌癥疫苗的祀分子。
[0006] 此外，0R7C1是有希望用于癌癥疫苗的祀分子，實際上來源于0R7C1的部分膚被報 道是HLA-A24結合性腫瘤抗原膚(專利文獻1)。
[0007] 另外，如上所述，與腫瘤免疫相關的CTL識別腫瘤細胞上的腫瘤抗原膚與HLAI類抗 原的復合物，對腫瘤細胞進行攻擊和破壞。已知腫瘤抗原膚的HLA-A02限制性或HLA-A24限 制性通常分別獨立，歐美人和日本人中化A-A02和化A-A24顯示不同的抗原特異性。對于 0R7C1，也已知可與HLA-A24結合的來源于0R7C1的腫瘤抗原膚（專利文獻1)，但是尚未發現 可與HLA-A02結合或者可與HLA-A02和HLA-A24兩者結合的來源于0R7C1的腫瘤抗原膚。
[000引現有技術文獻
[0009] 專利文獻
[0010] 專利文獻1:國際公開第2010/050190號文本
[0011] 發明的概要
[0012] 發明所要解決的技術問題
[OOU]本發明的目的在于提供可與HLA-A02結合或者可與HLA-A02和HLA-A24兩者結合的 來源于OR7C1的腫瘤抗原膚W及含有該腫瘤抗原膚作為有效成分的可用于癌癥的預防和/ 或治療的醫藥組合物等。
[0014] 解決技術問題所采用的技術方案
[0015] 本發明人反復進行認真研究后，發現了 WGenbank登錄號NP_945182登錄的作為 0R7C1 (嗅覺受體家族7亞家族C成員1)(序列編號2)的部分膚的可與HLA-A02和HLA-A24兩者 結合的腫瘤抗原膚。
[0016] 此外，本發明還發現該腫瘤抗原膚在體內或體外可用作癌癥特異性CTL的誘導劑、 即癌癥疫苗。該腫瘤抗原膚可用作結腸癌、肺癌、卵巢癌等癌癥(腫瘤)疾病的預防和/或治 療劑。此外，該腫瘤抗原膚可用作針對結腸癌、肺癌、卵巢癌等癌癥(腫瘤)的腫瘤標記物。
[0017] 旨P，本發明為W下所示的發明。
[0018] [1]由W序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6和序列編號11中的任一個 表示的氨基酸序列形成的膚。
[0019] [2]由W序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6和序列編號11中的任一個 表示的氨基酸序列中，
[0020] (1)將C末端的氨基酸置換為疏水性氨基酸的氨基酸序列，或者
[0021] (2)在N末端和/或C末端添加有1個~數個氨基酸的氨基酸序列
[0022] 形成的膚。
[0023] [3巧日[2]的膚，其中，該膚由將W序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6和 序列編號11中的任一個表示的氨基酸序列的C末端的氨基酸置換為亮氨酸、鄉氨酸或異亮 氨酸的氨基酸序列形成。
[0024] [4巧日[2]的膚，其中，該膚由在W序列編號3、序列編號4、序列編號5、序列編號6和 序列編號11中的任一個表示的氨基酸序列的N末端或C末端添加了 1個氨基酸的氨基酸序列 形成。
[0025] [5]將多條表位膚連結而成的多表位膚，其中，作為該表位膚，包含至少1條[1]~ [4]的膚。
[0026] [6]含有[1]~[4]的膚或[引的多表位膚作為有效成分的醫藥組合物。
[0027] [7巧日[6]的醫藥組合物，其中，包含佐劑。
[0028] [引含有[1]~[4]的膚或[引的多表位膚作為有效成分的癌癥的預防和/或治療用 疫苗。
[0029] [9]含有[1]~[4]的膚或[5]的多表位膚作為有效成分的癌癥的預防和/或治療 劑。
[0030] [10]含有[1]~[4]的膚或[引的多表位膚作為有效成分的細胞毒性T細胞(CTL)的 誘導劑。
[0031] [11]編碼[1]~[4]的膚或[引的多表位膚中的至少1個的多聚核巧酸。
[0032] [12]含有[11]的多聚核巧酸的表達載體。
[0033] [13]包含[12]的表達載體的基因導入用組合物。
[0034] [14]含有 W 下的(a)或(b):
[0035] (a) [11]的多聚核巧酸、
[0036] (b)[12]的表達載體
[0037] 中的任一個作為有效成分的用于癌癥的治療或預防的醫藥組合物。
[0038] [1引包括使W下的(a)或(b):
[0039] (a)[l]~[4]的膚或[引的多表位膚、
[0040] (b)編碼上述(a)記載的膚中的至少1個的多聚核巧酸、
[0041] 與具有抗原遞呈能力的細胞在體外接觸的抗原遞呈細胞的制造方法。
[0042] [16]包括使W下的(a)或(b):
[0043] (a) [1]~[4]的膚或[引的多表位膚、
[0044] (b)編碼上述(a)記載的膚中的至少1個的多聚核巧酸
[0045] 中的任一個與外周血淋己細胞在體外接觸的CTL的誘導方法。
[0046] [ 17 ]含有[1 ]~[4 ]的膚和HLA的HLA多聚體。
[0047] [18]含有[17]的HLA多聚體的診斷藥物。
[0048] [19]識別[1]~[4]的膚與HLA的復合物的TCR樣抗體。
[0049] [ 20 ]含有[19 ]的TCR樣抗體的腫瘤檢測劑。
[0050] [21]用于篩選可有效地適用[6]、[7]或[14]的醫藥組合物的患者的診斷藥物，其 中，包含[17]的HLA多聚體或[19]的TCR樣抗體。
[0051] 發明的效果
[0052] 通過本發明，能提供可用作CTL的誘導劑的腫瘤抗原膚、和含有該腫瘤抗原膚作為 有效成分的可用于癌癥的預防和/或治療的醫藥組合物等。
[0053] 附圖的簡單說明
[0054] 圖1是表示W序列編號3表示的膚的采用干擾素丫 ELISP0T測試的體外的CTL誘導 能力的評價結果的圖。縱軸表示每500000個接種細胞的斑點數。A表示利用HLA-A*02:01基 因導入小鼠的試驗結果，B表示利用HLA-A巧4:02基因導入小鼠的試驗結果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分別表示將來源于給膚小鼠的脾細胞在存在給予膚的 條件下和不存在給予膚的條件下再次刺激培養的結果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過 各膚的給予而在小鼠體內誘導的膚特異性CTL的數量。
[0055] 圖2是表示W序列編號4表示的膚的采用干擾素丫 ELISP0T測試的體外的CTL誘導 能力的評價結果的圖。縱軸表示每500000個接種細胞的斑點數。A表示利用HLA-A*02:01基 因導入小鼠的試驗結果，B表示利用HLA-A巧4:02基因導入小鼠的試驗結果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分別表示將來源于給膚小鼠的脾細胞在存在給予膚的 條件下和不存在給予膚的條件下再次刺激培養的結果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過 各膚的給予而在小鼠體內誘導的膚特異性CTL的數量。
[0056] 圖3是表示W序列編號5表示的膚的采用干擾素丫 ELISP0T測試的體外的CTL誘導 能力的評價結果的圖。縱軸表示每500000個接種細胞的斑點數。A表示利用HLA-A*02:01基 因導入小鼠的試驗結果，B表示利用HLA-A巧4:02基因導入小鼠的試驗結果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分別表示將來源于給膚小鼠的脾細胞在存在給予膚的 條件下和不存在給予膚的條件下再次刺激培養的結果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過 各膚的給予而在小鼠體內誘導的膚特異性CTL的數量。
[0057] 圖4是表示W序列編號6表示的膚的采用干擾素丫 ELISP0T測試的體外的CTL誘導 能力的評價結果的圖。縱軸表示每500000個接種細胞的斑點數。A表示利用HLA-A*02:01基 因導入小鼠的試驗結果，B表示利用HLA-A巧4:02基因導入小鼠的試驗結果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分別表示將來源于給膚小鼠的脾細胞在存在給予膚的 條件下和不存在給予膚的條件下再次刺激培養的結果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過 各膚的給予而在小鼠體內誘導的膚特異性CTL的數量。
[0058] 圖5是表示W序列編號3表示的膚的采用人外周血單核細胞的CTL誘導能力的評價 結果的圖。A表示利用來源于HLA-A*02:01陽性健康人的外周血單核細胞的試驗結果，B表示 利用來源于HLA-A巧4:02陽性健康人的外周血單核細胞的試驗結果。黑柱和白柱表示再刺 激和非再刺激的結果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過膚的刺激培養而誘導的膚特異性 CTL的數量。縱軸表示各孔中確認的斑點數，橫軸表示陽性的各孔。此外，黑柱表示在膚刺激 條件下檢測到的斑點數，白柱表示在膚非刺激條件下檢測到的斑點數(對照）。
[0059] 圖6是表示W序列編號5表示的膚的采用人外周血單核細胞的CTL誘導能力的評價 結果的圖。A表示利用來源于HLA-A*02:01陽性健康人的外周血單核細胞的試驗結果，B表示 利用來源于HLA-A巧4:02陽性健康人的外周血單核細胞的試驗結果。黑柱和白柱表示再刺 激和非再刺激的結果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過膚的刺激培養而誘導的膚特異性 CTL的數量。縱軸表示各孔中確認的斑點數，橫軸表示陽性的各孔。此外，黑柱表示在膚刺激 條件下檢測到的斑點數，白柱表示在膚非刺激條件下檢測到的斑點數(對照）。
[0060] 圖7是表示W序列編號6表示的膚的采用人外周血單核細胞的CTL誘導能力的評價 結果的圖。A表示利用來源于HLA-A*02:01陽性健康人的外周血單核細胞的試驗結果，B表示 利用來源于HLA-A巧4:02陽性健康人的外周血單核細胞的試驗結果。黑柱和白柱表示再刺 激和非再刺激的結果。即，黑柱和白柱的值的差表示通過膚的刺激培養而誘導的膚特異性 CTL的數量。縱軸表示各孔中確認的斑點數，橫軸表示陽性的各孔。此外，黑柱表示在膚刺激 條件下檢測到的斑點數，白柱表示在膚非刺激條件下檢測到的斑點數(對