4h，用自封袋放入干燥 劑，室溫保存備用。培養液吸附：取上述處理濾紙，121°C滅菌15min，將滅菌后的測試片浸入 到步驟A所配好的霉菌酵母菌特征顯色液體培養基中，浸泡5min后，將測試片用鑷子夾出， 平放在干凈的超凈工作臺上，無菌條件下烘干后，在〇-4°C的無菌冷藏箱內，保存備用； C.組裝測試片:將步驟B中所制備的測試片，裝入到無菌培養皿內，蓋好培養皿蓋后，將 培養皿置于鋁箱包裝袋中，抽真空包裝，即可得到產品。
[0032] 使用這種快速檢測霉菌和酵母菌的檢測皿時，首先，取樣品25mL(g)放入225 mL滅 菌稀釋液(磷酸鹽緩沖液或生理鹽水)的取樣器或均質杯內，制成1:10的樣品勻液，用lmL的 滅菌吸管吸取1:10樣品勻液lmL，注入含有9mL稀釋液的試管內，搖勻后得到1:100的樣品稀 釋液，依次往下稀釋。一般樣品選1~2個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水 和礦泉水等)可直接吸取原液進行檢測。其次接菌:將測試片置于平坦實驗臺面，打開培養 皿上蓋，用滅菌槍頭或滴管吸取lmL樣品勻液加到測試片上，調整測試片角度使樣品液濕潤 整張測試片，蓋上蓋即可培養。每個稀釋度接種兩片，同時取lmL稀釋液接種另一測試片作 空白對照。然后培養:將接種好的測試片放置于28±1°C培養箱中培養48-72h。最后分析檢 測結果:霉菌在測試片上呈現灰白色、黑色、藍綠色等菌落，且菌落較大呈現其自身的形態； 酵母菌在測試片上呈現綠色菌落，且菌落較小較平滑。
[0033] 為了更好的體現本發明的有益效果，發明人將本發明與國家標準檢測法，3M試紙 片法作對比檢測分析結果如下： 將培養好的酵母菌液，用滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液將其稀釋至1〇_6、1〇_7兩個梯 度，以此稀釋好的兩個梯度酵母菌液作為母液，將霉菌稀釋至ΠΓ^ΠΓ2,稀釋混勻后，母液 中同時含有霉菌和酵母菌，該混合液即為處理好的待測樣本菌液。用滅菌槍頭或滴管吸取 lmL待測樣本菌液均勻涂布在國標法推薦的平板上、3M生產的霉菌和酵母菌測試片和本 發明的檢測皿上，以lmL滅菌生理鹽水作為空白對照，在28 ± 1°C條件下，培養48h后，記錄觀 察結果如下表。
[0034] 表1不同的檢測方法檢測結果比對表(培養時間48小時，培養溫度28 ± 1°C)
將培養好的酵母菌液，用滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液將其稀釋至10-6、10-7兩個梯 度，以此稀釋好的兩個梯度酵母菌液作為母液，將霉菌稀釋至ΠΓ^ΠΓ2,稀釋混勻后，母液 中同時含有霉菌和酵母菌，該混合液即為處理好的待測樣本菌液。用滅菌槍頭或滴管吸取 lmL待測樣本菌液分別均勻涂布在國標法推薦的平板上和本發明的檢測皿上，以lmL滅菌 生理鹽水作為空白對照，在28±1°C條件下，培養66小時后，記錄觀察結果如下表2。
[0035] 表2國標法與本檢測皿測試結果比對(培養時間66小時，培養溫度28± 1°C)
通過本發明與國標法及3M霉菌酵母菌檢測結果比對后，實驗結果表明本發明檢測結果 達到國標標準，準確率達90%以上，與3M霉菌酵母菌測試結果顯示，本發明檢測結果正確率 達到3M霉菌酵母菌測試片。同時為了驗證0.05 Mol/L Triton-Tris緩沖生理鹽水處理液對 本發明的功效和作用，設計了如下對比實驗，同樣的濾紙材料隨機分成兩組，一組濾紙進行 前處理，另一組不進行任何處理，其他處理和培養條件一致，對培養好的霉菌酵母菌液進行 檢測，以生理鹽水作為空白對照。實驗檢測結果如表3。
[0036] 表3濾紙處理對試驗結果影響比對表
對比試驗表明處理后的濾紙檢測結果更準確。經過處理的濾紙，更能有效用于待測樣 品中霉菌和酵母菌的檢測。
【主權項】
1. 一種用于快速檢測霉菌和酵母菌的檢測皿，包括無菌培養皿和測試片，測試片平鋪 于無菌培養皿底部，測試片上附著有霉菌和酵母菌特征顯色液體培養基，其特征在于:培養 基的組成，每l〇〇g蒸餾水中含有:胰蛋白胨0.8g-2.0g、酵母粉0.4g-0.8g、葡萄糖lg-4g、磷 酸氫二鉀〇 · 05g-0 ·lg、氯化鈉0 · 05g-0 · 2g、磷酸二氫鉀0 · 2g-0 · 4g、硫酸鎂0 · 2g-0 · 4g、孟加 拉紅0.04g-0 .lg、氯霉素0 .lg-0.3g、N，N-二甲基甲酰胺2g-4g、酶解底物混合劑0.015g-0 · 04g〇2. 根據權利要求1所述的一種用于快速檢測霉菌和酵母菌的檢測皿，其特征在于:所述 的酶解底物混合劑由5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽與NBT按2:1-1:1比例溶解于N，N-二甲基 甲酰胺得到。3. 根據權利要求1所述的一種用于快速檢測霉菌和酵母菌的檢測皿，其特征在于:所述 的測試片是直徑為70mm的白色中速濾紙，每片濾紙使用0.05Mol/LTriton-Tris緩沖生理 鹽水處理液進行處理，處理液用量為1.0-1.5mL。4. 根據權利要求1所述的一種用于快速檢測霉菌和酵母菌的檢測皿，其特征在于:所述 的無菌培養皿是單次使用的培養皿。5. -種制備權利要求1-4任何一項所述的快速檢測霉菌和酵母菌的檢測皿的制備方 法，其特征在于，按下列步驟制備： A. 配制霉菌和酵母菌特征顯色液體培養基：取100g蒸餾水，按照配方加入:胰蛋白胨 0 · 8g-2 · 0g、酵母粉0 · 4g-0 · 8g、葡萄糖lg-4g、磷酸氫二鉀0 · 05g-0 ·lg、氯化鈉0 · 05g-0 · 2g、 磷酸二氫鉀〇. 2g-0.4g、硫酸鎂0.2g-0.4g、孟加拉紅0.04g-0.lg、加熱溶解后，采用高壓滅 菌鍋在121°C滅菌15min，冷卻至室溫后依次加入經過濾滅菌的氯霉素及酶解底物混合劑， 得到液體培養基，在〇_4°C下冷藏備用； B. 制備測試片： 濾紙片前處理：將吸附濾紙切成面積為直徑為70mm的測試片，加入1.0-1.5mL0.05Mol/LTriton-Tris緩沖生理鹽水處理后，放入37°C恒溫箱或干燥箱中干燥4h后取出，放入 含有干燥劑的自封袋中，室溫保存備用； 培養液吸附：取上述處理濾紙，121°C滅菌15min，將滅菌后的測試片浸入到步驟A所配 好的霉菌酵母菌特征顯色液體培養基中，浸泡5-10min后，將測試片用鑷子夾出，平放在干 凈的超凈工作臺上，無菌條件下烘干后，在〇_4°C的無菌冷藏箱內，保存備用； C. 組裝測試片:將步驟B中所制備的測試片，裝入到無菌培養皿內，蓋好培養皿蓋后，將 培養皿置于鋁箱包裝袋中，抽真空包裝，即可得到產品。
【專利摘要】本發明提供一種可同時用于霉菌和酵母菌快速培養和檢測的檢測皿，利用微生物生化反應的特性，將微生物胞內酶的種類及反應條件作為微生物分類鑒定的主要依據，通過在分離培養基或選擇性培養基中，加入微生物特異性酶顯色底物，當目的菌在培養基上生長時，其特異性酶就能降解顯色底物，并產生帶有特殊顏色的代謝物，使菌落形成特定的顏色或形態，從而實現樣品中微生物的培養和檢測，該檢測皿具有操作簡便、成本低廉、節省人力、判定結果簡單、檢測結果可靠、檢測時間短等優勢，檢測結果準確率達到國家標準檢測方法90%以上，可在微生物檢測中發揮重要作用。
【IPC分類】C12Q1/04
【公開號】CN105483204
【申請號】CN201510987947
【發明人】楊永菊, 陳嬌, 金幫明, 王亞娟, 楊興偉, 侯璐偉, 陸葦, 劉紅, 羅貴昆, 李平, 馮才偉, 何進, 黨娟
【申請人】貴州勤邦食品安全科學技術有限公司
【公開日】2016年4月13日
【申請日】2015年12月25日