一種用于快速檢測霉菌和酵母菌的檢測皿及制備方法
【技術領域】
[0001]本發明專利所屬的技術領域是微生物學檢測，具體涉及一種用于快速檢測霉菌和 酵母菌的檢測皿及制備方法。
【背景技術】
[0002] 霉菌和酵母菌廣泛存在于空氣、水和土壤中，絕大部分對人體無害，但有些霉菌對 人體有害，霉菌可引起食物霉變，會刺激人體消化道、胃部等，嚴重的還可對肝臟造成損傷， 造成食物中毒，危及生命安全。現行檢測技術主要有GB 4789.15-2010食品安全國家標準， 食品微生物學檢測一霉菌和酵母菌計數，該方法為平板法，具有檢測結果準確、可靠的特 點，是經典的微生物檢測和鑒定方法，然該方法耗時長、需要現配置培養基，操作步驟繁瑣， 難以滿足快檢的實際要求。
[0003] 紙片法的出現，彌補了平板法的缺點，逐步成為微生物檢測和鑒定的主要方法和 標準，2007年，Petrifilm?測試片被正式列為中國出入境檢驗檢疫行業標準，該方法正 逐漸被越來越多的食品生產加工企業及各類檢測機構所認可。目前，國內外對微生物紙片 法的研究較多，廣州天河綠洲生物化學研究中心公開了一項實用新型專利《霉菌和酵母菌 的快速檢測檢驗紙片》CN03274715.2,該專利采用底面涂布含有酶顯色劑吸水凝膠粉的上 蓋膜和吸附了培養基液的培養片組成，該產品的使用，需要進行待測菌液的涂布和蓋膜操 作，存在人為操作不當蓋膜產生氣泡及涂布不均影響目標菌生長和實驗結果判讀困難的缺 陷。濟南市產品質量監督檢驗所和山東大學公開了一項發明專利《食品包裝材料表面霉菌 的檢測方法及專用濾紙》CN200110014458.2,該發明僅適用于食品包裝材料，且只針對霉菌 檢測。湖北工業大學公開了一項發明專利《食品和餐具中大腸菌群快速檢測紙片的制備與 應用》將濾紙片放入無菌的塑模袋內，組裝測試片，存在目標菌在組裝袋中擴散生長，菌落 邊緣模糊，影響檢測結果判讀的缺點。3M創新有限公司申請了一項發明專利《用于檢測酵母 和霉菌的方法和培養裝置》201480007414.5，該培養裝置包括含有自支承基材的主體，基材 具有第一主表面和第二主表面，該培養裝置需要將待測樣品進行涂布，在不超過72小時的 培養時間，可判斷檢測結果，其缺點在于存在人工操作不當，引起涂布和蓋膜產生氣泡的可 能。3M創新有限公司還申請了 一項發明專利《快速檢測微生物的裝置》201180032280.9，該 裝置的使用依賴于待測樣品的涂布和蓋膜操作，引入了因人為操作不當，導致判讀結果有 誤的可能。
【發明內容】
[0004] 本發明要解決的問題是提供一種霉菌和酵母菌快速培養和檢測的檢測皿及其制 備方法，以簡化和加快霉菌和酵母菌的檢測鑒定，簡化實驗操作步驟，提高對微生物的檢測 效率，獲得可靠的檢測結果。
[0005] 本發明就是為了彌補現有技術的不足及滿足實際檢測的需要，在現有紙片檢測法 的基礎上，利用微生物生化反應的特性，將微生物胞內酶的種類及反應條件作為微生物分 類鑒定的主要依據，通過在分離培養基或選擇性培養基中，加入微生物特異性酶顯色底物， 當目的菌在培養基上生長時，其特異性酶就能降解顯色底物，并產生帶有特殊顏色的代謝 物，使菌落形成特定的顏色或形態，從而進行樣品中微生物的培養和檢測。本發明采用培養 皿和濾紙為載體，開發霉菌和酵母菌培養、檢測，該檢測皿將培養時間縮短到48h，菌落或 菌斑呈現立體生長，易于判讀和分析，可同時實現霉菌和酵母菌的檢測，且準確度達國標 90%以上，能夠滿足實際檢測需求。
[0006] 本發明的目的及解決其主要技術問題是采用以下技術方案來實現的：一種用于快 速檢測霉菌和酵母菌的檢測皿，包括無菌培養皿和測試片，測試片平鋪于無菌培養皿底部， 測試片上附著有霉菌和酵母菌特征顯色液體培養基； 其中所述的培養基的組成，每l〇〇g蒸餾水中含有:胰蛋白胨〇. 8g-2.0g、酵母粉0.4g-0.88、葡萄糖]^-48、磷酸氫二鉀0.058-0.]^、氯化鈉0.058-0.28、磷酸二氫鉀0.28-0.48、硫 酸鎂0.2g-0.4g、孟加拉紅0.04g-0.1 g、氯霉素0.1 g-0.3g、N，N-二甲基甲酰胺2g-4g、酶解底 物混合劑0.015g-0.04g。
[0007] 所述的酶解底物混合劑由5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽與NBT按2:1-1:1比例溶解 于N，N-二甲基甲酰胺得到。
[0008] 所述的測試片是直徑為70mm的白色中速濾紙，每片濾紙使用0.05 Mol/L Triton-Tris緩沖生理鹽水處理液進行處理，處理液用量為1.0-1.5mL。所述的無菌培養皿是單次使 用的培養皿。
[0009]這種快速檢測霉菌和酵母菌的檢測皿的制備方法，按下列步驟制備： A.配制霉菌和酵母菌特征顯色液體培養基：取100g蒸餾水，按照配方加入:胰蛋白胨 0 · 8g-2 · 0g、酵母粉0 · 4g-0 · 8g、葡萄糖lg-4g、磷酸氫二鉀0 · 05g-0 · lg、氯化鈉0 · 05g-0 · 2g、 磷酸二氫鉀〇. 2g-0.4g、硫酸鎂0.2g-0.4g、孟加拉紅0.04g-0. lg、加熱溶解后，采用高壓滅 菌鍋在121°C滅菌15min，冷卻至室溫后依次加入經過濾滅菌的氯霉素及酶解底物混合劑， 得到液體培養基，在〇_4°C下冷藏備用。
[0010] B.制備測試片： 濾紙片前處理：將吸附濾紙切成直徑為70mm的測試片，加入1.0-1.5mL 0.05 Mol/L Triton-Tris緩沖生理鹽水處理后，放入37°C恒溫箱或干燥箱中干燥4h，放入含有干燥劑的 自封袋中，室溫保存備用。
[0011] 培養液吸附：取上述處理濾紙，121°C滅菌15min，將滅菌后的測試片浸入到步驟A 所配好的霉菌酵母菌特征顯色液體培養基中，浸泡5-10min后，將測試片用鑷子夾出，平放 在干凈的超凈工作臺上，無菌條件下烘干后，在〇_4°C的無菌冷藏箱內，保存備用； C.組裝測試片:將步驟B中所制備的測試片，裝入到無菌培養皿內，蓋好培養皿蓋后，將 培養皿置于鋁箱包裝袋中，抽真空包裝，即可得到產品。
[0012] 本發明與現有技術相比具有明顯的優點和有益效果。由以上技術方案可知，具體 的與現有技術相比突出的實質性進步有以下三點： 第一、通過培養基優化，獲得一種同時適用于霉菌和酵母菌生長的培養基；以透氣性 好、吸附性強、大小合適的濾紙材料作為培養基的載體，通過濾紙的前處理，培養基的吸附 及烘干，將培養基附著在濾紙片上;通過將待測樣品直接接種于濾紙片上，實現對待測樣品 中霉菌和酵母菌的快速培養和檢測。
[0013] 第二、本發明所述的快速檢測霉菌和酵母菌的檢測皿，與現有3M Petrifilm測試 片相比，避免了由于涂布不均及蓋膜不當產生氣泡的現象，氣泡的產生和存在，對于檢測樣 品的計數結果將產生較大影響，避免了人為操作不當引起的誤差。同時，采取培養皿為載 體，利用特有的培養基配方，可實現霉菌和酵母菌立體生長，使其便于觀察和區分。
[0014] 第三、本發明所述的快速檢測霉菌和酵母菌的檢測皿，使用簡便，可以長期存放， 應用靈活的特點，可大大節省培養基配置、培養皿滅菌、清洗等處理的時間，降低了勞動強 度，縮短了檢測時間。同時，本發明檢測皿制備方法簡單、易行，能夠實現自動化生產，成本 低廉，使用方便。
【附圖說明】
[0015] 圖1不同的檢測方法檢測結果比對表1。
[0016] 圖2國標法與本檢測皿測試結果比對表2。
[0017] 圖3濾紙處理對試驗結果影響比對表3。
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