一組用于鑒定倉儲書虱的引物及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一組用于鑒定倉儲書虱的引物及其應用，屬于生物技術領域。
【背景技術】
[0002] 書風（booklice)又名紙風（paperlice)、米風（ricelice),隸屬于嚙蟲目 Psocoptera、書風科Liposcelididae、書風屬Liposcelis Motschy lsky 1852。書風屬昆蟲 體型微小，體長0. 6-1. 5_，在世界范圍廣泛分布；其大多數生活于室內，少數生活于室外， 是倉儲保護中的常見害蟲。該類害蟲具有活動能力強，取食范圍廣，生長周期短，繁殖方式 多樣，攜帶多種病菌以及抗性強和防控難度大等特點，嚴重為害倉儲物品并威脅人類健康。 書虱類害蟲可隨倉儲物遠距離傳播，隨著國際貿易及儲糧調運的日益頻繁，該類害蟲傳播 擴散風險日益增大。近年來，隨著國際貿易的日益頻繁，我國出入境檢驗檢疫部門截獲書虱 的批次逐漸增多。
[0003] 為害儲糧的世界常見倉儲書虱共計10種，其中包括嗜蟲書虱 L. entomophila(Enderlein),嗜卷書風 L. bostrychophila Badonnel,無色書風 L. decolor (Pearman)，小目艮書風 L. paeta Pearman，嚙書風 L. corrodens (Heymons)，暗 褐書風 L. brunnea Motsch μ Lsky,虛偽書風 L. mendax Pearman,皮氏書風 L. pearmani Lienhard,三色書風 L. tricolor Badonnel,紅書風 L.rufa BroadheacL
[0004] 傳統的書虱種類鑒定多以雌蟲成蟲形態特征為依據，存在專業技能要求高、耗時 長等缺點，尤其是非成蟲態昆蟲，如卵、幼蟲和蛹等的準確鑒定難以實現，給檢疫工作造成 很大困難。利用分子生物學技術進行昆蟲鑒定研究，不受標本個體發育狀態及樣品完整性 的影響，可實現高效、便捷、準確的物種鑒定。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一組用于鑒定倉儲書虱的引物及其應用。
[0006] 本發明提供一組引物，由如下（1)-(8)所示的引物對中的至少一對組成：
[0007] (1) SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2所示的DNA分子組成的引物對；
[0008] (2) SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示的DNA分子組成的引物對；
[0009] (3) SEQ ID No. 5和SEQ ID No. 6所示的DNA分子組成的引物對；
[0010] (4) SEQ ID No. 7和SEQ ID No. 8所示的DNA分子組成的引物對；
[0011] (5) SEQ ID No. 9和SEQ ID No. 10所示的DNA分子組成的引物對；
[0012] (6)SEQ ID No. 11和SEQ ID No. 12所示的DNA分子組成的引物對；
[0013] (7) SEQ ID No. 13和SEQ ID No. 14所示的DNA分子組成的引物對；
[0014] (8)SEQ ID No. 15和SEQ ID No. 16所示的DNA分子組成的引物對。
[0015] 上述引物中，所述引物由如下（1)-(8)所示的引物對組成：
[0016] (1) SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2所示的DNA分子組成的引物對；
[0017] (2) SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示的DNA分子組成的引物對；
[0018] (3) SEQ ID No. 5和SEQ ID No. 6所示的DNA分子組成的引物對；
[0019] (4) SEQ ID No. 7和SEQ ID No. 8所示的DNA分子組成的引物對；
[0020] (5) SEQ ID No. 9和SEQ ID No. 10所示的DNA分子組成的引物對；
[0021] (6) SEQ ID No. 11和SEQ ID No. 12所示的DNA分子組成的引物對；
[0022] (7) SEQ ID No. 13和SEQ ID No. 14所示的DNA分子組成的引物對；
[0023] (8) SEQ ID No. 15和SEQ ID No. 16所示的DNA分子組成的引物對。
[0024] -種鑒定或輔助鑒定倉儲書虱的試劑盒也屬于本發明的保護范圍，該試劑盒包含 上述任一所述的引物；
[0025] 所述倉儲書風為嗜蟲書風、無色書風、嚙書風、暗褐書風、虛偽書風、皮氏書風、二 色書虱和紅書虱。
[0026] -種鑒定或輔助鑒定倉儲書虱的方法也屬于本發明的保護范圍，包括如下步驟： 以待鑒定的倉儲書虱的基因組DNA為模板，分別以如下（1)-⑶任意所示的引物對為引物， 進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；如果以如下（1)所示的引物對為引物得到的PCR擴增產 物為369bp，則待鑒定的倉儲書虱候選為嗜蟲書虱，如果以如下（2)所示的引物對為引物得 到的PCR擴增產物為300bp，則待鑒定的倉儲書虱候選為無色書虱，如果以如下（3)所示的 引物對為引物得到的PCR擴增產物為200bp，則待鑒定的倉儲書虱候選為嚙書虱，如果以如 下（4)所示的引物對為引物得到的PCR擴增產物為450bp，則待鑒定的倉儲書虱候選為暗褐 書虱，如果以如下（5)所示的引物對為引物得到的PCR擴增產物為506bp，則待鑒定的倉儲 書虱候選為虛偽書虱，如果以如下（6)所示的引物對為引物得到的PCR擴增產物為293bp， 則待鑒定的倉儲書虱候選為皮氏書虱，如果以如下（7)所示的引物對為引物得到的PCR擴 增產物為257bp，則待鑒定的倉儲書虱候選為三色書虱，如果以如下（8)所示的引物對為引 物得到的PCR擴增產物為335bp，則待鑒定的倉儲書虱候選為紅書虱 ：
[0027] (1) SEQ ID No. 1和SEQ ID No. 2所示的DNA分子組成的引物對；
[0028] (2) SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示的DNA分子組成的引物對；
[0029] (3) SEQ ID No. 5和SEQ ID No. 6所示的DNA分子組成的引物對；
[0030] (4) SEQ ID No. 7和SEQ ID No. 8所示的DNA分子組成的引物對；
[0031] (5) SEQ ID No. 9和SEQ ID No. 10所示的DNA分子組成的引物對；
[0032] (6) SEQ ID No. 11和SEQ ID No. 12所示的DNA分子組成的引物對；
[0033] (7) SEQ ID No. 13和SEQ ID No. 14所示的DNA分子組成的引物對；
[0034] (8)SEQ ID No. 15和SEQ ID No. 16所示的DNA分子組成的引物對。
[0035] 上述方法中，所述PCR擴增的體系中引物的濃度比均為1:1 ;
[0036] 所述PCR擴增的程序中退火溫度均為50°C ;
[0037] 所述PCR擴增的體系均具體如下：2XPCR擴增緩沖液12. 5μ L，ddH2。9. 5μ L，模 板1 μ L，濃度為10 μ Μ的引物各1 μ L ;
[0038] 所述2XPCR擴增緩沖液的商品名稱具體為2XTaq PCR MasterMix，購自生工生物 工程（上海）股份有限公司；
[0039] 所述PCR擴增的程序均具體如下：94°C預變性3min ;94°C變性30s，50°C退火30s， 72°C延伸30s，30個循環；72°C延伸5min。
[0040] 上述任一所述的方法中，所述PCR擴增的體系中模板的質量> 5ng。
[0041] 上述任一所述的引物在制備鑒定或輔助鑒定倉儲書虱的產品中的應用也屬于本 發明的保護范圍。
[0042] 上述試劑盒在制備鑒定或輔助鑒定倉儲書虱的產品中的應用也屬于本發明的保 護范圍。
[0043] 上述任一所述的應用中，所述倉儲書虱為嗜蟲書虱、無色書虱、嚙書虱、暗褐書虱、 虛偽書風、皮氏書風、二色書風和/或紅書風。
[0044] 本發明的特點如下：
[0045] (1)采用本發明提供的引物對倉儲書虱進行種類鑒定快速高效，鑒定結果準確可 靠、檢測靈敏度高，且可以實現高通量檢測。
[0046] (2)與傳統形態鑒定方法相比，本發明的鑒定對象不受種類性別、發育階段和形態 鑒定特征完整程度的影響。傳統形態鑒定方法一般只針對雌蟲成蟲的形態特征，需要玻片 標本制作技能，對樣品完整性等要求高。
[0047] (3)鑒定過程操作簡便，經濟易行，可標準化，操作簡便且所需費用較低，便于無專 業分類學知識背景的工作人員操作與運用。
【附圖說明】
[0048] 圖1為用于鑒定嗜蟲書虱的引物對entoF3和entoR2的特異性檢測結果。
[0049] 圖2為用于鑒定無色書虱的引物對decF2和decR4的特異性檢測結果。
[0050] 圖3為用于鑒定嚙書虱的引物對LcF2和LcR3的特異性檢測結果。
[0051] 圖4為用于鑒定暗褐書虱的引物對bruFl和bruR2的特異性檢測結果。
[0052] 圖5為用于鑒定虛偽書虱的引物對mendFl和mendR2的特異性檢測結果。
[0053] 圖6為用于鑒定皮氏書虱的引物對pearFl和pearR2的特異性檢測結果。
[0054] 圖7為用于鑒定三色書虱的引物對triFl和triR2的特異性檢測結果。
[0055] 圖8為用于鑒定紅書虱的引物對rufaFl和rufaRl的特異性檢測結果。
[0056] 圖9為用于鑒定嗜蟲書虱的引物對entoF3和entoR2的靈敏性檢測結果。
[0057] 圖10為用于鑒定無色書虱的引物對decF2和decR4的靈敏性檢測結果。
[0058] 圖11為